高危型HPV检测在CIN诊断中的临床价值

裘明利 吴云燕 王宏达 王孙英

·检测诊断·

高危型HPV检测在CIN诊断中的临床价值

裘明利 吴云燕 王宏达 王孙英

目的探讨高危型HPV检测在子宫颈上皮内瘤变诊断中的临床指导价值。方法回顾性分析2013年4月至2015年6月323例子宫颈上皮内瘤变住院患者的高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）基因亚型检测、液基薄层细胞学检查（TCT）和病理检查资料，以病理检查结果为最终诊断标准。结果323例子宫颈上皮内瘤变患者中HR-HPV阳性308例，HR-HPV阳性率95.4%，单一型病毒感染较为常见，排名前3位的HR-HPV型别依次为HPV16、58、52型。高危型HPV感染呈逐渐向年轻化发展的趋势，但各年龄段的HPV阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=0.946，P＞0.05）。多重感染与子宫颈病变程度无明显相关性（r=0.131，P＞0.05）。对于子宫颈上皮内瘤变者，TCT检测阳性率88.5%，HPV阳性率95.4%，两者联合检测的阳性率100%（χ2=0.060，P＞0.05）。结论高危型HPV感染呈逐渐向年轻化发展的趋势；多重感染与子宫颈病变程度无相关性；高危型HPV检测在子宫颈上皮内瘤变诊断中的临床意义越来越重要，可降低或消除TCT检查的假阴性结果；TCT与高危型HPV检测联合使用可明显提高诊断子宫颈上皮内瘤变的灵敏度。

高危型人乳头瘤病毒 宫颈上皮内瘤病 荧光PCR分型定性检测 病理组织学

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，起源于子宫上皮内瘤变（CIN），两者病因相同，均与HR-HPV持续感染密切相关［1］，因此HR-HPV检测在宫颈癌筛查中有重要的临床价值。CIN反映子宫颈癌发生发展中的连续过程，无特殊临床表现，通过筛查发现CIN，及时治疗高级别病变，是预防子宫颈癌的有效措施。本文探讨高危型HPV检测在CIN变诊断中的临床价值。现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2013年4月至2015年6月本院行HR-HPV基因亚型检测、液基薄层细胞学检查（TCT）和病理检查的323例CIN患者的临床资料，年龄22～69岁，平均年龄43岁。根据2001年Bethesda系统分类法（TBS）进行细胞学分级报告［2］。其中细胞学诊断为未见上皮内病变细胞和恶性细胞（NILM）37例，未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）28例，不能排除高级别鳞状上皮内病变不典型鳞状细胞（ASC-H）42例，低度鳞状上皮内病变（LSIL）112例，与CINⅠ符合，高度鳞状上皮内病变（HSIL）104例，包括CINⅡ、CINⅢ和原位癌，进行阴道镜检查或病理检查。按10岁为1个年龄段，观察各年龄段妇女HR-HPV感染情况。

1.2 方法 （1）取样步骤与要求：HR- HPV样本采集：采集人员行常规妇科检查，以窥阴器暴露宫颈口，先用棉签擦去宫颈分泌物，再将宫颈取样器刷置于宫颈口，轻柔旋转使其顺时针转动5圈。缓慢去除宫颈取样器刷并将其置入无菌取样管中，标记患者编号及采样日期立即送检，实验室-20℃避光保存，并于4d内出检验结果。（2）TCT样本采集：先用棉签擦去宫颈分泌物，再用细胞刷在宫颈口鳞柱交界处同一方向旋转3～5圈，随即将全部脱落细胞转移至细胞保存液中并固定≥15min，然后采用美国Cytyc ThinPrep 2000系统进行TCT制片。（2）TCT：TCT诊断标准采用2001年Bethesda系统分类法的诊断标准。根据TCT结果分为NILM组、ASCUS组、ASC-H组、LSIL组和HSIL组，NILM组为细胞学检查阴性，其余各组为细胞学检查阳性。（3）HR-HPV基因亚型检测：对国际卫生组织（WHO）确认的13种HR-HPV型别的特异性DNA核酸片段（包括HPV l6、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型）进行荧光PCR分型定性检测，判断单一或多重感染。HR-HPV分型检测的方法、步骤和结果判读参照仪器和试剂盒说明书。（4）子宫颈组织病理学诊断：对323例妇女进行阴道镜下宫颈多点活检或宫颈LEEP术、宫颈锥切术、子宫全切术及组织病理检查。病理诊断结果根据病变程度分为CINⅠ（轻度异型）、C1NⅡ（中度异型）、CINⅢ（重度异型和原位癌）。

