宽叶独行菜不同极性部位对鼠胃肠动力及MTL和GAS的影响

孙士浩++都玉蓉++祁得胜++林鹏程

摘要：为明确宽叶独行菜（Lepidium latifolium L.）提取物中促胃肠动力的有效部位，在小鼠腹腔注射硫酸阿托品的方法制造胃肠动力障碍模型，测定胃内色素残留率和小肠推进比，并检测血浆胃动素（MTL）和血浆胃泌素（GAS）的含量。结果表明，正丁醇部位对小鼠胃内色素残留率的影响与模型对照组比较有显著差异，水提取部位、乙酸乙酯部位有极显著差异；水提取部位对小肠推进比的影响与模型对照组比较有显著差异，乙酸乙酯部位有极显著差异；水提取部位、正丁醇部位对小鼠MTL含量影响与模型对照组比较有显著差异，乙酸乙酯部位有极显著差异，乙酸乙酯部位对小鼠GAS含量的影响与模型对照组比较有显著差异。初步判断乙酸乙酯部位为宽叶独行菜促胃肠动力的有效部位，其作用机制还有待进一步研究。

关键词：宽叶独行菜（Lepidium latifolium L.）；极性部位；胃肠动力；血浆胃动素（MTL）；血浆胃泌素（GAS）

中图分类号：S567.23+9；R915 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）18-4790-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.039

宽叶独行菜（Lepidium latifolium L.）属十字花科多年生草本植物，又称大辣辣、止痢草，在中国主要产于内蒙古、西藏、青海等地，世界各地均有分布，生在村旁、田边、山坡及盐化草甸，海拔1 800～ 4 250 m；全草入药，有清热燥湿作用，治菌痢、肠炎[1]。试验用宽叶独行菜不同极性部位提取物比较其对小鼠胃排空、肠推进的作用，并观察其对血浆胃动素、胃泌素的影响，旨在为宽叶独行菜进一步的研究与开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

昆明种小鼠70只，体重（20±2） g，雌雄兼用，试验动物生产许可证号为SC×K（青）2005-0001，由青海省地方病预防控制所动物中心提供；宽叶独行菜采自青海省格尔木市大格勒乡。

药品和试剂：蓝色葡聚糖2000（西宁宝信生物科技有限公司）；多潘立酮片（吗丁啉）（西安杨森制药有限公司生产，批次：H109100003）；肝素钠（山东东营爱博生物制品有限公司生产，批号：12100613）；大鼠胃动素（MTL）ELISA检测试剂盒（96 T）、大鼠胃泌素（GAS）ELISA检测试剂盒（96 T）（上海雅浦生物科技有限公司）。

仪器：RE-52B型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；高速离心机，上海医分仪器制造有限公司；752型紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；YP15KN型电子天平，上海精密科学有限公司；离心沉淀机，上海医分仪器制造有限公司；酶标仪Xmark Microplate Spectrophotometer，上海研域实验室设备有限公司；HW-1000超级恒温水浴锅，成都泰盟软件有限公司；高精度微量加样器（0.5～10 μL、2～20 μL、20～200 μL），大龙医疗设备有限公司。

1.2 方法

1.2.1 宽叶独行菜不同极性部位的制备 将宽叶独行菜全草阴干并粉碎后，用水提取2次（料液比1∶12，80 ℃，1 h），合并提取液，减压浓缩后得到黑褐色黏稠的浸膏，此为水提取部位。取水提取部位浸膏溶于适量纯水中，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取2次，合并同一部位滤液，减压浓缩，得到浸膏分别为石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。

由于宽叶独行菜的半数致死量为LD50=500 g/kg[2]，且通过预试验的结果得出1/20LD50即给予20 g小鼠0.5 g/d生药为最佳给药剂量，故将所得各部位浸膏配制成1 mL含1.67 g生药材的溶液，放置4 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 动物分组与给药 将70只小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半，分别为空白对照组（生理盐水）、模型对照组（阿托品）、阳性对照组（阿托品+吗丁啉）、受试药物组Ⅰ（阿托品+水提取部位）、受试药物组Ⅱ（阿托品+石油醚部位）、受试药物组Ⅲ（阿托品+乙酸乙酯部位）、受试药物组Ⅳ（阿托品+正丁醇部位）。

小鼠适应性喂养7 d后称重并开始灌胃给药，由试验动物与人的体表面积比等效剂量换算表[3]进行换算，阳性对照组给吗丁啉混悬液（0.8 mg/mL），受试药物组Ⅰ给水提取部位溶液（283 mg/mL），受试药物组Ⅱ给石油醚部位溶液（7 mg/mL），受试药物组Ⅲ给乙酸乙酯部位溶液（4.3 mg/mL），受试药物组Ⅳ给正丁醇部位溶液（5 mg/mL），空白组和模型组给生理盐水，均按0.3 mL/20 g灌胃，灌胃前将各部位药物水浴加热至37 ℃并混匀，每天灌胃1次，连续5 d后禁食不禁水24 h。于第七天正常灌胃药物后，对除空白组外的各组小鼠均腹腔注射硫酸阿托品（0.02 mg/20 g），空白组腹腔注射等体积的生理盐水[4]，20 min后对所有小鼠均灌服0.3 mL蓝色葡聚糖2000淀粉糊状物，30 min后脱颈处死小鼠。取主动脉血0.5 mL，注入含肝素钠的离心管中，混匀，4 ℃，3 000 r/min离心30 min，取上清液，置-20 ℃下保存；之后剖开腹腔，结扎胃贲门和幽门后，迅速从贲门处至回肠末端分离胃肠，取出后放于实验台上，剪掉全胃并将所有肠段自然拉直铺平。用4 mL纯水将胃内残留物充分洗于10 mL离心管中，以 4 000 r/min离心20 min，取上清液在波长620 nm处测其吸光度，求其各组平均值；另取3支离心管均放入0.3 mL葡聚糖蓝2 000淀粉糊状物，加入4 mL纯水后相同条件下离心，取上清液测定的吸光度，将3支离心管的吸光度的平均值作为标准值，胃内色素残留率=（各试验组胃内色素残留物吸光度平均值/标准值）×100%。同时，量取自幽门切迹至蓝色葡聚糖2000淀粉糊状物到达处为蓝色葡聚糖2000推进距离，测量自幽门切迹至回盲部的距离为小肠全长小肠推进比=（蓝色葡聚糖2000推进距离/小肠全长）×100%[5]。取待测血浆，严格按照ELISA试剂盒说明操作，检测血浆MLT及GAS含量。结果均用x±s表示，数据用SPSS18.0软件中的LSD-t检验进行处理，以α=0.05为检验水平。

