HPLC法测定苯酚消毒液和复方薄荷脑醑中苯酚的含量

冯倩倩，陈 飞，安靖霏，刘皈阳

HPLC法测定苯酚消毒液和复方薄荷脑醑中苯酚的含量

冯倩倩，陈 飞，安靖霏，刘皈阳*

目的 建立HPLC法测定苯酚消毒液和复方薄荷脑醑中苯酚的含量。方法 色谱柱：Agilent ZorBax SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相：甲醇-水(40∶60)；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min；进样量为10 μL。结果 苯酚在10.08～101.6 μg/mL范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y=9.515 X+0.288 9(r=1.000)；平均回收率分别为99.08%、99.29%，RSD分别为0.79%、0.66%。结论 该方法具有良好的准确度、精密度、专属性，能较好地控制苯酚消毒液和复方薄荷脑醑的质量。

苯酚消毒液；复方薄荷脑醑；苯酚；HPLC；含量测定

0 引言

苯酚消毒液和复方薄荷脑醑均为含苯酚的医院制剂，分别为《中国医院制剂规范》西药制剂第2版外用溶液剂和醑剂项下的收录品种，苯酚消毒液主要用于金属器械浸泡消毒，复方薄荷脑醑主用于小儿皮肤止痒[1]。苯酚作为酚类有机物，具有杀菌、消毒、防腐的作用。但苯酚有毒，对皮肤、黏膜有强烈的腐蚀、刺激作用，需要进行有效的质量控制，确保制剂能够发挥相应的作用，同时避免不良反应的发生。另外，因苯酚具有一定的挥发性，环境因素对制剂的影响较大，因此，有必要建立合适的质量控制方法，监测制剂中苯酚的含量变化[2]。目前，原标准中苯酚项下的含量检测方法均为溴量法，在操作过程中需要用到溴液和易制毒试剂三氯甲烷，且操作复杂，步骤繁琐，影响因素多，试验误差较大，且溴液在标准温度下易挥发为有毒的溴蒸汽，会对分析测试人员的身体健康产生不良影响。为更好地控制制剂质量，本文参照相关文献[3-8]建立HPLC法测定苯酚消毒液和复方薄荷脑醑中苯酚的含量，方法专属性强，结果准确可靠，操作简便快速。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪：包括四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站；梅特勒-托利多MS105DU型电子天平；赛默飞Evolution 201型紫外分光光度计。

1.2 试药 苯酚对照品(批号：100509-201203，中国食品药品检定研究院，供含量测定用)；薄荷脑(批号：150901，南通薄荷厂有限公司)；乙醇(批号：20051001，北京贞玉民生药业有限公司)；碳酸氢钠(批号：150107，河北华晨药业有限公司)；甘油(批号：20140616，浙江遂昌惠康药业有限公司)；复方薄荷脑醑(批号：160218、160219、160220，解放军总医院第一附属医院)；苯酚消毒液(批号：160213、160214、160215，解放军总医院第一附属医院)；甲醇为色谱纯；实验用水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择 色谱柱：Agilent ZorBax SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(40∶60)；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取苯酚对照品100.8 mg，置100 mL量瓶，用水溶解并定量稀释制成每1 mL中含1.008 mg的溶液，作为对照品储备液。再精密量取上述对照品储备液5 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为50.40 μg/mL的苯酚对照品溶液。

2.2.2 苯酚消毒液供试品溶液的制备 精密量取苯酚消毒液2.5 mL置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，再精密量取上述稀释液5 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得苯酚消毒液供试品溶液。

2.2.3 复方薄荷脑醑供试品溶液的制备 精密量取复方薄荷脑醑1 mL置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得复方薄荷脑醑供试品溶液。2.2.4 阴性对照溶液的制备 分别按处方比例制备不含苯酚的苯酚消毒液和复方薄荷脑醑阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 依次分别精密量取苯酚对照品溶液、苯酚消毒液供试品溶液、复方薄荷脑醑供试品溶液、苯酚消毒液阴性对照溶液和复方薄荷脑醑阴性对照溶液，按“2.1”项下液相色谱条件注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，苯酚消毒液阴性对照溶液和复方薄荷脑醑阴性对照溶液在苯酚对照品峰处均无干扰。见图1。

图1 苯酚高效液相色谱图

2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.2.1”项下对照品储备液0.5、2.5、5、10 mL，置50 mL量瓶中；量取2.5 mL置于100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为10.08、25.20、50.41、100.8、201.6 μg/mL的系列溶液。按“2.1”项下色谱条件依次注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以苯酚浓度(X，μg/mL)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行回归处理，绘制标准曲线，回归方程为Y=9.515 X+0.288 9(r=1.000)，结果表明，苯酚在10.08～201.6 μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密量取“2.2.1”项下的苯酚对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件注入高效液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，计算苯酚对照品峰面积的RSD为0.13%。结果表明，该方法精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批号的苯酚消毒液样品(批号：160218)和同一批号的复方薄荷脑醑样品(批号：160213)，分别按“2.2.2”项下方法各制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算苯酚峰面积的RSD分别为1.09%、1.71%。结果表明，该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密量取“2.2.2”项下的苯酚消毒液(批号：160218)和复方薄荷脑醑(批号：160213)供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h，按“2.1”项下色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，苯酚峰面积的RSD为0.28%、0.52%。结果表明，室温条件下苯酚消毒液和复方薄荷脑醑供试品溶液中苯酚在12 h内稳定性良好。

