补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及生活质量的影响

黄慧婷，彭晓洪，冯立志，刘小虹

（1.广州中医药大学第一附属医院，广东广州510405；2.深圳市龙岗区中医院，广东深圳518172；3.广州中医药大学，广东广州510006）

补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及生活质量的影响

黄慧婷1，彭晓洪2，冯立志3，刘小虹3

（1.广州中医药大学第一附属医院，广东广州510405；2.深圳市龙岗区中医院，广东深圳518172；3.广州中医药大学，广东广州510006）

【目的】观察补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和Foxp3 mRNA表达的影响及对患者生活质量的改善作用。【方法】将60例慢性持续期肾虚证支气管哮喘患者随机分为对照组、穴注组与肌注组，每组20例。对照组维持入组前的常规西医治疗方案，穴注组与肌注组在原有治疗基础上加喘可治注射液穴注双侧足三里穴或肌肉注射，疗程均为90 d。观察各组治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达的变化、成人哮喘生命质量评分量表（AQLQ）及哮喘控制测试量表（ACT）评分变化。【结果】（1）治疗后，除对照组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例无显著性变化外，各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均较治疗前显著升高（P＜0.01），且穴注组和肌注组的升高作用均优于对照组（P＜0.01）；同时，穴注组Foxp3 mRNA表达也较肌注组显著升高（P＜0.05）。（2）治疗后，除对照组对刺激原的反应、自我健康的关心和肌注组对刺激原的反应无显著性变化外，各组AQLQ各维度评分及其总分均较治疗前显著改善（P＜0.05或P＜0.01）；且穴注组和肌注组在改善活动受限、哮喘症状、自我健康的关心及其总分方面均优于对照组（P＜0.01）；同时，穴注组在改善活动受限方面也优于肌注组（P＜0.01）。（3）治疗30 d及90 d后，各组ACT评分均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），且治疗90 d后，穴注组和肌注组均较治疗30 d后显著升高（P＜0.01）；治疗30 d及90 d后，穴注组和肌注组的ACT评分均较对照组显著升高（P＜0.01）。【结论】喘可治注射液能够调节哮喘慢性持续期患者的外周血T淋巴细胞亚群的紊乱状态，使之恢复平衡，改善患者的临床症状和生活质量。

支气管哮喘；肾虚证；补肾法；喘可治；CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞；生活质量

喘可治注射液主要由淫羊藿及巴戟天等中药经提取、分离、精制而成，含有淫羊藿多糖、淫羊藿苷、淫羊藿黄酮等多种有效成分，具有温阳补肾、平喘止咳、调节免疫的作用[1]。根据中医理论，我们选取具有温补肾阳作用的喘可治注射液治疗支气管哮喘慢性持续期肾虚型患者，同时选取具有健脾化痰、强壮作用的要穴足三里进行药物穴位注射，观察与传统肌肉注射疗效的差异。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择于2013年11月～2015年10月在广州中医院大学第一附属医院呼吸内科门诊及住院部就诊的符合诊断标准的支气管哮喘慢性持续期第2、3级肾虚证患者60例。采用随机数字表法将60例患者随机分成对照组、穴注组与肌注组，每组各20例。

1.2 西医诊断标准参照“支气管哮喘防治指南（2008）”[2]制定诊断、分期、分级标准：（1）反复发作喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽，多与接触变应原、冷空气、物理、化学性刺激、病毒性上呼吸道感染、运动等有关。（2）发作时在双肺可闻及散在或弥漫性，以呼气相为主的哮鸣音，呼气相延长。（3）上述症状可经治疗缓解或自行缓解。（4）除外其他疾病所引起的喘息、胸闷或咳嗽。（5）临床表现不典型者（如无明显喘息或体征）应具备以下1项试验阳性：①支气管激发试验或运动激发试验阳性；②支气管扩张试验阳性，1 s用力呼气容积（FEV1）增加≥12%，且FEV1增加绝对值≥200 mL；③最大呼气流量（PEF）日内（或2周）变异率或昼夜波动率≥20%。符合（1）～（4）条或（4）、（5）条者，可以诊断为支气管哮喘。慢性持续期是指每周均不同频度和（或）不同程度出现症状（喘息、气急、胸闷、咳嗽等）。第2级（轻度持续）：症状≥每周1次，但＜每日1次，发作可能影响活动和睡眠；夜间哮喘症状＞每月2次，但＜每周1次；FEV1≥80%预计值或PEF≥80%个人最佳值，PEF或FEV1变异率20%～30%。第3级（中度持续）：每日有症状，发作影响活动和睡眠；夜间哮喘症状≥每周1次；FEV1 60%～79%预计值或PEF 60%～79%个人最佳值，PEF或FEV1变异率＞30%。

