运脾止泻汤对脾虚型迁延性腹泻患儿肠道菌群调整作用的临床研究※

王 静 梁山玉 杨 燕

(广东省深圳市儿童医院中医科，广东 深圳 518038)

运脾止泻汤对脾虚型迁延性腹泻患儿肠道菌群调整作用的临床研究※

王 静 梁山玉 杨 燕1

(广东省深圳市儿童医院中医科，广东 深圳 518038)

目的 观察运脾止泻汤对脾虚型迁延性腹泻患儿肠道菌群的调整治疗作用。方法 将60例脾虚型迁延性腹泻患儿随机分为2组，治疗组30例予运脾止泻汤治疗，对照组30例予蒙脱石散治疗，2组疗程均为7 d。观察2组治疗前后粪便pH值、粪便涂片球杆比及肠道菌群数量变化。另选同期健康体检小儿30例作为正常组。结果 治疗前治疗组和对照组患儿粪便pH值分布在6～8，治疗组pH值≥7者占77%，对照组pH值≥7者占70%；正常组小儿粪便pH值分布在5～6.5，pH值≤5.5者占84%。治疗前治疗组和对照组患儿粪便pH值与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组与对照组患儿粪便pH值比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后粪便pH值与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前治疗组和对照组患儿粪便涂片球杆比分布在2/8～8/2 ，治疗组球菌≥40%者占90.0%，对照组球菌≥40%者占96.5%；正常组小儿粪便涂片球杆比分布在1/9～3/7。治疗前治疗组与对照组患儿粪便涂片球杆比与正常组小儿比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组和对照组患儿粪便涂片球杆比比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后粪便涂片球杆比与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗前除肠球菌，其余肠道菌群数量与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，对照组治疗前肠道菌群数量与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后治疗组和对照组肠道菌群数量比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后肠道菌群数量与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 运脾止泻汤对脾虚型迁延性腹泻患儿的肠道菌群失调具有调整治疗作用。

辨证分型；腹泻；中药疗法；慢性病

小儿腹泻是多发生于2岁以下小儿的常见病，其中又以脾虚型迁延性腹泻最为常见，是影响小儿生长发育的重要因素之一，也是临床治疗的难题。中医药治疗脾虚型迁延性腹泻历史悠久，疗效可靠。目前，儿科领域尚缺乏中药对于脾虚型迁延性腹泻在肠道微生态系统调整方面的研究[1-2]。2011-09—2012-08，我们应用运脾止泻汤治疗小儿脾虚型迁延性腹泻30例，并与蒙脱石散治疗30例对照，观察对患儿肠道菌群的影响，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部60例均为广东省深圳市儿童医院中医科门诊患儿，随机分为2组。治疗组30例，男 16 例，女 14 例；其中3个月～1岁7例，1～2岁 12 例，2～3岁 11 例；平均身高(83.75±10.60) cm；平均体质量(11.24±2.14) kg；平均病程(14.1±3.2) d。对照组30例，男 17 例，女 13 例；3个月～1岁8例，1～2岁10例，2～3岁12例；平均身高(83.15±11.12) cm，平均体质量(11.3±2.31) kg；平均病程(15.0±2.9) d。同时选取广东省深圳市儿童医院保健科健康体检小儿30例为正常组，男15例，女15例；其中3个月～1岁6例，1～2岁13例，2～3岁11例；平均身高(84.20±10.16) cm，平均体质量(11.54±2.23) kg。3组性别、年龄、身高、体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例选择

1.2.1 西医诊断标准 参照《诸福棠实用儿科学》[3]中迁延性腹泻的诊断标准。①临床表现：大便性状有改变，呈稀便、水样便、黏液便或脓血便；大便次数比平时增多。②病程：2周～2个月。③实验室检查：食物不耐受实验为阳性。

1.2.2 中医诊断标准 参照《中药新药临床研究指导原则(试行)》[4]辨证为脾虚型，表现为①主证：久泄不止，或反复发作，大便稀薄，或水样，含奶瓣或不消化食物残渣。②次证：神疲纳呆，面色少华，舌质偏淡，苔薄腻，脉弱无力。