2.8 回收率试验 精密量取苯酚消毒液阴性对照样品2.5 mL置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，再精密量取上述稀释液5 mL置50 mL量瓶中，按低、中、高3个剂量组，分别精密加入“2.2.1”项下苯酚对照品储备液2.0、2.5、3.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，每个剂量组各取3份，共9份，按“2.1”项下色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，计算苯酚的回收率。结果见表1。精密量取复方薄荷脑醑阴性对照样品1 mL，置100 mL量瓶中，按低、中、高3个剂量组，分别精密加入“2.2.1”项下苯酚对照品储备液4.0、5.0、6.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，每个剂量组各取3份，共9份，按“2.1”项下色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，计算苯酚的回收率。结果见表2。

表1 苯酚消毒液回收率试验测定结果

表2 复方薄荷脑醑回收率试验测定结果

2.9 样品测定 分别取苯酚消毒液样品、复方薄荷脑醑样品各3批，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算样品中苯酚的含量。结果3批苯酚消毒液(批号：160218、160219、160220)的苯酚含量分别为2.03%、1.96%、2.01%，RSD分别为0.40%、0.63%、0.44%；3批复方薄荷脑醑(批号：160213、160214、160215)的苯酚含量分别为0.50%、0.52%、0.49%，RSD分别为0.37%、0.26%、0.40%。

3 讨论

因苯酚为酚类有机物，具有很强的还原性，在空气中易被氧化，生成带红色的醌类化合物，致使制剂中苯酚的含量逐渐下降，影响治疗效果，故在储存的过程中应注意避光、密封保存。

取苯酚对照品溶液，在210～1 100 nm波长处用紫外分光光度计进行光谱扫描，发现苯酚在212和270 nm处有特征性吸收。210 nm处流动相中甲醇的末端吸收会对色谱基线产生干扰，而且制剂中其他成分的干扰也较大，色谱分离结果较差；而采用270 nm测定苯酚的含量，可以避免制剂中其他成分的干扰，获得令人满意的分离效果，可以准确测定制剂中制剂的含量。

通过比较甲醇-水、乙腈-水、甲醇-盐酸溶液、甲醇-冰醋酸溶液等多种流动相体系对苯酚分离测定的影响，发现采用甲醇-水作为流动相体系可以取得良好的分离效果，系统适应性结果符合要求。另外，优化不同比例甲醇-水流动相体系，发现在60∶40时，苯酚的分离效果良好但出峰时间较短，通过增加水相比例达40∶60时，可以延长出峰时间，分离效果较好，对阴性对照品溶液无干扰，而且出峰时间适中。故选用甲醇-水(40∶60)的比例作为检测用流动相。

[1] 中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范[S].北京:中国医药科技出版社,1995:22-23,81-82.

[2] 陈晓峰,沈花.高效液相色谱法测定消炎止痒醑中苯酚的含量[J].抗感染药物,2011,8(4):268-270.

[3] 盖静,王俊丽,安宝文,等.HPLC-DAD法测定复方樟脑搽剂中樟脑和苯酚的含量[J].西北国防医学杂志,2015,36(2):87-89.

[4] 孙建华.HPLC法测定薄荷苯酚软膏中苯酚含量[J].实用医药杂志,2015,32(1):78-79.

[5] 杨小林,尚庆霞,邱栋梁,等.HPLC法测定苯酚乳膏中苯酚的含量[J].中国药师,2011,14(7):1059-1060.

[6] 蔡乐,白林,徐风华,等.HPLC法测定薄荷苯酚软膏中苯酚的含量[J].中国药物应用与监测,2014,11(2):82-84.

[7] 杨小林,尚庆霞,邱栋梁,等.HPLC法测定薄荷脑苯酚酊中苯酚的含量[J].北方药学,2013,10(8):12.

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Determination of phenol in phenol solution for disinfection and compound menthol spirit by HPLC

FENG Qian-qian,CHEN Fei,AN Jing-fei,LIU Gui-yang*

(Department of Pharmacy,First Affiliated Hospital of Chinese PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for determination of phenol in phenol solution for disinfection and compound menthol spirit.Methods Agilent ZorBax SB-C18(4.6 mm×350 mm,5 μm)was used,the mobile phase consisted of methanol-water (40∶60),the detection wavelength was set at 270 nm,the flow rate was 1.0 mL/min,and the injection volume was 10 μL.Results A good linear relationship was observed on phenol in the range of 10.08～101.6 μg/mL with linear equation Y=9.515 X+0.288 9 (r=1.000).The average recovery was 99.08% and 99.29%,withRSDbeing 0.79% and 0.66%.Conclusion This method has a good accuracy,precision and specialization.It can be used for the determination of the quality of phenol solution for disinfection and compound menthol spirit.

Phenol solution for disinfection;Compound menthol spirit;Phenol;HPLC;Contentd determination

2016-04-28

解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100048

原《中国医院制剂规范》外用液体制剂质量标准研究(13ZJZ17-2)

10.14053/j.cnki.ppcr.201612019

*通信作者