氢化物-原子荧光光谱法测定富硒酵母中有机硒和无机硒

2017-01-08付志欢吴国杰舒绪刚周新华邱桂雄

饲料工业 2017年10期

■ 占峰付志欢林羽周萌* 吴国杰舒绪刚周新华邱桂雄

(1.仲恺农业工程学院化学化工学院，广东广州510225；2.广州天科生物科技有限公司，广东广州510627)

硒具有抗氧化、抗肿瘤等多种生理功能，是动物的重要营养元素之一，广泛用于饲料添加剂中，硒的主要添加形式有无机亚硒酸钠盐和有机酵母硒，亚硒酸钠毒性高、不易被动物吸收利用，易造成浪费和环境污染，而酵母硒具有代谢周期长，生物利用率高，毒性低等特点[1]。因此，了解酵母硒中无机硒和有机硒含量具有重要意义。

目前，酵母硒作为一种重要饲料添加剂，总硒的测定方法主要有二氨基联苯紫外分光光度法[2]、原子荧光分光光度法[3-6]、电感耦合等离子法[7-8]，其中氢化物原子荧光光度法已引入国家标准法中；有机硒的测定方法目前还没有唯一标准，报道较多的主要有质谱-高效液相色谱法[9-10]、衍生-高效液相色谱法[11]等，但这些方法对仪器要求较高，测试周期较长，且成本较高不适合广泛推广。本研究以酸热法提取硒酵母中无机硒并结合HG-AFS方法测定硒酵母中总硒、无机硒含量，并通过总硒含量减去无机硒含量的方法间接计算出有机硒含量，该法操作简单，用时较短，期望能为酵母硒中有毒无机硒测定提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

硼氢化钾，盐酸、硝酸、高氯酸（均为优级纯），高纯水，硒标准溶液。

1.2 仪器与设备

AFS-2000原子荧光分光光度计（北京科创海光有限公司），数显恒温浴锅（上海申胜生物技术有限公司），超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），恒温电热板（Lab-Tech EH20B），低速离心机（金坛鸿科仪器HDL-4）。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制

混合酸：硝酸∶高氯酸=4∶1（配比与样品有关）；硼氢化钾溶液：称取1 g氢氧化钠加200 ml高纯水使其充分溶解，再加入4 g硼氢化钾混合均匀，现配先用。

1.3.2 总硒含量测定方法

按GB/T13883—2008《饲料中硒的测定》方法测定。

1.3.3 无机硒含量测定方法

准确称取0.1 g硒酵母于100 ml三角瓶中加入10 ml 3 mol/l的盐酸，超声5 min，使酵母充分溶解，再置于沸水浴中10 min后迅速冷却，4 000 r/min离心10 min，取上清液，酵母细胞沉淀重复利用盐酸提取2次，合并上清液再置于电热板上煮沸2 min，稀释定容。

1.3.4 有机硒含量测定方法

有机硒含量通过差减法（总硒含量减去无机硒含量）测定。

2 结果分析

2.1 仪器最佳工作条件

仪器工作负高压：280 V；空心阴极灯电流：80 mA；载气流量：400 ml/min；屏蔽气流量：900 ml/min；原子化炉高度：8 mm；读数时间：15 s；延迟时间：3 s；载液：5%HCl；还原剂：2%KBH4+0.5%NaOH。

2.2 仪器精密度与检出限(见表1)

表1 仪器精密度

按照仪器的最佳条件，确定硒的最佳线性范围为 0～40 μg/l，曲线的相关系数 R2=0.999 9。通过对10 μg/l标准硒测定5次，得到RSD=2.8%，该方法有较好的精密度。同时，将标准空白连续测定11次，按3倍标准偏差得到检出限（3δ）为0.020 1 μg/l。

2.3 不同浓度盐酸对无机硒提取效果的影响

由于酵母细胞壁较厚，在沸水浴中，盐酸能有效的破坏酵母细胞璧的结构，使其通透性发生变大或甚至破裂，胞内小分子物质溢出，而本试验考察了不同浓度盐酸对无机硒提取效果的影响，结果如图1所示，当盐酸浓度在3 mol/l时，提取量达到较大，并通过重复称取5份酵母硒测定无机硒含量，如表2，其相对偏差在2.85%，方法较为稳定。