1.2.3 纳入标准 ①符合上述中、西医诊断标准及脾虚型中医辨证标准。②年龄3个月～3岁，性别不限。③食物不耐受实验为阳性。

1.2.4 排除标准 ①细菌性痢疾、轮状病毒肠炎、霍乱、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食饵性腹泻。②合并有严重的肝、肾、心血管和血液系统等原发性疾病。

1.3 治疗方法

1.3.1 治疗组 予运脾止泻汤。药物组成：肉豆蔻9 g，丁香1 g，赤石脂9 g，茯苓9 g，黄连3 g，寒水石9 g，莲子6 g。每日1剂，水煎2次， <1岁20 mL，1～3岁30 mL，早、中、晚3次口服。

1.3.2 对照组 予蒙脱石散[博福-益普生(天津)制药有限公司，国药准字H20000690]，<1岁3 g/d，1～2岁3～6 g/d，>2岁6～9 g/d，均分早、中、晚3次口服。

1.3.3 疗程及其他 2组疗程均为7 d，根据患儿病情可给予口服补液盐或静脉补液纠正脱水及退热等对症处理。

1.4 观察指标及方法 采集2组患儿及正常组小儿新鲜的自然排出的大便1 g置于密闭的无菌便盒中，常温下快速(最好10 min内)送检。观察其性状、颜色，测pH值，涂片革兰染色检查球菌与杆菌所占比例，同时做细菌培养。

1.4.1 粪便pH值测定 pH试纸(上海化学试剂总厂试剂三厂)的测试范围为5.5～9.0，取试纸1条浸入粪便中，30 s后取出与标准比色卡比较得出pH值。

1.4.2 粪便涂片 用无菌棉签挑取新鲜粪便直接涂抹在洁净的载玻片上，以30 °～40 °角匀速推片，面积约( 1～1.5) cm×2 cm，自然干燥后在酒精灯火焰上通过3次固定，革兰染色，油镜下计数1 000个细菌，计算球菌与杆菌的比例(简称球杆比)。

1.4.3 肠道菌群检测 ①标本的称量和稀释：在称取标本前，分别在9个灭菌离心管内加入0.9%氯化钠注射液0.9 mL待用。用天平称0.1 g粪便于离心管中，加入0.9%氯化钠注射液0.9 mL，在振荡器上混合均匀，将标本稀释呈系列10-1、10-2、10-3……10-9，连同原液共10个稀释度；②接种：取上述标本系列稀释液0.01 mL分别接种于用于培养双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌、大肠杆菌和肠球菌的TPY、MRSA、KV、EMB、PZ选择性培养基上，每种稀释度接种3滴，计数时取其菌落的平均数；③培养：将TPY、MRSA、KV培养基放在厌氧罐中，放入厌氧产气袋封闭，再置于37 ℃的孵育箱中培养48 h，将EMB、PZ培养基直接置于37 ℃的孵育箱中培养24 h；④菌落计数方法：确定目的菌后，采用平板活菌计数法[5]，按活菌计数公式计数，结果以每g粪便湿质量中菌落形成单位的对数值表示(1gCFU/g)。

2 结 果

2.1 治疗组、对照组治疗前后粪便pH值比较 见表1。

表1 治疗组、对照组治疗前后粪便pH值比较 例(%)

与正常组比较，*P<0.05；与对照组治疗后比较，△P<0.05

由表1 可见，治疗前治疗组和对照组患儿粪便pH值分布在6～8，治疗组pH值≥7者占77%，对照组pH值≥7者占70%；正常组小儿粪便pH值分布在5～6.5，pH值≤5.5者占84%。治疗前治疗组和对照组患儿粪便pH值与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组与对照组患儿粪便pH值比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后粪便pH值与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 治疗组、对照组治疗前后粪便涂片球杆比比较 见表2。

表2 治疗组、对照组治疗前后粪便涂片球杆比比较 例(%)

