乙肝五项、HBV-DNA定量及乙肝前S1抗原联合检测用于诊断乙肝的临床价值分析

刘 佩，赵旭鸿

（上海市杨浦区中心医院检验科，上海200090）

乙肝五项、HBV-DNA定量及乙肝前S1抗原联合检测用于诊断乙肝的临床价值分析

刘 佩，赵旭鸿

（上海市杨浦区中心医院检验科，上海200090）

目的 分析乙肝五项与病毒（HBV）前S1抗原及病毒DNA的相关性，并探讨联合检测对乙肝诊断的临床价值。方法 选取本院门诊部和住院部2013年10月至2015年10月期间收治的患者作为研究对象，收集其HBsAg阳性血清，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测其前S1抗原和乙肝五项，采用荧光定量PCR法检测其HBV-DNA水平，对比分析不同模式下前S1抗原的表达水平和HBV-DNA的水平，并分析其相关性。结果 乙肝前S1抗原阳性率与HBV-DNA阳性率在不同HBV-M模式下比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。此外①+③+⑤+组中HBV-DNA阳性拷贝数较高，多数高于105copies/mL；而①+④+⑤+、①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+组的前S1+与前S1-组相比，其HBV-DNA阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。HBsAg阳性血清标本中前S1抗原在HBeAg+组中阳性率明显高于HBeAg-组，差异具有统计学意义（P＜0.05），HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBeAg具有一定的相关性。HBsAg阳性血清标本中前S1抗原在HBV-DNA+组中阳性率明显高于在HBV-DNA-组，差异具有统计学意义（P＜0.05），HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBV-DNA具有一定的相关性。结论 前S1抗原可较好反映乙肝病毒存在和复制的情况，将前S1与乙肝五项和HBV-DNA进行联合检测可较早发现较低水平病毒的感染，其可作为抗病毒疗效的评判指标，对乙肝的临床诊断和疗效评价均具有较好的应用价值。

乙肝两对半； DNA； 前S1抗原； 乙肝病毒； 临床诊断

乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染目前已成为全球性公共卫生难题，并且不同的地区其流行性有很多差异，世界卫生组织（WHO）统计目前全球的乙肝携带者已达3.5亿，其携带率高达5%［1-2］。同时乙肝也是我国近年来广泛流行的一种病毒性肝炎，其感染率约达70%，而携带率也达10%，对其给予及时的诊断、预防和治疗工作具有重要的意义。临床上常采用乙肝病毒的血清标志物（HBV-M）即乙肝五项或乙肝两对半对受试者进行检测，分别为：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb［3］，这五项血清标志物可用于对患者的病程和传染性进行判断，其组合的模式较多，往往会受到药物的治疗、病毒的变异和方法学等影响，但对于乙肝病毒的复制及其传染性均不易得到充分反映，造成了漏诊以及误诊的发生［4-5］。随着荧光定量PCR的迅速发展，对HBV-DNA进行定量检测也越来越容易，从而更直接地检测患者体内HBV的复制状态，阳性检出目前被作为HBV感染及复制的金标准，但这种方法成本较高且需要特殊的仪器，对基层医院的实施造成了障碍［6-7］。前S1抗原作为一项检测HBV感染和复制的血清学指标，其临床诊断价值收到了越来越多的青睐。本次研究通过分析上述三种检测方法的相关性，探讨了其用于乙肝检测的临床价值，现将研究结果报道如下。

材料和方法

1 一般资料

选取本院门诊部和住院部2013年10至2015年10月期间收治的300例受试者作为研究对象，其中男173例，女127例；年龄分布为18～72岁，平均年龄为37.8±6.6岁。收集受试者其HBsAg阳性血清213例，所有患者均排除其他各种原因引发的恶性肿瘤、肝功能异常、免疫系统疾病、急慢性感染疾病和血液系统疾病等，所有受试者均自愿参与本次研究，且均已签署有本院伦理委员会编制的知情同意书。

