防治胡椒瘟病的生物农药和新型低毒化学农药筛选

桑利伟　刘爱勤　高圣风　孙世伟　苟亚峰　王政　孟倩倩

摘 要 胡椒瘟病是危害我国胡椒产业的首要病害，目前基本依赖使用化学农药防治。筛选应用生物农药是减少化学农药用量的有效途径。本文采用生长速率法测定胡椒瘟病病原菌对12种生物农药和新型低毒化学农药的敏感性。结果表明：70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分别为0.211 3、0.49和0.78 μg/mL。

关键词 胡椒瘟病病原菌 ；生物农药 ；敏感性

中图分类号 S482.2 文献标识码 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.10.010

Abstract Back pepper Phytophthora foot rot is the most serious disease of the black pepper in China. At present， the control of this disease depends on the use of chemical fungicides， and the screening and using of biological fungicides is an effective way to reduce the dosage of chemical fungicides. Phytophthora capsici was treated with 12 biofungicides and low toxic chemical fungicides to test its sensitivity to the fungicides by using the mycelium growth rate method. The results showed that these 12 fungicides displayed various inhibition effects on mycelium growth of P. capsici， while Enoyl Azoxystrobin WG 70%， Trichoderma WP and Bacillus subtilis WP proved to be the most effective fungicides with EC50 values of 0.2113 μg/mL， 0.49μg/mL and 0.78 μg/mL respectively to control the Phytophthora foot rot.

Keywords Phytophthora capsici ； Biological fungicide ； Sensitivity

胡椒（Piper nigrum）是一种热带特色香辛作物，也是一种深受人们喜爱的调味品，在食品、医疗保健等领域用途广泛，产品附加值高。海南是中国胡椒的主产地，其种植面积和产量均占全国总量的98%以上，目前种植面积达26 667 hm2，年产值约30亿元，已成为近百万热区农民致富的特色优势作物。胡椒瘟病是危害我国胡椒生产的首要病害。该病是由疫霉菌（Phytophthora capsici）侵染引起的一种传染性很强的土传性病害，病情严重的胡椒园损失达90%以上，甚至全园毁灭[1]。目前，该病害防治多依赖化学农药，出现农药越打越多、病害防治越难的问题。应用生物农药替代化学农药，是实现农药减量的主要途径。本文通过药剂的毒力测定，筛选出防治胡椒瘟病的生物农药和高效低毒低残留农药，提高绿色防控技术水平，为促进我国胡椒产业绿色可持续发展提供技术保障。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种与药剂

辣椒疫霉（Phytophthora capsici），2013年11月由笔者从香饮所胡椒种植基地采集的叶片中分离、鉴定所得。供试药剂见表1。

1.1.2 供试培养基

PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖16 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH自然。马铃薯去皮，切成块煮沸0.5 h，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1 000 mL。1.05 kg/cm2，121℃灭菌20 min。

1.2 方法

首先，通过预实验确定不同供试药剂的浓度梯度，将不同浓度梯度的供试药剂溶液加入PDA培养基中，各供试药剂有效成分在PDA培养基中含量见表1。采用生长速率法[2]，测定供试药剂对胡椒瘟病菌的抑制作用。培养72 h后检查各处理菌的生长情况，十字交叉法测量菌落直径，计算抑制生长率，抑制生长率/%=（A-B）-（C-B）/（A-B）×100%，其中A为对照菌落直径，B为菌饼直径，C为处理菌落直径。将抑制率转化为几率值，将剂量取对数，求出毒力回归方程，进一步算出EC50[3]。

2 结果与分析

2.1 不同供试药剂对胡椒瘟病菌的EC50值比较

各供试药剂的毒力回归方程、相关系数R2、斜率值和EC50，见表2。

供试药剂按照EC50基本上可以归为4类：70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP，EC50介于0.21～0.78 μg/mL，EC50非常小，说明这三种药剂抑菌效果最好；芽孢杆菌/淡紫拟青霉WP和75%肟菌·戊唑醇WG，EC50介于18.62～89.13 μg/mL，这两种药剂抑菌效果较好；20%嘧菌酯WG、和30%苯甲·嘧菌酯SC的EC50分别为190.5和213.8 μg/mL，说明这2种药剂抑菌效果一般；2%武夷菌素AS、哈茨木霉WP、1.5%苦参·蛇麻素AS、45%异菌脲SC、和24%腈苯唑SC，EC50介于2 691.5～7 762.5 μg/mL，这五种药剂抑菌效果较差。