与正常组比较，*P<0.05；与对照组治疗后比较，△P<0.05

由表2可见，治疗前治疗组和对照组粪便涂片球杆比分布在2/8～8/2 ，治疗组球菌≥40%者占90.0%，对照组球菌≥40%者占96.5%；正常组小儿粪便涂片球杆比分布在1/9～3/7。治疗前治疗组和对照组粪便涂片球杆比与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组和对照组粪便涂片球杆比比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后粪便涂片球杆比与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 治疗组、对照组治疗前后肠道菌群数量比较 见表3。

表3 治疗组、对照组治疗前后肠道菌群数量比较

肠道菌群治疗组(n=30)治疗前治疗后对照组(n=30)治疗前治疗后正常组(n=30)肠球菌7.063±1.3585.721±0.778△6.153±0.958*6.136±0.8657.301±1.078乳酸杆菌7.588±1.319*10.080±1.270△7.316±1.145*8.295±1.14810.110±0.980双歧杆菌7.444±1.377*9.732±1.704△7.054±1.275*7.908±1.37910.121±1.158类杆菌7.729±0.595*8.363±0.239△7.333±0.349*7.911±0.35610.948±1.258肠杆菌8.656±1.229*6.903±1.215△8.096±0.624*8.024±0.6295.928±0.858

与正常组比较，*P<0.05；与对照组治疗后比较，△P<0.05

由表3可见，治疗组治疗前除肠球菌，其余肠道菌群数量与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，对照组治疗前肠道菌群数量与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后治疗组和对照组肠道菌群数量比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后肠道菌群数量与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

迁延性腹泻病因较复杂，与感染、食物过敏、乳糖不耐受、免疫功能低下及营养不良等相关。正常人体肠道内pH值多为5～6.5，肠道球杆比1/9～3/7，杆菌占明显优势。腹泻迁延不愈，肠道内双歧杆菌等有益的优势菌减少，对乳糖的分解减弱，酸性产物减少，肠道内pH值上升，对有害菌的抑制作用下降，过路菌或条件致病菌如肠球菌、肠杆菌等异常繁殖，球杆比升高，导致肠道菌群失调[6]。蒙脱石散临床适用于成人及儿童急、慢性腹泻，对消化道黏膜具有很强的覆盖保护能力，修复、提高黏膜屏障对攻击因子的防御功能，具有平衡正常菌群和局部止痛作用。主要药理为： ①覆盖消化道黏膜，与黏液蛋白结合，增强黏液屏障，起到防止胃蛋白酶、胆盐、溶血卵磷酯、非类固醇类抗炎药、酒精及各种病毒、细菌及其毒素对消化道黏膜的侵害作用，可维护消化道的正常生理功能，同时还具有降低结肠过分敏感性的作用。②促进损伤的消化道黏膜上皮再生，修复损伤的细胞间桥，促使细胞紧密连接。③吸附消化道内气体和各种攻击因子，并使之失去致病作用，如轮状病毒和致病性大肠杆菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌及其所产生的毒素。④平衡正常菌群，提高消化道免疫功能。⑤对消化道局部有止血作用(通过激活凝血因子Ⅶ和Ⅷ)。

小儿腹泻属中医学泄泻范畴，病位在脾胃，日久不愈者多有脾胃虚弱，不能腐熟水谷，水谷精微与粪便合污而下，表现为大便稀溏、次数增加、食欲不振、形体消瘦等一系列临床表现。脾气虚可导致或加重肠道菌群失衡[7-8]，故健运脾气止泻为治疗小儿脾虚型迁延性腹泻的关键治则。

