鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

梁 惠　（山东省蓬莱市大辛店畜牧兽医工作站　265612）

鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

梁 惠（山东省蓬莱市大辛店畜牧兽医工作站265612）

采集蓬莱某养鸡场疑似鸡白痢病死鸡的肝脏、脾脏、肾脏等作为病料，进行细菌的分离、生化鉴定、血清型鉴定及药敏试验。试验结果表明，分离得到的3株分离株均是鸡白痢沙门氏菌，其血清型分别为2株O9、1株O12。药敏试验结果表明：分离株对头孢噻呋和阿米卡星高敏；对卡那霉素、庆大霉素和新霉素中敏；对环丙沙星和链霉素低敏。因此头孢噻呋和阿米卡星可以很好的作为该养鸡场预防和治疗鸡白痢的药物，然而其他抗生素可以减少其使用量或停用。

鸡白痢沙门氏菌分离鉴定药敏试验

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的鸡的一种败血性传染病，严重影响雏鸡的成活率和成年鸡的生产性能，对养鸡业危害严重[1]。使用抗生素进行治疗是防治鸡白痢的主要措施之一，由于抗生素药物的长期使用以及不合理使用，导致鸡白痢沙门氏菌的耐药性日益严重[2]，如何选择有效的药物进行治疗，成为一个问题。本试验采集蓬莱某养鸡场疑似鸡白痢的病料进行细菌分离鉴定及药敏试验，筛选出有效的药物，希望能为该养鸡场鸡白痢的防治提供一定的理论指导。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1病料采集蓬莱某养鸡场疑似鸡白痢病死鸡的肝脏、脾脏、肾脏等作为病料。

1.1.2培养基、试剂SS琼脂平板、EMB琼脂平板、三糖铁培养基、药敏纸片均购自青岛生物制品研究所，生化鉴定试剂购自上海静融生化试剂有限公司，沙门氏菌O多价抗血清、O单因子抗血清购自广州真知生物技术有限公司。

1.2方法

1.2.1细菌分离将采集的病料分别划线接种于SS培养基、EMB培养基，置37℃生化培养箱培养18-24h，挑取单个可疑菌落涂片染色镜检，并挑取可疑的菌落进行反复划线直到得到纯培养。

1.2.2生化鉴定参考《兽医微生物学》[3]介绍的方法，将分离菌株依次接种在三糖铁培养基、葡糖糖、乳糖、甘露醇和蔗糖等发酵管，经37℃培养24-48h观察结果。

1.2.3血清型鉴定将分离菌株接种在EMB培养基上，然后在37℃生化培养箱培养24h，用0.5%生理盐水冲洗培养物，再经过120℃高温处理2h，得到抗原。分别与沙门氏菌O多价抗血清、O单因子血清做玻片凝集试验[4]，同时用生理盐水做对照试验，分别混和均匀后，反应1～3min，观察现象，出现凝集者为阳性，则不凝聚者为阴性。

1.2.4药敏试验将经过纯化培养的细菌接种在TSB培养液中，37℃培养12h，然后取2滴菌液均匀涂于TSA平板上，用无菌镊子夹取各种药敏纸片，平贴于培养基表面，每个药敏片的间距不小于20mm，药敏片的中心距平板的边缘不小于15mm，最后倒置于生化培养箱37℃培养24h，观察结果，抑菌圈直径的大小作为供试菌株敏感指标报告敏感、中度敏感和低度敏感的结果。

2　结果与分析

2.1细菌分离结果

经培养后，在SS培养基、EMB培养基上出现无色、半透明、光滑、圆形的小菌落。经反复划线，得到3株分离株。

2.2生化鉴定结果

3株分离菌生化特性一致，具体表现为，在TSI中不分解乳糖及蔗糖，下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色，斜面呈红色；3株分离株发酵葡萄糖、甘露醇产酸产气，不利用乳糖，发酵木糖，肌醇、卫矛醇反应为阴性，没有H2S生成，生化反应符合沙门氏菌的特性，具体结果见表1。

表1　糖发酵试验结果

2.3血清型测定结果

将分离到的3个菌株分别与沙门氏菌O多价抗血清做玻片凝集试验1～2min后，反应结果全部呈阳性凝集。分别与O单因子血清玻片凝集试验时，发现有2株和O9因子出现了颗粒凝集的现象，1株与O12因子出现了颗粒凝集的现象。生理盐水对照组不发生凝集反应。通过以上试验鉴定，确定该3株分离菌中有2株O9血清型，1株O12血清型。

2.4药敏试验结果

3株细菌对阿米卡星和头孢噻呋的表现为高敏；而对庆大霉素、新霉素、卡那霉素表现为中敏；对环丙沙星以及链霉素则表现为低敏或不敏感，见表2。

表2　药物的抑菌圈平均直径

3　讨论

（1）雏鸡鸡白痢与禽伤寒的临床表现及病理变化相似，但两者的病原体分别为鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌，鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的生化特性存在显著差异，本试验分离的3株分离菌均不发酵卫矛醇，这与鸡伤寒沙门氏菌的生化特性不相符，而符合鸡白痢沙门氏菌的生化特性，因此说明分离菌为鸡白痢沙门氏菌。（2）本试验药敏试验的结果与金艳丽[5]的测定结果差别很大，这表明鸡白痢沙门氏菌由于用药种类和用药习惯的不同会使鸡白痢沙门氏菌耐药性发生变化，本地区耐药性较高主要是因为兽医临床上使用频率较高的链霉素和环丙沙星药，这可能与鸡场由于疾病的压力而长期大量使用此类抗生素进行药物预防或饲料中添加过多的原因导致，由此警示临床治疗时应慎用此类药物[6]。而分离株对头孢噻呋和阿米卡高度敏感，因此头孢噻呋和阿米卡星可以很好的作为该养鸡场预防和治疗鸡白痢的药物。（3）本试验分离得到的鸡白痢沙门氏菌血清型为O9和O12，与江苏徐州市的吕华申、孙鹏[7]分离到O9、O12和O1不同，这说明鸡白痢是由多种血清型鸡白痢沙门氏菌混合感染而引起的，在以后的检验检疫过程中，应该多挑取疑似菌落并且逐一的进行病原体的分离与鉴定，以确定其血清型，本试验分离株血清型的确定为该养鸡场以后疫苗的研究及预防提供一定的理论基础。

[1] 王新华, 银梅. 禽病检验与防治[M]. 北京: 中国农业出版社, 2013: 222-225.

[2] 张凌云. 鸡场沙门氏菌的分离鉴定及耐药性研究[D]. 沈阳: 吉林农业大学, 2011: 7-8.

[3] 陆承平. 兽医微生物学[M]. 北京: 中国农业出版社, 2011: 155-158.

[4] 马兴树. 禽传染病实验诊断技术[M]. 北京: 化学工业出版社, 2005: 280-282.

[5] 金艳丽. 鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 山东畜牧兽

医. 2014(1): 12-14.

[6] 严晓玲, 邵红. 鸡白痢沙门氏菌临床分离株的耐药性分析[J]. 黑龙江八一农垦大学学报, 2012, 24(2): 23-26.

[7] 吕华申, 孙鹏. 江苏徐州市鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定和耐药性分析[J]. 中国动物检疫. 2014, 31(12): 50-51.

S852.61

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1007-1733(2016)12-0015-02

（2016–08–26）