黄香楝树活性成分的提取及防晒研究

朱俐俐，李易珍，王玉变，代东，冯海,2*

（1.浙江工业大学药学院，浙江杭州310032；2.普陀晨帆海洋科技有限公司，浙江舟山316100）

精细化工

黄香楝树活性成分的提取及防晒研究

朱俐俐1，李易珍1，王玉变1，代东1，冯海1,2*

（1.浙江工业大学药学院，浙江杭州310032；2.普陀晨帆海洋科技有限公司，浙江舟山316100）

目的：研究黄香楝树活性成分的提取优化并考察其防晒作用。方法：采用溶剂提取法，对影响提取的料液比、提取时间、温度、溶剂浓度（V%）四个因素进行正交优化，制成防晒用品并与市售产品进行对比研究。结果：最佳提取条件为料液比1：5，提取时间90 min，温度50℃，乙醇浓度85%，33.3μg/mL的提取物在UVB段平均吸光度达到0.896，且防护效果优于市售防晒霜。结论：按上述条件提取的防晒活性成分在UVB段有较强紫外吸收能力，可开发成天然植物防晒用品。

黄香楝树；UVB；防晒

随着大气中臭氧层的破坏日益严重，紫外线对人体造成的损伤逐渐引起重视。紫外线可分为UVA、UVB、UVC[1]，其中UVB（280～320 nm）照射会导致皮肤出现红斑、色素沉着以及DNA损伤等一系列问题。目前常用的防晒成分分为化学和物理防晒剂，化学防晒剂虽具有较好的紫外吸收效果，但对皮肤有一定刺激性，而不含化学合成物的天然防晒剂则可用于孕妇、婴儿等敏感人群。

黄香楝树（Hesperethusa crenulata），属芸香科，是生长于印度次大陆和东南亚地区的热带植物。在缅甸，人们将其磨成的粉末称为特纳卡（Thanakha）并涂抹于脸上，用于防晒、清凉、美容，但存在使用不便及影响美观等问题，提取其有效成分可用于化妆品制备[2]。本文采用溶剂提取法，以UVB段紫外吸收为评价指标[3]，采用正交优化筛选出最佳提取条件，并以小鼠为模型动物，观察其防晒效果。

1 实验部分

1.1 实验材料

黄香楝树（缅甸）、ICR小鼠[浙江省医学科学院，许可证：SCXL[（浙）2014-0001]、UVB紫外灯（8 w×4，上海季光特种照明电器厂）、Spectramax M2e型多功能酶标仪（Molecular Devisces）、二氯甲烷（上海凌峰华兴试剂有限公司，分析纯）、丙酮（杭州双林化工试剂厂，分析纯）、市售防晒霜（watson，SPF=30）。

1.2 实验方法

1.2.1 提取溶剂选择

相关研究表明，黄香楝树防晒活性成分存在一定极性，因此分别用95%乙醇、二氯甲烷、丙酮、水进行提取。将黄香楝树树皮粉碎，过50目筛，分别用上述四种溶剂加热回流提取2 h，料液比为1：10得到提取物，稀释150倍后测定其在200～400 nm处的吸光度。

1.2.2 提取单因素考察

1.2.2.1 实验方法

取黄香楝树粉末10.00 g，采用乙醇溶剂加热回流提取，旋蒸得到产物，精密称取0.0200 g产物，溶于4 mL乙醇，稀释150倍后测定其在280 nm、290 nm、300 nm、310 nm、320 nm处吸光度A，取其平均值为UVB段吸光度[4]。

1.2.2.2 单因素考察

根据1.2.2.1方法，对不同提取时间（30 min、60 min、90 min、120 min、150 min、180 min）、不同温度（30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）、不同乙醇浓度（55%、65%、75%、85%、95%）、不同料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶30）四个单因素进行考察。

