对蛋鸡禽流感免疫程序和抗体水平的研究

唐友华 云南省大理州祥云县沙龙镇畜牧兽医工作站 672102

对蛋鸡禽流感免疫程序和抗体水平的研究

唐友华 云南省大理州祥云县沙龙镇畜牧兽医工作站 672102

取蛋鸡场的鸡群作为试验对象进行禽流感免疫。结果显示，H5Re-6株疫苗抗体滴度都在4log2以上，达到了群体免疫的效果。通过对H5免疫抗体滴度的测试，发现在蛋鸡开产前经3次以上免疫，开产时均能达到较高抗体滴度 (H5抗体滴度大于6log2)，为产蛋期蛋鸡提供了较高的抵抗能力。产蛋期2～3次免疫接种抗体可以维持较稳定的高水平，因而在鸡蛋里也保存了较高的母源抗体，为商品代鸡提供了很好的免疫保护。产蛋期的免疫间隔以12～16周为宜。

蛋鸡；禽流感；免疫；抗体滴度

1 禽流感的基本概念

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。而禽流感(Avianhinuenza，Al)则是由A型流感病毒引起的一种禽类的疾病综合征。鸡、火鸡、鸭、鹅和鹤鹑等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。该病是世界动物卫生组织(OIE)规定的A类传染病。现时在我国鸡群流行的禽流感病毒主要为H5亚型和H9亚型，能引起感染鸡群生产性能的急剧下降乃至100％的急性死亡,我国将其列为一类动物疫病。

2 病原

引起禽流感的病原为禽流感病毒(AIV)，属于正粘病毒科流感病毒属，系RNA病毒。流感病毒内部的核心由单链核糖核酸及核蛋白组成，根据核蛋白(NP)与基质蛋白(MP)的抗原性不同可分为A、B、C三型，造成危害的禽流感病毒主要是A型。其病毒粒子核心外有一层脂质囊膜，从脂质中伸出许多微粒，即血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)，后两者是流感病毒的表面抗原，根据H与N的不同可区分为不同亚型。血凝素可与红细胞表面的糖蛋白受体结合而发生红细胞凝集现象。流感病毒有变异的特点，主要是H和N的变异。H 有HI-H16，而N仅有N1-Nl0，有时只有一种发生变异，有时两种同时变异。小的变异是抗原的量变，称抗原漂移，形成新的毒株称为变种。当抗原发生较大的变异时是抗原的质变，称为抗原株变，产生新的亚型。流感病毒还可以根据其致病性分为高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒与无致病性禽流感病毒。

3 临床症状及病理变化

高致病性禽流感的表现为发病率和死亡率很高，一般表现为急性死亡，特急性死亡时病理变化不明显。病程稍长时表现为体温升高，精神高度抑郁，食欲废绝，羽毛松乱。气管啰音、鸣叫。鸡冠、肉髯、眼睑水肿。眼结膜发炎，眼鼻腔有较多的浆液性或脓性分泌物，病鸡腿部鳞片有红色或黑色出血。下痢，排出黄绿色稀便。产蛋鸡的产蛋量下降，甚至停产。产蛋下降的同时可见软皮蛋、薄皮蛋、畸形蛋增多。病理变化主要表现为呼吸系统产生炎性分泌物，黏膜充血、出血，肺淤血，气囊内纤维素性渗出，内脏普遍性出血。

低致病性禽流感是由H9N2等血清亚型引起的。该型的特点是潜伏期长、发病比较缓和、病程稍长、发病率和死亡率较低、差异大和疫情范围逐渐扩大，主要引起产蛋鸡发病，青年鸡和雏鸡发病较少，一旦发病，疫情难以控制。病鸡表现为采食量明显减少，饮水增加，精神沉郁，从鼻腔中流出分泌物。眼结膜发红，流泪，眼角有小气泡。呼吸道症状较轻，严重程度不一。有的病鸡表现为咳嗽，有的出现啰音，有的呼吸困难，伸颈张嘴，发出呼吸尖叫声。病鸡水样稀便或排黄绿色稀便，产蛋下降的幅度与持续时间各个鸡群完全不同，下降幅度为20％～80％，一般7～10天后下降到最低点，在此水平停留2周左右才缓慢回升。恢复期软壳蛋、白壳蛋、沙皮蛋和畸形蛋比例增多。产蛋下降幅度和回升快慢与当地鸡群感染毒株的毒力、有否用过疫苗、饲养管理得好坏及是否进行对症治疗等密切相关。总的情况是鸡群感染的毒株为低毒力的，曾经用过禽流感疫苗，饲养管理条件较好，及时进行了对症治疗等，其产蛋下降幅度较小，产蛋恢复也较快，有的鸡群甚至可恢复到发病前的产蛋水平。青年鸡发病时呼吸道症状较明显，发病率高，死亡率与并发感染密切相关，可达5％～60％。低致病力禽流感发生时如并发或继发其他疾病，则症状更加严重，病情更为复杂，死亡率、病死率升高。

