优化鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生产工艺参数

李淑红,葛俊伟

(东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)



优化鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生产工艺参数

李淑红,葛俊伟

(东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)

鸭肝炎病毒属于小核糖核酸病毒，分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个血清型。目前，我国只发现鸭病毒性肝炎病毒I型。鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)可用于预防I型鸭肝炎。根据制苗用毒液的制备工艺环节中，不同的鸡胚接种日龄、毒种不同的稀释倍数对鸡胚死亡的高峰时间、每胚的平均收获单产结果都不同。目前存在鸡胚的死亡时间靠前，收率低等问题，为了得到更稳定的产品质量，还需要进一步优化疫苗的生产工艺参数。

鸭；病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)；鸡胚接种日龄；毒种稀释倍数

1 材料

毒种：鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)，由哈药集团生物疫苗有限公司提供，符合毒种标准要求。鸡胚：选用哈药集团生物疫苗有限公司SPF鸡场提供的SPF种蛋，分别孵化成9日龄、10日龄和11日龄的鸡胚。0.85%生理盐水：由哈药集团生物疫苗有限公司配制、灭菌。

2 方法

分组:将鸡胚接种日龄和毒种稀释倍数交叉做试验。鸡胚按孵化日龄分为9日龄、10日龄、11日龄。每个日龄的SPF鸡胚450枚。9日龄、10日龄、11日龄鸡胚均来源于同一批次SPF种蛋。毒种稀释倍数分别为50倍、100倍、5000倍。

接种:将鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)用0.85%灭菌生理盐水分别做50倍、100倍、5000倍稀释，分别接种9日龄、10日龄、11日龄SPF鸡胚，经绒毛尿囊腔接种0.2mL/胚。先用75%的消毒酒精喷洒于蛋壳气室部位进行消毒，作用30s，然后用蛋锥在气室正上方中间部位打孔，接种后封蜡，放37℃继续孵育，不必翻蛋。

孵育和观察：接种24h后，每6h照蛋1次，直到96h。记录每一时间段的死胚数，取24～96h死亡的鸡胚，置2～8℃冷却。

收获：将冷却4～24h的鸡胚，用无菌手术分别收取绒毛尿囊液及羊水、胎儿、绒毛尿囊膜，每若干个混为一组，置于灭菌瓶中。每组分别取样进行无菌检验，并测定收获鸡胚的病毒含量。

通过观察不同鸡胚接种日龄和毒种稀释倍数对鸡胚死亡高峰时段的影响以及每胚收获单产的影响，来选择最适合的鸡胚接种日龄和毒种稀释倍数。

3 结果与分析

表1 不同日龄和不同稀释倍数对鸡胚影响的测定结果

续表：

试验次数组别日龄稀释倍数接种数量(枚)死亡高峰时段(h)胚收获单产(mL)病毒含量(鸡胚)395015030～424.037.0A105015030～484.117.17115015036～544.186.5910015030～483.986.83B1010015042～544.397.01110015048～544.556.839500015036～484.227.0C10500015048～665.327.011500015054～785.657.17

由表1可以看出将鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)做50倍稀释分别接种9日龄、10日龄、11日龄SPF鸡胚时，对鸡胚死亡高峰时段、胚收获单产的影响差异不大。

将鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)做100倍稀释分别接种9日龄、10日龄、11日龄SPF鸡胚时，10日龄、11日龄较9日龄在鸡胚死亡高峰时段上推后6～12h，10日龄接种较9日龄接种平均单产提高9.64%；11日龄接种较9日龄接种平均单产提高13.45%。

将鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)做5000倍稀释分别接种9日龄、10日龄、11日龄SPF鸡胚时，10日龄、11日龄较9日龄在鸡胚死亡高峰时段上推后12～18h，10日龄接种较9日龄接种平均单产提高24.27%；10日龄接种较9日龄接种平均单产提高35.68%。

4 讨论

本次优化鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)生产工艺参数试验，意在寻找鸭病毒性肝炎病毒在鸡胚繁殖过程中，在确保半成品病毒含量达到规程标准要求的前提下提高收获率，通过选择不同鸡胚接种日龄与毒种稀释倍数的交叉试验比较，将鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒株(CH60株)进行5000倍稀释接种11日龄鸡胚，鸡胚死亡高峰向后推迟，收获单产提高。毒种稀释倍数较小时，无论鸡胚日龄大小，因为单位体积内的病毒含量大，对鸡胚致死的差异度大，放大毒种稀释倍数，接种不同日龄鸡胚，结果差异显著。

2016-10-28

李淑红(1979-),女,辽宁康平人,本科,兽医师，主要从事兽用生物制品的生产工作。 通讯作者：葛俊伟(1977-),男,河南新乡人,博士,副教授,硕士生导师，研究领域：预防兽医学。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.12.006

S858.32

B

2095-9737(2016)12-0011-02