丹红注射液对糖尿病肾病患者血小板CD62p、PAC-1表达及肾功能的影响

王晓蕾，孟莉莉，吴炜，姜明德，李明霞，任卫东

(1张家口市下花园区煤矿医院，河北张家口075000；2河北北方学院附属第一医院)

丹红注射液对糖尿病肾病患者血小板CD62p、PAC-1表达及肾功能的影响

王晓蕾1，孟莉莉1，吴炜1，姜明德1，李明霞2，任卫东2

(1张家口市下花园区煤矿医院，河北张家口075000；2河北北方学院附属第一医院)

目的 探讨丹红注射液对糖尿病肾病(DN)患者血小板活化依赖性颗粒表面膜蛋白(CD62p)和血小板激活复合物-1(PAC-1)表达的影响，探讨丹红注射液改善DN患者肾功能的作用机制。方法 选取病程10年以上的DN患者95例，随机分为观察组50例、对照组45例。对照组给予常规降糖、降压、降脂药物治疗，观察组在常规治疗基础上应用丹红注射液30 mL溶入生理盐水250 mL静脉滴注治疗，1次/d。治疗2周后评价两组临床疗效。治疗前后抽取两组晨起空腹静脉血，检测空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、BUN及Cr水平，行流式细胞术检测血小板CD62p、PAC-1的表达。治疗前后留取24 h尿液，采用免疫法行24 h尿白蛋白定量检测尿蛋白排泄率(UAER)。结果 对照组、观察组总有效率分别为64.4%、90.0%，治疗组总有效率高于对照组(P<0.01)。与治疗前比较，对照组治疗后FPG、2 hPG、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)；观察组治疗后FPG、2 hPG、HbA1c、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)。与对照组治疗后比较，观察组治疗后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高(P均<0.05)。与治疗前比较，观察组治疗后血小板CD62p、PAC-1阳性表达率均降低(P均<0.05)。与对照组治疗后比较，观察组治疗后血小板CD62p、PAC-1阳性表达率均降低(P均<0.05)。结论 丹红注射液可明显抑制DN患者血小板CD62p、PAC-1的表达，可能是其改善DN患者肾功能的机制之一。

糖尿病肾病；丹红注射液；血小板；活化依赖性颗粒表面膜蛋白；血小板激活复合物-1；肾功能

糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症。据统计，20%的2型糖尿病患者合并DN，极易进展为慢性肾功能衰竭等终末期肾病，甚至导致患者死亡[1,2]。DN的发生、发展除与遗传因素、糖代谢异常、氧化应激等多种因素有关，血小板活化引起的微血栓形成也是重要因素之一[3]。近年研究发现，血小板活化依赖性颗粒表面膜蛋白(CD62p)和血小板激活复合物-1(PAC-1)在DN发生、发展中具有重要作用。CD62p是选择素家族黏附分子，定位于血小板-∂颗粒膜表面，血小板活化后，其质膜上的糖蛋白发生分子构象改变，促进血小板间的黏附及聚集[4]。PAC-1是GPⅡb/Ⅲa特异性单克隆抗体，可与活化血小板上的GPⅡb/Ⅱa特异性结合，是反映血小板活化的重要早期标志物[5]。丹红注射液主要包含丹参和红花黄素，丹参有较强的抗血小板凝集和促进纤维蛋白溶解作用，可有效改善微循环；红花黄素能抑制血小板黏附和凝集，改善血液黏稠度，减少组织缺血，抑制DN的进一步发展。2014年12月～2015年12月，我们对DN患者应用丹红注射液治疗，观察对患者血糖、肾功能及血小板CD62p、PAC-1表达的影响，探讨丹红注射液改善DN患者肾功能的作用机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取同期河北北方学院附属第一医院、张家口市下花园区煤矿医院住院的病程10年以上的DN患者95例，男55例、女40例，年龄(55.0±7.8)岁，糖尿病病程(15.0±4.6)年，伴高血压病(1～2级)、高脂血症，均符合2006年WHO制定的糖尿病诊断标准：空腹血糖(FPG)均>7.0 mmol/L，葡萄糖耐量试验(OGTT)试验餐后2 h血糖(2 hPG)≥11.1 mmol/L。均符合2007年中华中医药学会肾病分会制定的DN诊断标准[6]：6个月内至少连续两次以上尿蛋白排泄率(UAER)维持在20～200 μg/min，并排除因其他原发性肾脏病、心力衰竭、肿瘤等引起的蛋白尿排泄增加因素。排除标准：合并慢性心力衰竭、心肌梗死、急性脑血管病、严重肝功能异常、尿毒症、库欣综合征、恶性肿瘤等患者。将患者随机分为观察组50例、对照组45例，两组一般资料有可比性。本研究经我院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 治疗方法 对照组给予常规药物治疗，包括应用二甲双胍降糖，应用硝苯地平、依那普利等降压，应用阿托伐他汀等降脂治疗。观察组在常规治疗基础上应用丹红注射液30 mL溶入生理盐水250 mL静脉滴注，1次/d。两组均治疗2周。

1.3 临床疗效评价 治疗后参照《中药临床研究的指导原则》[8]评价临床疗效。显效为临床症状明显改善，24 h尿蛋白下降≥70%；有效为临床症状有改善，24 h尿蛋白下降30%～70%；无效为症状无改善，24 h尿蛋白下降≤30%。以显效+有效计总有效率。

