近三年东海县H5高致病性禽流感免疫抗体监测及分析

胡传利,闫颖颖

(江苏省连云港市东海县畜牧兽医站，江苏 连云港 222300)



近三年东海县H5高致病性禽流感免疫抗体监测及分析

胡传利,闫颖颖

(江苏省连云港市东海县畜牧兽医站，江苏 连云港 222300)

为了全面了解和掌握东海县近几年禽流感的免疫效果，科学评价基层免疫工作质量，作为实验室检测人员的笔者汇总了从2013～2015年3年的试验结果，共采集血样5888份，合格数量是5147，合格率是87.41%，合格率高于农业部要求的70%的标准。

高致病性禽流感；抗体水平；监测与分析

禽流感是由A型流感病毒引起多种家禽及野鸟发病的高度接触性传染病，又名欧洲鸡瘟。高致病性禽流感是世界养禽业最重要的疫病之一[1]，给养禽业带来了巨大的损失。在我国采取以疫苗免疫为主的综合性防治措施来防控该病。每年东海县不定期对已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗体进行检测，掌握抗体水平，同时适时指导防疫，这样对防控高致病性禽流感的发生和流行具有十分重要的作用。现将东海县从2013～2015年高致病性禽流感免疫抗体检测结果分析讨论如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验动物来自江苏省连云港市东海县21个乡镇的部分规模鸡场和散养户。

血清样品：采集全县21个乡镇的部分规模鸡场和散养户鸡的全血，血液凝固后以3000r/min离心5min，吸出血清，4℃保存。如果近期不进行检测的话最好冷冻保存。

主要仪器：V型96孔微量反应板，离心机，微量振荡器，微量移液器及相配的枪头，洗板机，灭菌离心管。

禽流感标准抗原和阳性血清：禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原和阳性血清购自青岛易邦生物工程有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 单位抗原校正

①首先用微量移液枪向反应板的第2～6孔加生理盐水25μL。第1孔不加。②用微量移液枪吸取4U抗原25μL分别加入第1孔、第2孔，从第2孔开始挤压6次混合，后吸出25μL至第3孔，依次倍比稀释到第5孔，弃去25μL。③用移液枪再吸取1%红细胞悬液依次加入到1～6孔，每孔25μL。④于微量振荡器振荡1min。室温静置30min后观察结果。⑤结果观察：第1、2、3孔为完全凝聚，第4孔红细胞为50%沉淀，第5孔为对照完全沉淀，如果出现以上结果，表明所配4U抗原准确，校正成立。一定要进行4U抗原的校正，否则影响后面的试验结果。

1.2.2 抗体检测方法

按照国标GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》和禽流感微量红细胞凝聚抑制试验(SN/T1182.2-2004)[2]规定，采用血凝抑制试验，集中对血清样品机械实验室检测，并作系统分析。

1.2.2.1 血凝试验操作方法

①在V型微量反应板中，每孔加入25μL的PBS；②第1孔加入25μL抗原，依次作25μL的对比稀释至11孔；③每孔加入25μL PBS；④每孔加入25μL 1%的红细胞；⑤将反应板在振荡器上震荡1～2min，室温静置40min；⑥结果判定：将反应板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌，完全无泪滴样流淌的最高稀释倍数为血凝效价。

1.2.2.2 血凝抑制试验操作方法

①根据血凝试验测定的效价，计算配置4U抗原。血凝效价除以4即为含4U抗原的稀释倍数。②反应板中第1～11孔加入25μL的PBS，第12孔加入20μL的PBS；③第1孔加入25μL的血清；④在反应板上将血清作25μL的稀释，至第10孔；⑤第1～11孔均加入25μL的4U抗原，室温下静置30min。⑥每孔加入25μL1%的红细胞，轻晃均匀后，室温静置30min，当对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。

1.2.2.3 结果判定

以完全抑制4U抗原的最高血清稀释倍数为该血清的血凝抑制效价。当阳性对照血清的试验结果符合血凝抑制试验的要求，阴性血清效价不高于1∶4时候，试验才成立。被检样品血凝抑制效价小于等于1∶4的为阴性，大于等于1∶16的为阳性。

2 试验结果

2.1 不同年份免疫抗体合格率情况

表1 不同年份免疫抗体合格率情况

由表1可见2013～2015年共检测5888份血清，2013年的合格率为82.06%，2014年的合格率为87.15%，2015年的合格率为96.21%，近三年整体的合格率为87.41%。

2.2 免疫次数与免疫效果的相关分析

表2 免疫次数与免疫效果的相关分析

由表2可见，免疫次数越多，合格率越高。

2.3 不同饲养方式免疫抗体合格率情况

表3 不同饲养方式免疫抗体合格率情况

由表3可见，规模场的合格率远高于散养户的合格率。

3 分析与讨论

从以上数据可以看出，近三年东海县的高致病性禽流感的抗体水平为87.41%，远远高于农业部规定的70%的要求。我们通过这几年的试验也验证了一点，免疫1次的合格率仅为31.52%，而免疫2次以上的合格率高达88.74%，随着免疫次数的增加，抗体合格率明显升高，免疫效果与免疫次数成正比的关系。

规模场比散养户的抗体合格率高，据分析其原因是，规模场的技术力量强，技术人员操作熟练，保证了禽流感的抗体合格率。另外，规模场防疫意识比较强，管理实行规范化、科学化、常态化；而散养户，养殖量小，硬件设施跟不上，防疫意识差，免疫工作不到位，所以抗体水平低。

禽流感抗体监测工作是评价和指导防控工作的重要措施。在家禽养殖中，长期对AI的血清学监测是十分必要，通过血清学监测，可以准确掌握疫情动态，科学地进行综合免疫预防禽流感，尤其是高致病性禽流感。禽流感防控是一项长期持久的工作，但只要认真做好疫情的监测，及时采取有关措施，紧急免疫预防，禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消灭的。

从最近三年的数据可以看出，禽流感抗体的合格率是逐年提高的，说明东海县在禽流感防控这方面做的很到位，尤其是在2016年更加大了力度，要求各乡镇(街道、场、区)及相关养殖企业要高度重视监测结果，针对存在问题，要追本溯源，明确责任，免疫抗体未达标的乡镇(街道)要深刻反思、认真查找原因，及时组织整改。一要开展补免。要针对规模场、小规模养殖及散养畜禽的不同特点，实行分类指导，强化程序免疫与集中免疫相结合，不留死角，确保抗体合格率达标。二要加强对自免规模养殖场的监管。大力推广使用政府采购的免费疫苗。要加强对防疫员、规模场技术人员防疫知识的普及，适时开展免疫技术培训，规范免疫操作。三要加强疫苗存储、运输等环节的冷链管理，及时保养维修，确保疫苗质量。四要适时开展免疫监测采样，根据监测结果进行疫情分析，及时补免，确保全县畜禽重大动物疫病免疫抗体处于有效保护状态。

[1] 刘素梅,杨士清,张连英,等.禽流感区域控制重点环节-抗体监测应用技术的探讨[J].当代畜牧，2006(03)：9.

[2] 国家标准化管理委员会.SN/T1182.2-2004禽流感微量红细胞凝聚抑制试验[S].北京：中国标准出版社,2004.

2016-07-21 修改日期：2016-07-22

胡传利(1979-)，女，江苏东海人，硕士研究生，兽医师，主要从事动物门诊诊疗及实验室检测工作。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.11.002

S851.3

A

2095-9737(2016)11-0002-02