运脾止泻汤由已故全国著名中医儿科专家王鹏飞教授针对脾虚泻这一证型创立[9-10]。方中肉豆蔻温中止泻，赤石脂主涩，丁香降逆行气，茯苓益气健脾，黄连清热燥湿，寒水石利水止渴，莲子补脾止泻。诸药共用，标本兼治，共奏运脾止泻之功。通过大鼠实验观察，运脾止泻汤可以通过促进胃内蛋白质消化功能，促进小肠吸收功能，抑制胃肠运动，抑制肠黏膜分泌，修复小肠微绒毛等环节达到止泻作用[11]。近年来有关中药对肠道菌群作用的研究发现，健脾中药对脾虚小鼠肠道菌群的失调具有一定的调节功能，对不同原因引起的动物胃肠道菌群失调具有调节和改善功能[12]。健脾益气类中药经现代药理研究认为其中含有大量苷类和糖类物质及多种微量元素，这些苷类和糖类物质直接促进益生菌生长，恢复肠道正常菌群[13-14]。

本研究结果发现，治疗前治疗组、对照组的粪便常规检查中，pH值全部≥6，肠道环境偏碱，球杆比则分布在3/7～8/2，有明显球杆比倒置现象；同时进行的肠道菌群检测中，肠杆菌、肠球菌等有害菌数量显著增多，双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌等有益的优势菌数量显著减少；以上均与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。这说明患有脾虚型迁延性腹泻的患儿同时存在肠道菌群紊乱现象，脾虚证与肠道菌群紊乱密切相关。而治疗后治疗组患儿pH值、球杆比、肠道主要菌群种类及数量明显改善，与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明经中药治疗后患儿粪便pH值趋于正常，肠球菌、肠杆菌数量明显减少，双歧杆菌、类杆菌及乳酸杆菌明显增多，接近同龄正常儿童的肠道内环境，球杆比基本恢复正常。对照组患儿治疗前后肠道菌群数量无明显改善，提示运脾止泻汤疗效优于西药蒙脱石散。脾虚型迁延性腹泻存在肠道菌群失衡，运脾止泻汤对于改善患儿大便次数、性状，改善和调节患者肠道菌群具有一定疗效，但具体发生作用的药物有效成分还有待深入研究。

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(本文编辑：习 沙)

Adjustment effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea

WANGJing*,LIANGShanyu,YANGYan.

*DepartmentofTraditionalChineseMedicine,ShenzhenChildren'sHospitalinGuangdongProvince,Guangdong,Shenzhen518038

Objective To observe the adjustment and therapeutic effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea. Methods 60 children with spleen-deficiency type protracted diarrhea were randomly divided into two groups. 30 cases in treatment were treated by decoction for activating spleen and anti-diarrhea, and 30 cases in control group were treated by montmorillonite powder, continuously treatment for 7 d. The feces pH, the proportion of cocci and bacilli of feces smear, and the intestinal microflora before and after treatment were observed in two groups. Another 30 healthy children were conducted as the normal group. Results The feces pH before treatment was distributed on 6 to 8 in two groups. The pH greater than or equal to 7 account for 77% and 70% of the treatment group and control group, respectively. The feces pH in normal group was distributed on 5 to 6.5, and the pH over than or equal to 5.5 account for 84%. The feces pH before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and normal group (P>0.05). The proportion of cocci and bacilli of feces smear was distributed on 2/8 to 8/2 before treatment in treatment group and control group, and the coccus greater than or equal to 40% account for 90% and 96.5% in treatment and control group, respectively. The proportion of cocci and bacilli in normal group was distributed on 1/9 to 3/7. The proportion of cocci and bacilli before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and normal group (P>0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between treatment and normal group (P<0.05), except the enterococcus. There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between control and normal group (P<0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora after treatment between treatment and control group (P<0.05), and there were no statistical differences between treatment and normal group (P>0.05). Conclusion Decoction for activating spleen and anti-diarrhea has adjustment effects on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea.

Syndrome differentiation; Diarrhea; Traditional Chinese herbs therapy; Chronic disease

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.10.007

※ 项目来源：2011年深圳市科技计划项目(医疗卫生类)(编号：201103145)

王静(1976—)，女，副主任医师，学士。从事中医儿科临床工作。

R442.2；R725.746.205；R289.6

A

1002-2619(2016)10-1474-05

2014-06-27)

1 首都医科大学附属北京儿童医院中医科，北京 100045