2 方法

本次研究所有受试者均需记录详细的临床信息和相关病史及家族史，采用由本院编制的调查表对各受试者问询记录。患者入院后次日清晨均空腹抽取其2mL肘正中的静脉血，3000r/min，离心5min后存于-20℃待用。采用酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（由上海荣盛生物科技有限公司和上海阿尔法生物技术有限公司生产提供），操作步骤均严格按说明书进行，然后采用Multiskan MK3酶标仪检测乙肝五项和乙肝前S1抗原水平，采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA的含量，对其乙肝病毒的感染情况进行评价。采用Bio-Rad CFX926 PCR仪，当其检测值低于5×102copies/mL时则可判定其为HBV-DNA为阴性。

3 统计学处理

本次研究所有数据均采用统计学软件SPSS 17.0进行统计学分析，其中计数资料采用百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验，将P＜0.05定为结果具有显著性差异。

结 果

1 不同HBV-M模式下前S1抗原和HBVDNA的检测结果

为方便描述，本次研究将HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb五项血清标志物分别表示为①、②、③、④和⑤。本次研究共获得213例HBsAg阳性血清标本，将其按照乙肝两对半的结果分为6组，我们发现乙肝前S1抗原阳性率与HBVDNA阳性率在不同HBV-M模式下比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具体见表1。

表1 不同HBV-M模式下S1抗原和HBV-DNA的检测结果比较（n，%）

2 HBsAg阳性模式中前S1抗原与HBV-DNA水平相关性

将HBsAg阳性模式的每个组分为前S1抗原阳性和阴性两种情况，共计6种模式，其中①+③+⑤+组中HBV-DNA阳性拷贝数较高，多数高于105copies/mL；而①+④+⑤+、①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+组的前S1+与前S1-组相比，其HBV-DNA阳性率经统计分析，差异无统计学意义（P＞0.05），具体见表2。

表2 213例HBsAg阳性模式中前S1抗原与HBV-DNA水平相关性分析（n）

3 HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBeAg的相关性

本次研究中，HBeAg阳性血清标本中前S1抗原在HBeAg+组中阳性率（71.4%）明显高于HBeAg-组（17.2%），经统计分析，具有显著性差异（P＜0.05）。HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBeAg具有一定的相关性，具体见表3。

表3 213例HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBeAg的相关性分析［n（%）］

4 HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBVDNA的相关性

本研究中，HBsAg阳性血清标本中前S1抗原在HBV-DNA+组中阳性率（94.4%）明显高于在HBVDNA-组，经统计分析，具有显著性差异（P＜0.05），HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBV-DNA具有一定的相关性，具体见表4。

表4 213例HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBV-DNA的相关性分析［n（%）］

讨 论

乙肝病毒是双链环状DNA病毒，其前S1蛋白主要在Dane颗粒或管型颗粒中存在，对病毒的装配、复制、感染及刺激机体的免疫反应等方面均具有重要作用［8］。该蛋白的21～47位肽段可介导病毒对肝细胞进行黏附，并与细胞膜上相应的受体结合，还可与细胞膜上IL-6识别位点进行结合［9-10］。前S1蛋白还含有肝细胞膜的受体，免疫原性较高，与病毒侵入肝细胞及其复制均有密切的关系。

本次研究对乙肝五项、前 S1抗原和HBV-DNA含量进行检测，发现HBsAg阳性血清标本中前S1抗原和HBV-DNA检出率均较高，而HBsAg阴性时前S1抗原和HBV-DNA检出率均较低。由此可见，前S1抗原检出主要在HBsAg阳性模式中，推测与编码

前S1蛋白的基因及编码HBsAg的基因均位于HBV开放阅读框的S区相关。此外，本研究发现①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+组中的HBsAg呈阴性时仍有部分血清其HBV-DNA可检出，由此可见患者体内HBsAg呈阴性或出现了HBsAb无法说明HBV-DNA复制的停止或传染性消失，仅可说明患者体内乙肝病毒使其复制的能力下降。表明HBV前S1抗原基本可以作为乙肝患者体内病毒复制情况的指标，所以可作为病毒感染的诊断依据［11］。