1.2.3 正交试验优化

根据1.2.2得出主要影响因素为料液比（A）、提取温度（B）、乙醇浓度（C）、时间（D）四个因素，以四因素三水平建立如表1所示因素水平表，进行L9（34）正交设计。

表1 优化提取条件的因素水平表

1.2.4 提取物处方设计

对提取活性成分进行制剂研究，设计处方：油相：液体石蜡2.5 g，硬脂酸甘油酯2.5 g，凡士林0.5 g，软磷脂0.5 g，提取物溶液（1 g、2 g提取物分别溶于2.5 g 1，2-丙二醇）；水相：丙三醇1 g，吐温800.5 g，HA（0.5%10 mL），纯水加至50 mL[5]。

制备方法：将油相加热至80℃，在10000 r/min条件下将油相缓慢加入80℃水相，乳化3 min，室温下自然冷却[6]，制成含提取物2%、4%两种不同浓度的制剂备用。

1.2.5 黄香楝树提取物抗小鼠光损伤实验

根据文献建立小鼠光损伤模型，取24只ICR小鼠，雌雄各半，8%Na2S脱去小鼠脊柱两侧毛（皮肤完整，无红斑、无破损）。24 h后随机分成3组，分别为黄香楝树高、低剂量组、市售组。3%水合氯醛麻醉，将皮肤划分为左右两个区域，左侧涂抹空白对照制剂，右侧涂抹1.2.4制成的样品或市售防晒霜，乳剂用量约为0.05 g/cm2，30 min后置于紫外灯下照射，紫外线强度为240μw/cm2，每次照射5 min，每天1次，连续照射5天，观察小鼠背部皮肤状态[7]。

2 结果与讨论

2.1 黄香楝树最佳提取溶剂选择

不同溶剂提取物在200～400 nm的紫外吸收图谱如图1可知，在UVB波段，吸光度大小依次为乙醇＞丙酮二氯甲烷＞水。乙醇提取物在230 nm和280 nm有两处明显的吸收峰，UVB吸收效果优于其他三种溶剂。因此采用乙醇作为提取溶剂进行后续实验。

图1 不同溶剂提取物的紫外吸收

2.2 单因素考察

以UVB紫外吸收率作为指标，对提取的条件进行考察。

料液比对提取物紫外吸收的影响如图2所示，在1∶5～1∶15之间随着料液比增大吸光度增加，而当其大于1∶20，紫外吸收未增加反而降低，因此最佳料液比区间为1∶5-1∶15。提取温度对产物紫外吸收有较大的影响，如图3所示，当温度较低时，产物的吸光度较小，而当升高到50℃吸光度变化不大，80℃反而有所降低，因此最佳提取温度区间为50℃～70℃。乙醇浓度单因素结果如图4所示，表明乙醇浓度增加，吸光度随之增加，所以最佳浓度区间为65%～95%。如图5所示，回流时间于90 min之前，紫外吸收较低，所以最佳提取时间90～150 min。

图2 料液比对提取物紫外吸收的影响

图3 提取温度对提取物紫外吸收的影响

图4 乙醇浓度对提取物紫外吸收的影响

图5 提取时间对提取物紫外吸收的影响

2.3 正交试验考察

从单因素考察结果可知料液比、提取温度、乙醇浓度、时间对黄香楝树提取物的紫外吸收均有影响。通过正交试验研究各因素对结果的影响，采用L9（34）正交设计表进行实验，得到表2结果。

表2 优化提取条件的正交试验结果直观分析表Tab 2 arrangement and results of orthogonaltest

由表2结果可知，各因素对活性成分紫外吸收能力影响大小依次是提取时间>乙醇浓度>料液比>温度，最佳的提取工艺为A1B1C2D1，即料液比为1∶5，提取温度为50℃，乙醇浓度为85%，时间为90 min。正交优化的结果与单因素实验的结果一致。最佳工艺得到的紫外吸收平均值为0.896，RSD小于2%，表明正交优化得到的结果具有较好的重复性。