2.2 胡椒瘟病菌对供试药剂的敏感性比较

通过对试验结果进行回归分析，得出各供试药剂的回归方程和斜率K（见表2）。回归方程的斜率与病菌对杀菌剂的敏感性成正比[4]。按回归方程的斜率K，供试药剂可以分为3类：2%武夷菌素AS、70%烯酰·嘧菌酯WG、1.5%苦参·蛇麻素AS和哈茨木霉WP，斜率K在1.032 7～1.212 4，是供试药剂中斜率K较大的，说明胡椒瘟病菌对这4种药剂的敏感性较高；20%嘧菌酯WG、45%异菌脲SC、和24%腈苯唑SC的斜率K介于0.822 2～0.970 5，在供试药剂中斜率K属中等，胡椒瘟病菌对这3种药剂的敏感性一般；枯草芽孢杆菌WP、30%苯甲·嘧菌酯SC、木霉菌WP、芽孢杆菌/淡紫拟青霉WP和75%肟菌·戊唑醇WG，斜率K介于0.377 3～0.583 7，在供试药剂中斜率K较小，胡椒瘟病菌对这五种药剂的敏感性较差。

3 结论

在不同药剂毒力测定中，EC50越小、斜率值越大，说明病原菌对药剂的反应灵敏度越高，即随着浓度的增加，抑菌率明显增大。在试验中，EC50低的药剂其毒力回归方程斜率值往往也较小。综合分析供试药剂的EC50和斜率值，结果表明，70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病菌的抑菌效果非常好。

2009年，刘爱勤等测定了胡椒瘟病病原菌对常用的12种杀菌剂的敏感性。试验结果表明：69%烯酰吗啉·锰锌WP、25%甲霜·霜霉WP、50%烯酰吗啉WP和36%霜休锰锌WP对病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分别为1.862 1、1.129 8、3.419 8和6.309 6 μg/mL。2015年，农业部提出到2020年，我国农业要实现“一控两减三基本”，主要农作物病虫害绿色防控覆盖率达到30%，化学农药使用量实现零增长。推广应用生物农药或高效低毒低残留农药替代化学农药，是实现化学农药减量的主要途径。本文筛选出70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病菌的抑菌效果非常好，EC50介于0.21～0.78 μg/mL，比69%烯酰吗啉·锰锌WP、25%甲霜·霜霉WP等的EC50小很多，说明对胡椒瘟病菌的抑制效果更显著。推广应用70%烯酰·嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP替代生产中长期使用的69%烯酰吗啉·锰锌WP、25%甲霜·霜霉WP等化学药剂，将为实现胡椒产业到2020年化学农药使用量零增长的目标提供技术保障。

药剂毒力测定试验只说明在离体条件下对胡椒瘟病菌的直接活性，田间防治效果受到很多因素影响，有待于试验进一步证实。上述抑菌效果较好的供试药剂，可进一步在田间进行药效比较，结合室内、室外效果，选择优良的杀菌剂，在胡椒生产中进行合理的应用。

参考文献

[1] 桑利伟，刘爱勤，谭乐和，等. 海南省胡椒瘟病病原鉴定及发生规律[J]. 植物保护，2011，37（6）：168-171.

[2] 黄圣明，郭少贞，刘秀娟，等. 咪鲜安等八种杀菌剂对芒果炭疽菌的毒性比较[J]. 热带作物学报，1992，13（1）：67-70.

[3] 刘爱勤，桑利伟，孙世伟，等. 胡椒瘟病病原菌对12种杀菌剂的敏感性测定[J]. 热带农业工程，2009，33（2）：11-13.

[4] 刘爱勤，桑利伟，孙世伟，等. 香草兰疫霉菌对9种杀菌剂的敏感性测定[J]. 农药，2008，47（11）：847-848.