4 禽流感的诊断

根据流行病学和临床症状可进行初步诊断，进一步的诊断方法有病理学诊断、病毒分离和测血凝价。血清学诊断方法包括血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、中和试验和免疫荧光技术。其它检测技术有补体结合反应(CF)、单克隆抗体免疫过氧化物酶染色法、放射免疫测定(RIA)、核酸检测技术和荧光RT-PCR技术等。

5 主要疫苗

表达H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)、H5亚型禽流感油乳剂全病毒灭活疫苗。H5亚型禽流感灭活疫苗的制备方法为将水相缓慢加入盛有油相的乳化反应釜中,同时开启高速乳化剪切机进行乳化制备疫苗。

6 本次研究的目的

疫苗免疫是预防和控制高致病性禽流感最有效的方法,我县家禽需要预防的疫病较多,使用的疫苗种类也很多,因此在制定禽流感免疫程序时要兼顾其他疫病的免疫,确保免疫程序科学合理、便于操作。同时定期开展免疫抗体监测,及时掌握免疫抗体水平,通过免疫抗体监测指导养殖户提高防疫认识。

7 试验内容

（1）材料。疫苗为AI油苗H5(Re-6)，取各不同日龄的蛋鸡作为试验鸡群，分3段式饲养。1～6周龄为育雏期、7～24周龄为育成期、25～67周龄为产蛋期。育雏和育成期主要是体重控制、性成熟控制、死淘率控制和均匀度控制，产蛋期主要是饲料的控制、疾病防治、体重控制和保证产蛋性能的正常发挥。鸡舍夏季纵、横两向通风，冬季纵向通风，鸡舍环境包括供暖、排风、光照、舍内气压均为自动控制系统控制。还有体重、温度、湿度、采食量与饮水量自动记录功能。都采用人工加料的方式。

（2）方法。选取不同日龄的蛋鸡作为试验对象，编号为一批、二批、三批。一批为1～6周龄、二批为7～24周龄、三批为25～67周龄，均接种H5（Re-6），一批、二批进行3次接种，三批只进行2次接种。颈部皮下注射,每次接种量为0.5mL。从翅静脉采血，每份血样采集量为0.5～1.0mL。

（3）试验结果。实验结果与分析见表1、表2和图1。

表1 蛋鸡免疫程序

图1 不同日龄蛋鸡H5Re-6株抗体检测结果

（4）结果分析。抗体HI效价测定。按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)血凝抑制试验检测评定HI抗体水平操作方法进行。按照农业部行业标准NY/T7692004进行判定,即HI抗体滴度≥4log2为免疫抗体合格,抗体合格率≥70％为群体免疫合格。

从图1中可以看出，接种H5Re-6株疫苗以后只有前两次的抗体滴度没有达到4log2，以后都在这以上，并维持一个较高的水平，抗体合格率明显高于70％。试验表明，在开产前经3次以上免疫，开产时均能达到较高的抗体滴度。产蛋期2～3次免疫接种抗体可以维持较稳定的水平，因而为产蛋期的蛋鸡提供了很好的免疫保护。从表中可以看出，产蛋期的免疫间隔以12～16周为宜。

表2 第三批蛋鸡H5Re-5株抗体检测结果

（5）讨论。禽流感疫苗的生产由国家严格的控制，目前只指定3～5个厂家生产。关于禽流感疫苗在生产实践中使用效果的报道很少，国内学者的报道多是实验室结果。唐秀英等认为，4～8周龄SPF鸡和20～28周龄蛋鸡免疫后7天产生免疫力，3周达到高峰，抗体值达7.0～10.5log2。免疫后180天，抗体不低于6.5log2，保护率仍可达90％。

实验室条件下疫苗免疫后抗体滴度普遍高于本实验实际使用时的抗体滴度，在生产中应用禽流感疫苗要考虑到实验室与现场环境及试验对象的差异。目前，一些学者己关注到禽流感疫苗的质量标准问题。田国斌等认为，现在疫苗的标准化方面还存在着一些不足，如没有标定疫苗中血凝素抗原的含量，疫苗的免疫效力试验必须用试验鸡进行，检验周期长，浪费大量的人力和物力等。

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