2.4 黄香楝树提取物抗小鼠光损伤实验

紫外照射后，左侧空白对照的皮肤随着UVB照射剂量的增加，出现了粗糙、红斑、脱屑、结痂的现象；低剂量组小鼠皮肤产生红斑，但明显少于左侧对照处，而随着照射剂量的增加，右侧皮肤出现结痂现象，证明低剂量组抗光损伤能力较弱；高剂量组小鼠皮肤如图6b所示，右侧皮肤稍有红斑和脱屑，未出现结痂现象，证明其抗光损伤效果明显优于低剂量组；市售防晒霜组皮肤如图6c所示，右侧皮肤仅有少量红斑、红肿出现，与高剂量组情况相似。

图6 提取物抗小鼠光损伤实验

3 结论

本文采用溶剂提取法对黄香楝树粉末进行提取，以紫外吸收能力为指标，正交优化后得到最优提取条件。制成制剂后用于小鼠紫外照射对比实验，结果证明提取物在UVB段具有较强的紫外吸收能力，可作为一种天然植物防晒成分，减少紫外线照射造成的光损伤，在防晒化妆品领域具有潜在的前景和价值。

[1]张殿义.紫外线伤害皮肤的机理与防护[J].日用化学品科学，2007，30（5）：20-22.

[2]Sakulna W，Tanapat P，Sirirat R，et al.Biological activities and safety of Thanaka（Hesperethusa crenulata）stem bark[J].Journalof Ethnopharmacology，2010，132（2）：466-472.

[3]陈淑映，罗德祥，何锦钧，等.100种常用中草药乙醇提取液的防晒性能测定[J].国际医药卫生导报，2005，（6）：67-69.

[4]陈淑映，罗德祥，黄健，等.具有提取天然防晒剂价值的中草药[J].广东药学，2005，15（2）：7-9.

[5]李艳民，郑林，林滔.3种乳化方法对水包油型乳膏基质质量的影响[J].中国实用医药.2008，3（26）：172.

[6]杨建华，孟新源，胡君萍，等.苁蓉美白防晒霜的制备及其质量评价[J].华西药学杂志，2011，26（3）：271-273.

[7]林银花，周欣，宋洪涛.防水型防晒乳膏皮肤刺激性及光毒性的实验研究[J].解放军药学学报，2010，（3）：210-212.

Research on Protective Effects against Ultraviolet Radiation of Extract from Hesperethusa Crenulata

ZHU Li-li1,LIYi-zhen1,WANG Yu-bian1,DAIDong1,FENG Hai1,2*
（1.Zhejiang University of Technology，Hangzhou，Zhejiang 310032，China；2.PutuoChenfan Sino-tech Oceanic Co.，Ltd，Zhoushan，Zhejiang 316100，China）

Objective：Researched on getting the active ingredients by solvent extraction from Hesperethusacrenulata method and evaluate anti-UV effect.Methods：Selected the extraction conditions of Hesperethusacrenulata by Orthogonal Test techniques,the ultraviolet absorption properties and extraction yield were target.Results：The optimal extraction conditions were as follows：1∶5 of the ratio of material and solvent,extracting for 90 min，50°C,85%ethanol concentration,and the average absorbance of the active ingredientswas 0.896,and its anti-UV effect was better thansunscreen on sale.Conclusion：Ethanol extracts of Hesperethusacrenulatashowed good protection effect which was caused by UVB irradiation,and it can be used as a natural sun-screening agent in cosmetics.

Hesperethusacrenulate;UVB;anti-UV

1006-4184（2016）11-0022-04

2016-05-06

舟山市普陀区科技计划项目（编号：2015 GY302）。

朱俐俐（1991-），女，浙江金华人，硕士研究生在读，主要从事药物新剂型与新技术研究。

*通讯作者：冯海，E-mail：fenghai289289@163.com。