1.3 统计学方法 采用SPSS 12.0软件。不同组别及不同基因亚型HR-HPV阳性率比较采用χ2检验。HR-HPV基因亚型与CIN不同分级的相关性采用Spearman相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HR-HPV感染情况及基因亚型分布 323例妇女中，HR-HPV阳性308例，阳性率95.4%。HRHPV感染以单一感染为主，占66.2%，多重感染占33.8%；多重感染者中，二重感染最为常见，占69.2%，其次为三重感染，占19.2%，≥四重感染者仅占11.5%。所有HR-HPV阳性患者中，排名前三位的基因亚型依次为HPV16型（40.3%），HPV58型（25.3%），52型（22.6%）；感染率最低的是HPV45型（1.0%）。

2.2 不同年龄段妇女的HR-HPV感染率 高危型HPV感染呈逐渐向年轻化发展的趋势，30～39岁达到最高峰，但各年龄段HR-HPV阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=0.946，P＞0.05），见表1。

表1 不同年龄段妇女HR-HPV阳性分布情况［n（%）］

2.3 不同基因亚型HR-HPV感染与子宫颈病变程度的相关性 323例进行阴道镜活检及病理学诊断，不同类基因亚型HR-HPV感染（即单一感染或多重感染）者及不同程度CIN患者HR-HPV阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=36.358，P＜0.01），见表2。

表2 323例不同类型HR-HPV感染者的宫颈病变情况［n（%）］

2.4 TCT、HR-HPV定性检测与病理检查结果的比较 对323例患者的组织病理诊断、TCT结果及HPV检测结果进行对比，以组织病理学诊断结果为最终确诊结果，见表3。

表3 323例患者TCT、HR-HPV定性检测病理结果的比较

3 讨论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，早期宫颈癌常无明显症状和体征，颈管型患者因子宫颈外观正常易漏诊或误诊。因此，采用子宫颈细胞学检查和（或）高危型HPV检测、阴道镜检查、子宫颈活组织检查的“三阶梯”程序来筛查，达到早发现、早诊断和早治疗宫颈癌和癌前病变的目的，这对降低宫颈癌的发病率和病死率有重要意义。近年来，研究发现宫颈癌发病趋势呈现年轻化，这引起全世界妇科肿瘤专家的重视。早在20世纪80年代，国外资料就已阐明，25～35岁年轻宫颈癌患者的发病率在20世纪50年代为9%，20世纪80年代已上升到24%［3］。本资料结果表明，CIN的高发年龄集中在30～39岁，而＜30岁妇女的发病率高于≥40岁妇女，这可能与性生活年龄提早和性乱行为［4］相关。其相关因素包括对青少年缺乏性教育，对成年人缺乏性卫生、健康知识的普及，及避孕套使用率不高等。

据IARC（国际癌症研究机构）统计［5］，HPV16、18是在世界范围内常见的HPV感染型别。而在中国的宫颈癌患者中，HPV16、18、52、58阳性率高于其他型别，尤其是HPV 52、58在中国南方地区较为常见［6-8］。本资料结果显示，高危型HPV阳性率前3位的型别分别为，HPV16、58、52型，与深圳地区常见基因型一致，但序次稍有不同［9］。本资料最主要的HR-HPV感染亚型HPV16，这与冯金鸽等［10］报道一致，而HPV18并不是本地区较常见的感染基因型。表明HPV感染基因型分布规律存在明显的地域差异。本资料中，HR-HPV感染以单一感染为主，占66.2%，多重感染占33.8%；而在多重感染者中，二重感染最为常见，占69.2%。关于多重感染是否与宫颈癌及癌前病变具有相关性，目前仍然存在一定争议。Munoz等［5］研究认为，多重感染并不会增加子宫颈癌的发生概率。Fife等［11］认为，HPV多重感染对子宫颈病变及子宫颈癌的发生、发展起促进作用。