1.3 中医诊断标准参照《中药新药临床研究指导原则（试行）》[3]和《中医诊断学》（上海科技出版社，1995年版），综合临床制定以下肾虚证诊断标准。主症：喘息、咳嗽、咯痰。次症：腰酸膝软，耳鸣，畏寒肢冷。其他：疲倦乏力、易感冒、汗多。舌象：舌质淡胖嫩，苔白。脉象：沉细。以上主症必备，兼见次症1项或1项以上，结合舌脉即可诊断。

1.4纳入标准①符合西医诊断为支气管哮喘慢性持续期的患者；②符合中医肾虚证诊断的患者；③病情分级属轻度或中度者；④18岁≤年龄≤75岁，男女均可；⑤自愿接受该药治疗，并签署知情同意书者（知情同意过程符合GCP要求）。

1.5 排除标准①支气管哮喘急性发作期及缓解期，或间歇状态（第1级）和重度持续状态（第4级）者；②具有气流阻塞的其他疾病，如支气管扩张症、肺结核纤维化病变、弥漫性泛细支气管炎等患者；③合并有严重心脑血管，肝、肾功能损害等疾病的患者；④精神病患者及因其他原因不能配合治疗者；⑤妊娠期或哺乳期妇女；⑥已知对本试验用药成分过敏者。

1.6 治疗方案

1.6.1 对照组维持入组前的常规西医治疗方案不变，即参照“支气管哮喘防治指南（2008）”给予分级治疗，根据评估哮喘控制情况在患者复诊时进行升阶梯或降阶梯治疗。

1.6.2 穴注组在维持入组前治疗方案基础上，加用喘可治注射液穴位注射治疗。用法：喘可治注射液（广州万正药业有限公司生产，规格：2 mL/支，产品批号：12081302）4 mL，双侧足三里穴位交替注射，每日1次。

1.6.3 肌注组在维持入组前治疗方案基础上，加用喘可治注射液肌肉注射治疗。用法：喘可治注射液4 mL，选择双侧臀大肌、臀中肌、臀小肌、上臂三角肌部位交替肌肉注射，每日1次。

1.6.4 疗程各组疗程均为90 d。

1.6.5 合并用药临床试验开始前患者原有哮喘基础治疗药物维持不变，给药开始至给药结束过程中患者因伴随疾病所用的所有合并用药（治疗过程中使用其他治疗药物或治疗措施），均应在CRF中记录。药物名称采用一般名，由多种成分组成的复方药物名称则使用商品名，并记录给药途径、每日剂量、适应证、开始使用和结束使用的日期。

除试验药外，试验期间允许使用抗生素以及孟鲁司特、抗组胺药、茶碱类药物，必要时可适当使用短效β受体激动剂药物如万托林等，须将用药情况记录在合并用药表内；但不允许应用激素类药物，如信必可、舒利迭、强的松、甲强龙等，如有使用一律按退出试验处理（但入组前已应用激素类药物者则可继续应用，如症状好转则需逐步减量至停用）。在整个试验过程中伴随用药的剂量、用法应尽可能保持不变。

