膀胱尿路上皮癌中p53、CK 20、C-erbB-2的表达及其意义

张 黎，邱承敏，孙玮玮，顾敏敏，何佩锋，许燕燕，杨道华

1.上海市松江区中心医院病理科，上海 201600；2.上海交通大学附属第一人民医院病理科，上海 200080

膀胱尿路上皮癌中p53、CK 20、C-erbB-2的表达及其意义

张 黎1，邱承敏1，孙玮玮1，顾敏敏1，何佩锋1，许燕燕1，杨道华2

1.上海市松江区中心医院病理科，上海 201600；2.上海交通大学附属第一人民医院病理科，上海 200080

目的 探讨p53、CK 20、C-erbB-2在膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma，BUC）中的表达和意义。方法 采用免疫组化二步法（EnVison）分别检测118例BUC、21例良性病变中的p53、CK 20、C-erbB-2的表达。结果 118例尿路上皮癌中p53、CK20、C-erbB-2的阳性表达率分别为88.1%、26.3%和45.8%。尿路上皮癌的p53阳性率明显高于良性病变（χ2=13.55，P＜0.01），低级别尿路上皮癌p53弱阳性率明显高于高级别（χ2=8.11，P＜0.01），强阳性率显著低于高级别尿路上皮癌（χ2=9.53，P＜0.01）；CK20在良性病变阳性率低于尿路上皮癌（χ2=5.67，P＜0.05），低级别尿路上皮癌CK20阳性表达率显著低于高级别（χ2=22.17，P＜0.01）；尿路上皮癌中C-erbB-2表达与良性病变具有显著性差异（χ2=13.85，P＜0.01），低级别尿路上皮癌C-erbB-2强阳性率显著低于高级别组（χ2=7.91，P＜0.01），低级别尿路上皮癌C-erbB-2表达往往较弱或假阳性。结论 p53、CK20和C-erbB-2在BUC中过表达，并在尿路上皮癌的诊断和鉴别诊断，以及分级中具有一定有临床意义。

膀胱肿瘤；免疫组织化学；p53；CK20；C-erbB-2

膀胱尿路上皮癌（bladder uroepithelium carcinoma，BUC）是最常见的泌尿系统恶性肿瘤，近年来其发病率有上升的趋势，尿路上皮癌中约70%是非浸润性，30%是浸润性，其特点是多灶性，易复发，肿瘤呈乳头状生长。病理诊断的标本多数是活检标本，组织较小，除要区分病变的性质以外，肿瘤的分级也会遇到较多困难，本研究应用免疫组化二步法对118例BUC和21例其他良性病变进行p53、CK20和C-erbB-2检测，探讨三者在BUC中的表达和临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集上海市松江区中心医院2011年2月—2014年12月，膀胱活检和手术切除标本139例，118例为尿路上皮癌，其中低别级80例、高级别24例，14例为浸润性，全部归为高级别尿路上皮癌。21例为良性病变（尿路上皮增生10例、腺性膀胱炎6例、内翻性乳头状瘤5例）。标本经4%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚切片，光镜观察。118例膀胱尿路上皮癌中，男性98例，女性20例，年龄34～89岁，平均年龄（67.07±7.8）岁。所用抗体p53、CK20、C-erbB-2均购自上海长岛生物技术有限公司。

1.2 免疫组织化学

用EnVision法，一抗p53、CK20、C-erbB-2为即用型，以PBS代替一抗为阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。结果判定：光镜下观察，p53阳性细胞位于细胞核，CK20阳性表达位于细胞质。随机选择5个高倍视野，各计数200个瘤细胞中阳性染色细胞，阳性表达率（PI）=（阳性表达瘤细胞数/ 200）×100%。判断标准：无阳性细胞或＜l0%为阴性，10%～25%为弱阳性（+），26%～50%为中度阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。C-erbB-2结果判读标准，0：完全没有着色或＜10%肿瘤细胞有细胞膜着色；+：＞10%的肿瘤细胞呈现微弱不完整的细胞膜着色：++：＞10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的细胞膜着色；+++：＞10%的肿瘤细胞呈现强的完整的细胞膜着色，其中2+和3+视为阳性。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件，采用卡方检验、组间比较使用K ruskal-Wallis Test秩和检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 p53在尿路上皮癌中的表达

BUC中p53阳性表达率为88.1%（图1），良性病变中p53阳性表达率为52.4%，其中（+）为47.6%，（++）为4.8%，无（+++），着色弱（图2）。BUC与良性病变之间阳性表达有显著差异（χ2=13.55，P＜0.01）。在低级别尿路上皮癌中弱阳性表达率（56.2%）显著高于高级别（26.3%）（χ2=8.11，P＜0.01）；而在低级别尿路上皮癌中强阳性表达率（31.3%）显著低于高级别组（63.2%）（χ2=9.53，P＜0.01），见表1。

图1 高级别尿路上皮癌p53（+++）（EnVision，×400）Fig.1 Positive expression of p53（+++）in high grade BUC （EnVision，×400）