在临床对传统的血清学标志物两对半的判读中，HBeAg是HBV在宿主复制和传染程度的主要临床指标，当出现时可表明病毒的复制活跃度和传染性均较高；而 HBeAb出现则可说明病毒复制降低和传染性降低［12-14］。本次研究中，HBeAg+大三阳组其前S1和HBV-DNA的阳性率均高于其他组别；特别是大三阳前S1+组中HBV-DNA的拷贝数较高，为高拷贝复制。由此可见，HBeAg与病毒的复制具有较高的相关性，可反映病毒的复制和传染性情况，HBeAg+的前S1阳性率也较高，说明HBeAg转阴或HBeAg产生时前S1表达水平也会下降，由此可见前S1与HBeAg具有一定的相关性，并且HBeAg与前S1同时呈阳性时，HBV-DNA呈高拷贝复制，并且HBsAg+时其前S1+组中HBV-DNA的阳性率均明显高于其余前S1-组，可见前S1抗原与HBV-DNA的含量具有较好的相关性。

综上所述，传统的乙肝五项可反映机体感染HBV后的免疫状态，但无法明确其感染的确切状态，也无法反映病毒的复制情况；对HBV-DNA进行定量检测，可对其感染及复制情况有个较精确的了解，但由于其价格较昂贵，并且需要特殊的仪器，而前S1抗原则既可反映HBV复制的情况，又可弥补由于病毒变异等原因造成的HBeAg无法被检出而影响诊断的情况［15-16］。所有采用血清学标志物联合前S1或HBV-DNA的定量检测用于早期低水平病毒感染的发现可全面而快速了解乙肝患者的病情，可将其作为抗病毒治疗过程中疗效评价的指标，对临床诊断及病情的观察均具有重要的应用价值。

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（潘子昂编辑）

The Analysis of Diagnostic Value of Combined Pre-S1 Antigen and HBV-DNA and Multi-5 Test Panel in Hepatitis B Detection

LIU Pei，ZHAO Xu-hong
（Clinical Laboratory，Central Hospital of Shanghai Yangpu District，Shanghai 200090，China）

Objective To analyze multi-5 test panel of hepatitis b virus（HBV），pre-S1 antigen and the correlation of the viral DNA，and to explore the clinical value of diagnosis of combined detection of hepatitis B.Methods We selected the outpatients and inpatients in our hospital during October 2013 to October 2015 as the research objects.Collected HBsAg positive serum samples were used for enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）to detect pre-S1 and multi-5 test panel and fluorescent quantitative PCR method to detect the HBV-DNA.The comparative analysis of different conditions of pre-S1 antigen and HBV-DNA content was conducted and their correlation was analyzed.Results When the positive rates of pre-S1 antigen and HBVDNA in different HBV-M mode were compared，the differences were not significant（P＞0.05）.The positive rate of pre-S1 antigen in HBeAg positive group was higher than that of control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.In HBsAg positive serum samples，pre-S1 and HBeAg were correlated. The positive rate of Pre-S1 antigen in HBV-DNA group was higher than control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.In HBsAg positive serum samples，Pre-S1 antigen and HBV-DNA were correlated.Conclusion Pre-S1 antigen can better reflect the existence and hepatitis B virus replication.The combination detection of pre-S1，multi-5 test panel and HBV-DNA for HBV can detect early virus infections.It can be used as antiviral efficacy indicator.It might have applicable value in the clinical diagnosis and treatment of Hepatitis B infection.

Two pairs of semi-hepatitis B； DNA； Pre-S1 antigen； Hepatitis B virus；Clinical diagnosis

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.011

2016-02-23；

2016-09-20