1.7 观察指标（1）观察支气管哮喘患者的一般人口学资料，并在治疗前、治疗30 d和治疗90 d后进行哮喘控制测试量表（ACT）评分[4]。（2）观察支气管哮喘患者治疗前后成人哮喘生命质量评分量表（AQLQ）[4]的活动受限、哮喘症状、心理情绪、对刺激原的反应、自我健康的关心等各维度评分。（3）于治疗前和治疗90 d后分别检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达。

1.8 统计方法应用SPSS 19.0统计软件进行数据的统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，治疗前后比较采用配对t检验，组间比较采用独立样本t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组基线资料比较对照组20例患者中，男性9例，女性11例，平均年龄（57.70±12.6）岁；穴注组20例患者中，男性12例，女性8例，平均年龄（59.85±8.82）岁；肌注组20例患者中，男性10例，女性10例，平均年龄（58.76±9.74）岁。各组患者的年龄、性别、病情等基线资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

2.2 各组治疗前后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达比较表1结果显示：治疗前，各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，除对照组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例无显著性变化外，各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均较治疗前显著升高（P＜0.01）；且穴注组和肌注组的升高作用均优于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；同时，穴注组Foxp3 mRNA表达也较肌注组显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组治疗前后Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达比较Table 1The percentages of Treg cells and Foxp3 mRNA expression level in the three groups before and after treatment

表1 各组治疗前后Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达比较Table 1The percentages of Treg cells and Foxp3 mRNA expression level in the three groups before and after treatment

①P＜0.01，与各组治疗前比较；②P＜0.01，与对照组治疗后比较；③P＜0.05，与肌注组治疗后比较

组别对照组N 20穴注组20肌注组20时间治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后pTreg/% 4.36±0.73 4.64±0.63 4.25±0.63 5.79±0.68①②4.76±0.62 5.79±0.57①②Foxp3 mRNA 0.12±0.01 0.16±0.01①0.14±0.01 0.32±0.02①②③0.13±0.01 0.30±0.03①②

2.3 各组治疗前后AQLQ评分比较表2结果显示：治疗前，各组活动受限、哮喘症状、心理情绪、对刺激原的反应、自我健康的关心等AQLQ各维度评分及其总分比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，除对照组的对刺激原的反应、自我健康的关心和肌注组的对刺激原的反应无显著性变化外，各组AQLQ各维度评分及其总分均较治疗前显著改善（P＜0.05或P＜0.01）；且穴注组和肌注组在改善活动受限、哮喘症状、自我健康的关心及其总分方面均优于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；同时，穴注组在改善活动受限、心理情绪方面也优于肌注组，差异有统计学意义（P＜0.01）。

表2 各组治疗前后AQLQ评分比较Table 2AQLQ scores in the three groups before and after treatment，s/分）

表2 各组治疗前后AQLQ评分比较Table 2AQLQ scores in the three groups before and after treatment，s/分）

①P＜0.05，②P＜0.01，与治疗前比较；③P＜0.01，与对照组治疗后比较；④P＜0.01，与肌注组治疗后比较

组别对照组心理情绪19.00±2.25 22.15±1.79②18.15±2.35 21.15±2.35②④19.00±2.58 23.00±1.45②组别对照组N 20穴注组20肌注组20时间治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后活动受限38.10±2.27 47.00±2.20②39.20±2.59 54.90±2.86②③④40.20±1.99 50.65±2.91②③哮喘症状23.20±1.74 26.30±2.15②22.70±1.75 30.00±2.10②③21.90±1.83 30.05±2.06②③N 20穴注组20肌注组20时间治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后对刺激原的反应21.50±2.42 21.15±2.35 20.45±2.31 21.85±2.25①20.00±2.10 21.00±2.10自我健康的关心13.20±2.55 14.10±2.36 12.10±2.36 16.15±2.25②③13.00±2.49 15.30±2.15②总分115.00±5.49 130.70±6.35②112.60±6.69 144.05±7.04②③114.10±6.33 140.00±7.57②③