2 结果与分析

2.1 宽叶独行菜不同极性部位对胃排空、肠推进的影响

在对小鼠胃内色素相对残留率的比较中，与空白对照组比较，模型组有显著差异（P<0.05）；与模型对照组比较，石油醚部位无明显效果，阳性对照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有显著差异（P<0.05），其中，阳性对照、水提取部位、乙酸乙酯部位的胃内色素残留率达到极显著水平（P<0.01）；与阳性对照组相比，乙酸乙酯部位与水提取部位差异不显著（P>0.05），正丁醇部位差异显著（P<0.05），石油醚部位差异极显著（P<0.01）。

在小肠推进比的比较中，与空白对照组比较，模型组有显著差异（P<0.05）；与模型组比较，石油醚部位无明显效果，阳性对照、水提取部位、乙酸乙酯部位均有显著差异（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位达到极显著水平（P<0.01）；与阳性对照组相比，乙酸乙酯部位差异不显著（P>0.05），水提取部位差异显著（P<0.05），石油醚部位差异极显著（P<0.01），如表1所示。

2.2 宽叶独行菜不同极性部位对胃肠激素的影响

在血浆胃动素（MTL）含量的比较中，与空白对照组比较，模型组有显著差异（P<0.05）；与模型组比较，阳性对照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有显著差异（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位达到极显著水平（P<0.01）；与阳性对照组相比，乙酸乙酯部位差异不显著（P>0.05），水提取部位和正丁醇部位差异显著（P<0.05），石油醚部位差异极显著（P<0.01）。

在血浆胃泌素（GAS）含量的比较中，与空白对照组比较，模型组有显著差异（P<0.05）；与模型组比较，乙酸乙酯部位有显著差异（P<0.05）；与阳性对照组相比，乙酸乙酯部位有显著差异（P<0.05），其余各部位组有极显著差异（P<0.01），如表2所示。

3 讨论

近年来，人们的饮食结构及生活规律发生了显著的改变，致使胃肠动力障碍性疾病成为消化系统中发病率最高的疾病之一，严重影响人们的身体健康和生活质量。目前就胃肠动力障碍性疾病的发病机制没有统一的认识，尽管在部分领域有一定的研究进展，但不能说明胃肠动力障碍性疾病确切的发病机制[6]。

机体的胃排空与肠推进率是反映胃肠运动综合功能的一项重要指标，也是最为直观和有效的研究方法[7]；MTL被公认为启动胃肠收缩活动的脑肠肽，在消化间期呈周期性释放，通过作用于肠道神经系统中的胃动素神经元，触发胃肠道消化间期移行性复合运动（Migrating motor complex，MMC）Ⅲ相的发生，引起胃大幅度的收缩和小肠节律性的蠕动[8]；GAS主要由胃窦部G细胞分泌，有松弛幽门括约肌、促进胃肠运动的作用[9]；功能性消化不良（FD）患者血浆MTL浓度明显低于正常人、血浆GAS水平变化明显，一般认为胃肠激素水平的变化可能是FD型胃肠运动功能障碍的原因[10]。

阿托品是一种M胆碱受体阻断剂，其通过抑制乙酰胆碱的释放降低胃肠道平滑肌的兴奋性，从而降低平滑肌蠕动的幅度和频率[11]。本研究采用腹腔注射阿托品造胃肠动力障碍模型，并以小鼠胃排空与肠推进率、血浆MTL、GAS水平为考察指标，旨在筛选宽叶独行菜提取物中促胃肠动力作用的有效部位。试验结果表明，模型组在胃排空、肠推进及MTL、GAS方面与空白组比较均有显著差异，说明阿托品致胃肠动力障碍模型建立成功。其提取物中水提取部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能使小鼠胃排空加快，且水提取部位和乙酸乙酯部位效果最为显著，在小肠推进速率方面，乙酸乙酯部位可显著增强小鼠小肠推进率，故推测乙酸乙酯部位促胃肠运动的作用机理可能是通过对抗阿托品对M胆碱受体的阻断，增加胃肠道乙酰胆碱分泌来实现的，其确切作用机制需进一步研究证实；小鼠血浆胃动素（MTL）和胃泌素（GAS）的水平，初步确定了乙酸乙酯部位在胃肠激素方面具有良好的改善作用，其对胃肠动力的促进作用可能与其可提高MTL水平有关。关于宽叶独行菜的国内外最新文献中，大多研究其化学成分和抗寒、抗盐等特性[12，13]，对该属植物在药用方面的文献也仅限于中药典籍记载和少量研究报道，其促进胃肠运动及治疗胃肠动力障碍性疾病方面的研究还未见报道，因此，本研究结果为能充分利用这一资源，开发促胃肠动力中药新药奠定了良好的前期基础，其药效成分和药理机制还需进一步研究和探讨。

参考文献：

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