2012年3月美国癌症协会NCCN就公布了新版的《子宫颈癌筛查临床实践指南》，指南中指出高危型HPV检测已作为子宫颈癌的初筛及异常细胞学结果处理的组成部分。本资料中，TCT检测阳性率为88.5%，HPV阳性率为95.4%，两者联合检测的阳性率100%。这些结果体现HR-HPV检测在宫颈癌及其癌前病变筛查中的重要性。HR-HPV检测可对细胞学低度病变者进行有效分层，提高对高级别病变的检出率，避免漏诊、过度治疗或治疗不足。同时，表明HR-HPV检测联合细胞学检查，对提高不同级别子宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊断率、发病风险性的提示、术后随访监测及低级别病变分流等具有重要的意义，对于正常人群中的高危患者筛查也具有重要作用。

［1］Bosch FX,Lorincz A,Mufioz N, et al.The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer.J Clin Path01, 2002,55：244-265.

［2］Solomon D,Davey D,Kurman R, et al. The 2001 Bethesda System：terminology for reporting results of cervical cytology. JAMA, 2002,287(16)：2114-2119.

［3］Elliott PM,Tattersall MH,Coppleson M,et al.Changing character of cervical cancer in young women.BMJ,l989,298：1451.

［4］郎景和.迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇.中华妇产科杂志,2002,37：l29-131.

［5］Munoz N, Bosch FX, Castellsague X,et al.Against which human papillomavirus types shall we vaccinate and screen? The international perspective.Int J Cancer,2004,111：278-285.

［6］乌兰娜,吴瑞芳,周艳秋,等.人乳头瘤病毒基因型与宫颈病变的关系.中国妇产科临床杂志,2005,6：346-350.

［7］Sun ZR, Ji YH, Zhou WQ, et al. Characteristics of HPV prevalence among women in Liaoning province,China.Int J Gynaecol Obstet, 2010, 109：105-109.

［8］Lin M,Yang LY,Li LJ,et al.Genital human papillomavirus screening by gene chip in Chinese women of Guangdong province. Aust N Z J Obstet Gynaecol,2008,48：189-194.

［9］肖克林,罗茗月,严泽浩,等. 深圳社区女性宫颈细胞学病变和人乳头瘤病毒感染状况.中华传染病杂志,2014(9)：562-564.

［10］冯金鸽,陈新,朱芸,等.北京地区女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因型分布特征研究.实用皮肤病学杂志, 2014(2)：81-84.

［11］Fife KH, Cramer HM, Schroeder JM, et al.Detection of multiple human papillomavirus types in the lower genital tract correlates with cervical dysplasia.J Med Virol,2001,64：550-559.

ObjectiveTo Investigate the value of HR-HPV genotyping in diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia（CIN）.MethodsFrom April 2013 to June 2015，323 women from Fuyang Maternal and Child Health Hospital were selected to be HPV genotyping test，thin liqid—based cytology test（TCT）and histopathologic examination，all those were analyzed retrospectivel. And that，the pathological examination results were the fi nal diagnosis standard.ResultsHR-HPV prevalence was 95.4%in this study.The infection of one type HPV was more common. The top 3 of HR-HPV types were HPV16，58，52. There was no signifi cant difi erenee between age and HPV positive rate（χ2=0.946，P＞0.05）. Multiple infection and cervieal lesions rank correlation analysis（r=0.131，P＞0.05）. For cervical intraepitheliai neoplasia，cvtology positive rate was 88.5%（286/323），and HPV positive rate was 95.4%，cvtology combine HPV positive rate was 100%（χ2=0.060，P＞0.05）.ConclusionHPV infection is radually tending to be younger.The clinical signifi cance of HR-HPV detection is more important in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia，which Can reduce or eliminate the false negative results of TCT examination. The combination of Cytology test and HPV genotyping test can improve the sensitivity for high-grade lesions.

High-risk Human papillomavirus Cervical intraepitheliai neoplasia Real time PCR Kit Histopathologic

杭州市科技发展计划项目（20130733Q49）

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