2.4 各组治疗前后ACT评分比较表3结果显示：治疗前，各组ACT评分比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。治疗30 d及90 d后，各组ACT评分均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），且治疗90 d后，穴注组和肌注组均较治疗30 d后显著升高（P＜0.01）；治疗30 d及90 d后，穴注组和肌注组的ACT评分均较对照组显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.01）。

表3 各组治疗前后ACT评分比较Table 3 ACT scores in the three groups before and after treatment，s/分）

表3 各组治疗前后ACT评分比较Table 3 ACT scores in the three groups before and after treatment，s/分）

①P＜0.05，②P＜0.01，与治疗前比较；③P＜0.01，与治疗30 d后比较；④P＜0.01，与对照组同期比较

组别对照组穴注组肌注组N 20 20 20治疗前13.58±2.68 14.04±2.17 13.95±2.41治疗30 d 16.12±2.18①18.23±2.36②④17.98±2.85②④治疗90 d 17.87±3.64②23.55±1.31②③④21.03±2.37②③④

3 讨论

现代医学认为，支气管哮喘（简称哮喘），是由多种细胞包括气道的炎症细胞和结构细胞（如嗜酸粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[5]。研究显示，哮喘存在Th1/Th2失衡[6]。Treg细胞是一种既不同于Th1也不同于Th2的T细胞亚群，而CD4+CD25+Treg是Treg细胞的主要组成部分。Treg能够抑制Th1和Th2活化，调控Th1/Th2的网络失衡状态[7]。叉状头/翅膀状螺旋转录因子（forkhead/winged helix transcription factor，Foxp3）特异性地高表达于CD4+CD25+Treg，在一定程度上反映CD4+CD25+Treg的水平和功能活性，已被公认为Treg特异性的标志物。因此，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞与哮喘免疫耐受机制受损密切相关[8]。

研究[5]表明，哮喘发作期外周血T细胞亚群会发生紊乱，尤其是I型辅助性T细胞（Th1）/Th2失调是导致哮喘发病的重要原因。哮喘急性发作期和慢性持续期外周CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达低于缓解期和正常对照人群，哮喘经治疗后，CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例及Foxp3 mRNA表达升高，可发挥其免疫抑制功能，抑制Th2细胞活化，纠正Th1/Th2失衡，促进哮喘缓解[9]。本次研究结果显示，经过穴注或者肌注喘可治后，患者CD4+CD25+Foxp3+Treg及Foxp3 mRNA表达均较治疗前明显升高，提示喘可治注射液能够提高CD4+CD25+Foxp3+Treg及Foxp3 mRNA在体内的表达，发挥其免疫抑制功能，抑制Th2细胞活化，纠正Th1/Th2失衡，缓解哮喘症状。同时本课题组发现，穴注组和肌注组的AQLQ和ACT评分均比对照组明显升高，穴注组在Foxp3 mRNA表达及活动受限评分方面比肌注组明显升高，提示喘可治注射液能够减轻患者哮喘症状，提高患者生活质量。

喘可治注射液主要由淫羊藿及巴戟天等中药经现代药物技术提取、分离、精制而成，含有淫羊藿多糖、淫羊藿苷、淫羊藿黄酮等多种有效成分[1]。现代药理研究表明，淫羊藿及其提取物具有增强免疫记忆，促进淋巴细胞转化、抗体生成，免疫双向调节及激素样作用[10]。巴戟天在抗应激及调节免疫功能等方面有一定作用[11]。现代药效学研究表明，喘可治注射液有明显的镇咳、祛痰、抗过敏作用，能够松弛支气管平滑肌，增强体液免疫与细胞免疫的功能，提高机体抗炎能力和免疫能力。

中医经络理论认为，足三里穴是“足阳明胃经”的主要穴位之一，它具有调理脾胃、补中益气、扶正祛邪等作用[12]。现代大量研究表明，针刺具有双向调节免疫功能的作用，能够调节亢进的或者低下的免疫功能[13]。研究提示，针刺足三里穴不但可提高T细胞的数量及其亚群比例，还能增强它的活性，激活被抑制的免疫功能[14]。多项研究[15]也表明，针刺或者药物穴注足三里，可提高对哮喘的控制水平，改善哮喘患者的生活质量。