1.4 血糖及肾功能指标检测 治疗前后抽取两组晨起空腹静脉血3 mL，肝素抗凝，3 000 r/min离心后检测血FBG、2 hPG、糖化血红蛋白(HbA1c)、BUN及Cr水平。

1.5 血小板CD62p、PAC-1表达检测 治疗前后抽取两组空腹静脉血3 mL，置于2%EDTA抗凝试管，行流式细胞术检测血小板CD62p、PAC-1的阳性表达率。

1.6 24 h尿白蛋白定量检测 治疗前后留取24 h尿液，采用免疫法行24 h尿白蛋白定量检测UAER。

2 结果

2.1 两组临床疗效比较 对照组显效12例、有效17例、无效16例、总有效率64.4%(29/45)，观察组分别为19、26、5例及90.0%(45/50)，治疗组总有效率高于对照组(P<0.01)。

2.2 两组治疗前后血糖、肾功能指标比较 与治疗前比较，对照组治疗后FPG、2hPG、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)；观察组治疗后FPG、2hPG、HbA1c、BUN及Cr水平均降低(P<0.05或0.01)，UAER增高(P<0.05)。与对照组治疗后比较，观察组治疗后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高(P均<0.05)。见表1。

2.3 两组治疗前后血小板CD62p、PAC-1表达比较 与治疗前比较，观察组治疗后血小板CD62p、PAC-1阳性表达率均降低(P均<0.05)。与对照组治疗后比较，观察组治疗后血小板CD62p、PAC-1阳性表达率均降低(P均<0.05)。见表1。

表1 两组治疗前后血糖、肾功能指标及血小板CD62p、PAC-1表达比较

注：与同组治疗前比较，#P<0.05，△P<0.01；与对照组治疗后比较，*P<0.05。

3 讨论

近年来，DN的发病率和患病率逐年升高，且有年轻化趋势。据统计，2012年在美国透析患者中1/3的原发病是糖尿病，我国糖尿病患者中因糖尿病引起的终末期肾病、慢性肾衰竭的比例也逐年提高[7]。在DN的发展过程中，一旦出现肾功能损害，发生持续性蛋白尿和肾小球滤过率降低，则病情难以逆转。因而，及早干预治疗对于抑制DN进展、改善肾功能具有非常重要的意义。

丹红注射液内含丹参和红花等提取物，有活血化瘀、通络止痛之功效。丹参有肝素样作用，能抑制血小板聚集，激活纤溶，抗微血栓形成，促进血管内皮细胞修复；能纠正脂代谢紊乱，降低内皮素水平，升高NO含量，有效改善血液流变学指标[8]。红花内含红花黄素，能通过抑制由二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集，抑制凝血；通过增强纤溶酶的活性促进纤维蛋白原溶解而发挥抗血栓的功效[9]。研究显示，丹红注射液可通过抑制核因子κB(NF-κB)、下调TNF-α、IL-6等炎性因子减缓DN的进展，从而保护肾脏功能。丹红注射液也可通过降低DN患者血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平，缓解肾血管张力，增加肾血流量，减少尿白蛋白排泄率，延缓DN病程的进展[10]。本研究发现，与对照组治疗后比较，观察组治疗后HbA1c、BUN及Cr水平均降低，UAER增高，提示在常规降糖治疗基础上，给予丹红注射液治疗能更有效地控制血糖、改善肾功能，抑制DN的进一步发展。

CD62p系选择素家族黏附分子重要成员，定位于血小板α颗粒和血管内皮细胞中。正常情况下，CD62p仅少量表达于血小板，当长期处于高血糖状态时，CD62p可快速、大量、稳定地表达在血小板膜表面，通过凝集素等细胞表面糖复合物相互作用，使细胞黏附力增强，介导活化的内皮细胞与中性粒细胞、单核细胞亚群等的黏附，参与血栓形成和炎症反应[11]。PAC-1是血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体，是Ca2+依赖性异构二聚体。正常情况下PAC-1与配体结合力较低，在高血糖刺激下，血小板活化，PAC-1在质膜上表达增加，构象发生改变，与纤维蛋白原及相应配体亲和力增加，诱导促血小板黏附及相互聚集，促进血栓形成，因而二者表达增加成为血小板活化的早期特异性标志物[12]。李颖等[11]研究发现，血清细胞黏附分子、CD62P、PAC-1在尿蛋白正常、微量蛋白尿、高量蛋白尿的糖尿病患者中的表达依次升高，证实血清细胞黏附分子、CD62P、PAC-1与DN的发生、发展密切相关。李云婷等[13]研究发现，早期DN患者血清CD62P、PAC-1表达高于单纯糖尿病患者，而单纯糖尿病患者则高于健康人群，证实CD62P、PAC-1可早期预测糖尿病患者肾脏微血管病变的发生、发展，认为二者可成为糖尿病早期肾病微血管病变的诊断及治疗靶点。本研究发现，与对照组治疗后比较，观察组治疗后血小板CD62p、PAC-1阳性表达率均降低，提示丹红注射液能明显抑制血小板活化，可能与其改善肾功能、抑制DN进一步发展有关。

总之，丹红注射液治疗DN临床疗效较好，其改善肾功能作用可能与抑制血小板CD62p、PAC-1表达，从而抑制血小板活化有关。

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河北省卫生计生委医学科学研究重点课题计划项目(20150055)。

任卫东(E-mail: yfynfmrwd@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.46.012

R587.1；R289

B

1002-266X(2016)46-0044-03

2016-04-10)