兽医实验室ELISA检测中应注意的问题

2016-03-09辽宁省抚顺市动物疫病预防控制中心113006

当代畜禽养殖业 2016年12期

关键词：血样孵育兽医

于丹辽宁省抚顺市动物疫病预防控制中心 113006

兽医实验室ELISA检测中应注意的问题

于丹辽宁省抚顺市动物疫病预防控制中心 113006

本文主要从ELISA检测的概述入手，对ELISA检测中需要注意的问题，从血样采取与处理、回温、加样、孵育、洗涤、显色和保护等方面进行了分析。

ELISA检测；兽医实验室；问题

在兽医实验室中，ELISA检测工作的核心问题就在于操作的精准性，所以必须在血样采取与处理、回温、加样、孵育、洗涤、显色和保护工作中对其检测的质量进行控制，才能更好地促进这一工作的重要性彰显。

1 ELISA检测的概述

ELISA检测，也就是酶联免疫吸附剂测定的简称。在兽医实验室中，ELISA检测的内容包括猪瘟抗体、蓝耳病抗体和口蹄疫抗体检测。但是在检测过程中，为了确保检测结果的精准性，就必须注意操作方法的正确性。

2 需要注意的问题分析

（1）在血样采取与处理过程中应确保采样轻柔，预防出现溶血的情况，这主要是由于红细胞在溶解过程中所释放的物质中具有过氧化物酶活性的特点，进而对检测结果带来影响。而且标本存储的时间较长就会导致LGG聚合为多聚体，进而出现本底过深和假阳性的出现，所以需要及时对血清样板进行测定，并将其放在4℃的保温箱中。若测定的时间超过3天，应将其低温冰存。

（2）在回温过程中应尽可能地采取低温，一般回温温度只要确保洗涤液的结晶在充分摇动的情况下可以完全溶解即可。

（3）在加样过程中，由于其涉及的环节较多，所以在采用微量加样器时，应严格按照规定的加入量，将其加入到板孔之中，而且在加样过程中应确保加入的样品处于板孔的底部。这样就能有效预防在孔壁上存在的样品，预防样品溅出的同时还要避免其出现气泡。而在加入不同的物质时应更换吸嘴，有效地预防和避免出现交叉感染的情况。但是在显色过程中，主要是采取多道微量加样器，这样才能提高加液的速度，从而更好地统一加样和显色的时间，尽可能地将检测的误差降到最低。

（4）在孵育过程中，由于其在ELISA检测中需要一定的时间，所以其在这一过程中始终处于恒温状态，具体的做法就是在恒温箱中放置ELISA板。同时还要利用封板条将反应孔封住，严禁将反应板叠放，这样就能够有效地预防其蒸发，同时又能够确保每个反应板的温度快速平衡，尽可能地确保温育温度与温育时间的精准性。

（5）由于洗涤直接影响ELISA实验的结果，因此要注重洗涤工作的开展，通过洗涤将ELISA分离游离，同时利用与ELISA结合的酶标记物，将在板孔内残留的物质清除，这样在反应时就能够避免这些物质带来的干扰。首先是预防由于血液凝固导致假阳性的出现，因为血液若凝固不全，将存在吸附纤维的情况，这样洗板不干净，就会导致一些非固相的残留酶的形成，最终导致非特异性的显色效果受到影响。而且当显色很深时，容易将其错误地认为属于强阳性。其次是在洗液过程中，尽可能地在临时使用之前配置新鲜的洗液，预防由于较长的放置时间而出现浑浊的絮状物，否则就会出现花板和堵孔的情况。因而在洗板机使用过程中应对其间隔的时间和洗板液的使用量进行严格控制。最后是在拍板过程中，还应将残余水分拍掉，但是应轻拍轻打，尽可能地减少拍打次数。

（6）在显色之后，应在规定的时间内利用酶标仪及时读取比色的情况，并对结果进行精确判断，这样才能确保显色的质量。

（7）在保护过程中，由于TMB和OPD具有较强的致癌性，因而在这一检测工作中，在操作时还应注意影响检测人员安全的因素，所以必须在检测过程中规范每项检测的标准和流程，强化检测人员的管理，确保整个过程的安全。