表1 p53、C-erbB-2、CK 20在尿路上皮癌中的表达Tab.1 Expression of p53，C-erbB-2 and CK 20 in BUC

图2 尿路上皮增生p53（+）（EnVision，×400）Fig.2 Positive expression of p53（+）in urothelial hyperplasia（EnVision，×400）

2.2 C-erbB-2尿路上皮癌中的表达

膀胱良性病变、低级别尿路上皮癌、高级别尿路上皮癌阳性表达率分别为0%、36.3%、65.8%。尿路上皮癌中C-erbB-2表达率为45.8%（图3），与良性病变具有显著差异（χ2=13.85，P＜0.01）。低级别尿路上皮癌组C-erbB-2阳性表达率（36.3%）显著低于高级别尿路上皮癌组（65.8%）（χ2=7.91，P＜0.01），见表1。

图3 高级别尿中上皮癌C-erbB-2（+++）（EnVision，×400）Fig.3 Positive expression of C-erbB-2（+++）in high grade BUC（EnVision，×400）

2.3 CK 20在尿路上皮癌中的表达

膀胱良性病变、尿路上皮癌低级别、高级别CK20阳性表达率分别为0%、12.5%、55.3%，尿路上皮癌CK20阳性表达率为26.3%（31/118），见图4。CK20在良性病变阳性表达率显著低于尿路上皮癌（χ2=5.67，P＜0.05），在尿路上皮癌中，低级别CK20阳性表达率显著低于高级别（χ2=22.17，P＜0.01）。

图4 尿路上皮癌CK 20（+++）（EnVision，×400）Fig.4 Positive expression of CK 20（+++）in BUC （EnVision，×400）

3 讨论

大量的研究表明，正常的p53蛋白在DNA损伤或缺氧时活化，使依赖p53的周期素依赖激酶（CDK）抑制p21和DNA修复基因（GADD45）上调性转录，细胞在G1期出现生长停滞，进行DNA修复。如修复成功，细胞进入S期；如修复失败，则通过活化bax基因使细胞进入凋亡，以保证基因组的遗传稳定。而在p53基因缺失或发生突变的细胞，DNA的损伤后不能通过p53的介导进人G1停滞和DNA修复。因此，遗传信息受损的细胞可以进入增殖，最终可以发展成恶性肿瘤。膀胱癌组织中普遍存在突变型p53蛋白的表达[1]。本研究表明，尿路上皮癌p53表达为88.1%，显著高于良性病变的52.4%，而良性病变p53表达中，91%为弱阳性，着色淡，无强阳性。在尿路上皮癌中，低级别组的p53弱阳性显著高于高级组，而高级别组的强阳性显著高于低级别组。与杨立新等[2]研究显示的低分化和浸润型BUCp53阳性率显著高于高分化和浅表型BUC，且多呈强阳性表达相一致。表明突变的p53的过度表达与膀胱癌发生与发展有关，随着膀胱肿瘤恶性程度的进展p53蛋白表达率越高。Piston[3]研究表明，在膀胱移行细胞癌发生的晚期，p53表达对促进肿瘤的发展起重要作用。p53蛋白的过度表达提示BUC高度恶性和预后不良，Mum taz等[4]研究表明，当常规H-E切片在诊断膀胱肿瘤的良恶性及分级有困难时，p53等免疫组化指标的表达具有一定有临床辅助意义。

CK20是一种细胞中间丝，是构成细胞骨架的重要物质，为上皮细胞所特有。有研究发现，在人的正常组织和大鼠的正常组织中，CK20的表达均局限于细胞浆，常呈纤维状[5]。在癌变细胞的恶性增生中，角蛋白存在一系列改组重建过程以适应其形态功能的变化，癌变细胞角蛋白极性丧失，排列紊乱、分布弥散，CK 20可能聚集于细胞膜或核膜，呈点状或块状。CK20染色方式的不同说明肿瘤细胞中间纤维丝排列紊乱、分布弥散，CK20染色强弱可以反映出细胞中间纤维丝的多少。尿路上皮细胞CK20的表达与细胞分化有关，正常表达时限于表层（偶尔中间层）细胞或只有表层黏膜细胞（伞细胞）中有少量表达，分化异常时这种限制消失，出现全层细胞表达[6]。本实验显示，膀胱良性病变、尿路上皮癌低级别组、高级别组CK20阳性表达率分别为0%、12.5%、55.3%，CK20在BUC中总的阳性表达率为26.3%。CK20在良性病变阳性表达率明显低于尿路上皮癌，低级别尿路上皮癌组明显低于高级别组，在CK20（++～+++）表达中，低级别组（5.71%）明显低于高级别组（28.9%）。CK20染色强说明分化差的肿瘤细胞中间纤维丝合成活跃，细胞运动性强，侵袭力及转移力强。CK20的表达还和膀胱癌的T分期及远处转移呈正相关[7]。并且有研究表明，在复发病例中CK20的阳性率比初发者显著增高[8]。Rotem等[9]分析了11例有膀胱癌病史但目前病理诊断为良性病变者中9例CK20阳性，进一步随访6个月发现，9例中有4例复发。CK20表达增多导致细胞内骨架结构发生变化，使细胞更易游走和脱落所致。说明CK20的检测为膀胱尿路上皮癌恶性程度的判定、侵袭、转移和复发等预后分析提供有效的依据。