本研究结果提示：穴注喘可治在免疫因子表达及症状缓解方面明显优于肌注组和对照组，穴注组在活动受限方面改善更显著，肌注组在心理情绪方面改善更显著。因此，我们可以认为，穴注或肌注喘可治注射液能够提高体内CD4+CD25+Foxp3+Treg及Foxp3 mRNA的表达，增强免疫功能，改善哮喘症状，提高哮喘患者的生活质量，其中以穴注的给药方式效果更明显。

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【责任编辑：陈建宏】

Effect of Kidney-Nourishing Therapy on CD4+CD25+Foxp3+Treg Cells and Quality of Life of Bronchial Asthma Patients During Remission Period with Kidney Deficiency Syndrome

HUANG Huiting1，PENG Xiaohong2，FENG Lizhi3，LIU Xiaohong3
（1.The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405 Guangdong，China；2.Longgang District Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen 518172 Guangdong，China；3.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006 Guangdong，China）

ObjectiveTo observe the effect of kidney-nourishing therapy on CD4+CD25+Foxp3+Treg cells and the quality of life of bronchial asthma patients during remission period with kidney deficiency syndrome.MethodsSixty bronchial asthma patients during remission period with kidney deficiency syndrome were randomly assigned to control group，acupoint injection group and intramuscular injection group，20 cases in each group. The control group maintained the original treatment before the trial，and acupoint injection group and intramuscular injection group were also given Zusanli（ST36）acupoint injection and intramuscular injection of Chuankezhi injection on the basis of the original treatment respectively，the course of treatment for the latter two groups being 90 days.Before and after treatment，we observed the changes of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells and mRNA expression of Foxp3 in the peripheral blood as well as the scores of adult Asthma Quality of Life Questionnaire（AQLQ）and Athma Control Test（ACT）scores in the three groups.Results（1）Except for the percentage of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells in the control group，the percentages of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells and the expression level of Foxp3 mRNA in the three groups after treatment were higher than those before treatment（P＜0.01），and the increase of the two parameters in acupoint injection group and intramuscular injection group was much more than that in the control group（P＜0.01），and the acupoint injection group had the highest Foxp3 mRNA expression level（P＜0.05）.（2）Except for the scores of responding to stress and self-health regarding in the control group as well as the scores of responding to stress in intramuscular injection group，the scores of each items of AQLQ and the total AQLQ scores in the three groups were much improved after treatment as compared with those before treatment（P＜0.05 or P＜0.01）.The two Chuankezhi treatment groups had better effect on improving the scores of activities limitation，asthma symptoms，self-health regarding and the total AQLQ scores than the control group（P＜0.01），and acupoint injection group was more effective on improving psychology and emotion than intramuscular injection group（P＜0.01）.（3）After treatment for 30 and 90 days，ACT scores in the three groups were markedly increased（P＜0.05 or P＜0.01），and the scores in the two Chuankezhi treatment groups were higher than the control group（P＜0.01）.After treatment for 90 days，ACT scores in the two Chuankezhi treatment groups were higher than those after treatment for 30 days（P＜0.01）.ConclusionChuankezhi injection is effective on regulating the disordered peripheral T lymphocyte subsets，relieving clinical symptoms，and improving the quality of life of bronchial asthma patients during remission period with kidney deficiency syndrome.

bronchial asthma；kidney deficiency syndrome；kidney-tonifying therapy；Chuankezhi；CD4+CD25+Foxp3+Treg cells；quality of life

R256.12；R562.2+5

A

1007-3213（2016）06-0782-05

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.06.007

2016-06-23

黄慧婷（1981-），女，博士研究生；E-mail：348619123@qq.com

刘小虹，女，教授，博士研究生导师；E-mail：rsclxh@gzucm.edu.cn

广东省中医药管理局科研课题（编号：20132178）