浅谈动物源革兰阴性细菌耐药检测及药敏应用体会

刘保光　王国强　宋博利

随着我国畜牧业的快速发展，兽医临床大量使用抗菌药物，使得细菌耐药和兽药残留问题日趋严重。鉴于此，笔者主要对动物源革兰阴性细菌耐药性的产生、耐药表型、基因检测及药敏试验应用要求进行了探讨，以供参考。

一、革兰阴性细菌耐药性的产生

细菌耐药性是指病原微生物对抗菌药物的抗性，大多是由质粒及其它遗传物质携带外来DNA或基因突变导致的。随着抗菌药物在兽医临床的应用，革兰阴性细菌耐药问题日趋严重，其中以大肠杆菌、沙门菌、绿脓杆菌及肺炎克雷伯菌最易产生耐药性。

二、革兰阴性细菌耐药表型检测

判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据临床实验室标准协会（CLSI）标准，通过药物纸片法测量抑菌圈直径、微量肉汤稀释法计算MIC值大小来判断。

1.药物纸片法

在普通琼脂平板表面均匀涂抹待检细菌，用镊子将药敏纸片贴于平板表面，37℃过夜培养，用游标卡尺测量药敏纸片的抑菌圈直径，并记录结果。

2.微量肉汤稀释法

按刘保光等报道的微量肉汤稀释法，进行操作。

三、革兰阴性细菌主要耐药基因检测

1.β-内酰胺酶及AmpC酶耐药基因

随着β-内酰胺类药物在兽医临床的大量使用，产生了β-内酰胺酶，其基因有blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaOXA和AmpC酶blaACC、blaCIT、blaDHA、blaEBC、blaFOX、blaMOX等。据有关报道[6-7]，在动物源多种细菌检出过该类基因。

2.质粒介导氟喹诺酮类耐药基因

随着氟喹诺酮类药物在兽医临床的大量使用，产生了质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因，包含有oqxAB、qm-A、qm-B、qnrC、qmD、qmS、ace（6）-lb-cr、qepA等。

3.氨基糖苷类（16S甲基化酶）耐药基因

随着氨基糖苷类药物在兽医临床的大量使用，对氨基糖苷类药物耐药的基因包含有arrnA、npmA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE等。

4.西环素类耐药基因

随着四环素类药物在兽医临床的大量使用，对四环素类药物耐药的基因包含tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、terM。

5.磺胺类耐药基因

随着磺胺类药物在兽医临床的大量使用，对磺胺类药物耐药的基因包含sul1、sul2、sul3、dfrA1、dfrA5、dfrA12、dfrA17。

6.多重耐药基因cfr

随着兽用药物的广泛应用，多重耐药基因cfr被报道。

四、药敏应用体会

作为兽医工作者，能结合本地区进行药敏试验的操作，现总结几点要求，以供参考。

1.要按要求及标准操作

纸片扩散法、微量肉汤稀释法必须按标准要求操作，如培养基选择、药物浓度、培养时间、菌液接种量、结果判定标准等，应该按照CLSI颁布标准执行。此外，严格无菌操作。

2.要合理选择药物

首先，按照CLSI要求选择药物种类、代表药物，如氨基糖苷类应选新霉素及庆大霉素，头孢菌素类应选动物专用三代头孢。其次，要选择提示药物，如大肠杆菌对头孢曲松、头孢他啶耐药提示会产生β-内酰胺酶。

五、结语

总之，针对目前动物源革兰阴性细菌耐药严重问题，加强对兽医临床细菌耐药表型、耐药基因检测及药敏试验应用要求显得至关重要。本文对之进行探讨，旨在对兽医工作者合理选用药物及应用药敏试验具有重要意义。