C-erbB-2是一种原癌基因，位于染色体17q21，分子量为185kD，具有表皮生长因子受体的活性与功能，属于EGFR家庭成员，其编码的蛋白称HER2／neu蛋白，C-erbB-2在正常人体上皮和腺上皮等组织内有微弱表达，但处于非激活状态，无基因扩增，但在人类许多肿瘤细胞中被激活，导致与细胞转化相关的酪氨酸酶活性增强，促使细胞恶性转化，并使肿瘤细胞运动加速，促进肿瘤细胞的深部浸润及转移。研究表明，C-erbB-2的过度表达可使包括乳腺癌、胃癌等在内的多种肿瘤预后差，作为基因靶向治疗的标志物已在治疗乳腺癌、胃癌等方面取得了很好的效果。Enache等[10]研究45例乳头状尿路上皮癌，C-erbB-2在42.2%的患者中阳性表达，并随病理分级的升高而表达增强，提示C-erbB-2的表达与肿瘤的分化和恶性程度及进展有关。Hammam等[11]应用免疫组化和Fish技术检测了C-erbB-2（HER2）在尿路上皮癌中的蛋白和基因表达，结果表明，C-erbB-2在高级别和更高分期的尿路上皮癌中表达显著高于低级别和低分期的尿路上皮癌，HER2阳性的病例有可能从靶向治疗中获益。同样Sasaki等[12]也发现HER2的过表达与较高的组织级分级密切相关，并且可以做肿瘤复发的一个独立预测指标。Bellmunt等[13]研究HER2基因的扩增可以做为浸润性尿路皮癌治疗的一个靶点。Laé等[14]研究1005例尿路上皮癌，按照乳腺癌HER2阳性的判断标准进行判读，发现HER2过表达的病例主要集中在浸润性膀胱癌或复发的膀胱癌，提示HER2过表达提示尿路上皮癌不良的预后，同时可能成为靶向治疗的对象。本研究中，C-erbB-2在癌旁黏膜无表达，但在膀胱尿路上皮癌中表达增强，其表达随着与膀胱癌的组织学分级的增加C-erbB-2的表达也相应增强，因此认为C-erbB-2的表达与膀胱癌的生物学行为存在一定的关联。但是否能从靶向治疗中获益还未见相关报道，可以作为今后的研究方向进一步研究。

总之，p53、CK20和C-erbB-2在尿路上皮癌的表达在尿路上皮肿瘤鉴别诊断中具有重要的临床意义[4，15-16]，并且三者过表达与尿路上皮癌的分级也关系密切，往往提示尿路上皮癌更高的分级，三者的联合检测可以为评估尿路上皮癌的生物学行为，判断尿路上皮癌的分级及预后提供重要依据，HER2基因过表达是否能做为浸润性尿路上皮癌靶向治疗的靶点还需要进一步实验研究。

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Expression of p53，CK 20 and C-erbB-2 in urothelial carcinoma of bladder and its significance

ZHANG Li1，QIU Chengmin1，SUN Weiwei1，GUM inmin1，HEPeifeng1，XU Yanyan1，YANG Daohua2
1.Department of Pathology，Songjiang Center Hospital，Shanghai 201600，China；2.Department of Pathology，Shanghai General Hospital，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200080，China

Ob jective To investigate the expression and significance of p53，CK20 and C-erbB-2 in urothelial carcinoma of bladder（BUC）.Methods The expression levels of p53，CK 20 and C-erbB-2 in 118 cases of BUC and 21 cases of benign lesionswere detected with immunohistochem ical EnVisionmethod.Results In 118 cases of BUC，the positive expression rates of p53，CK 20 and C-erbB-2 were 88.1%，26.3%and 45.8%，respectively.The expression rate of p53 in BUC was significantly higher than that in benign lesions（χ2=13.55，P＜0.01）.The weak positivity rate of p53 in low grade BUC was significantly higher than that in high grade BUC（χ2=8.11，P＜0.01），but the strong positivity rate of p53 in low grade BUC was significantly lower than that in high grade BUC（χ2=9.53，P＜0.01）.The positive rate of CK20 in benign lesions was significantly lower than that in BUC（χ2=5.67，P＜0.05），and the positive rate of CK20 in low grade BUC was significantly lower than that in high grade BUC（χ2=22.17，P＜0.01）.There were significant differences in the expression of C-erbB-2 between BUC and benign lesions（χ2=13.85，P＜0.01）.The strong positivity rate of C-erbB-2 in low grade BUC was significantly lower than that in high grade BUC（χ2=7.91，P＜0.01）.Conclusion p53，CK 20 and C-erbB-2 are over expressed in BUC，and play a role in the diagnosis，differential diagnosis and grading of BUC.

Bladdler neoplasma；Immunohistochemistry；p53；CK20；C-erbB-2

R737

A

2095-378X（2016）03-0157-05

10.3969/j.issn.2095-378X.2016.03.004

2016-07-14）

张 黎（1976—），男，副主任医师，从事临床肿瘤病理诊断及研究

杨道华，电子信箱：nl168@163.com