ADAM17在胃癌中的表达及意义

陈桥　蒋建龙★　孙金兵　顾芯烨　卢旷逸

ADAM17在胃癌中的表达及意义

陈桥蒋建龙★孙金兵顾芯烨卢旷逸

目的 探讨去整合素金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法检测胃癌组织中ADAM17的表达，并分析ADAM17表达与胃癌临床病理特征之间的关系，同时观察ADAM17表达与HER-2、VEGF表达的关系。结果 ADAM17在胃癌组织中表达阳性率为15.1%，两组在年龄、性别、肿瘤位置、临床分期、分化程度的差异无统计学意义（P＞0.05），浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜0.05）。ADAM与VEGF表达差异具有统计学意义（P＜0.05），而ADAM与Her-2的表达差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论 ADAM17在胃癌中的表达与局部浸润、淋巴结转移、脉管侵犯有关，是预后不良的有效指标。

ADAM17 胃癌 淋巴结转移 脉管侵犯 局部浸润

胃癌的发生与转移与许多基因和蛋白质的异常表达密切相关，整合素金属蛋白酶17（a disintegrin andmetalloproteinase 17，ADAM17）是一种具有蛋白剪切酶样作用的基因［1］。为明确ADAM17表达与临床病理的相关性，作者采用免疫组化法检测ADAM17在胃癌中的表达情况，并探讨ADAM17在胃癌中表达的意义。

1　材料与方法

1.1标本收集 选取自2014年1月至12月期间本院收治并进行胃癌根治术的患者共53例。术前均未进行辅助化疗与辅助放疗。本项目通过本院伦理委员会批准并征得患者或其委托人同意。根据世界卫生组织制定的分化标准，11例为高分化，42例为中-低分化。按照TNM经典分期法进行临床病理分期。所有标本用福尔马林固定，石蜡包埋，苏木精和伊红染色后进行病理分析确定诊断。

1.2主要试剂 兔抗人ADAM17多克隆抗体购自美国adcam公司；兔抗人HER-2单克隆抗体购自上海纪宁实业有限公司；兔抗人VEGF单克隆抗体购自江苏普罗赛生物技术有限公司。

1.3免疫组化分析 所有样本进行免疫组化检测ADAM17、HER-2、VEGF。4μm厚组织薄片用酒精脱石蜡与脱水，3%过氧化氢在室温孵育10min消除内源性过氧化酶活性，5%血清封闭后，分别滴加兔抗人ADAM17、HER-2和VEGF I抗，稀释1：100，37℃孵育1h，PBS冲洗后滴加二抗，继续孵育30min，PBS冲洗后滴加链酶亲和素-生物素-过氧化物酶，孵育30min后DAB显色，苏木精复染，脱水透明，中性树胶封片。阴性对照以PBS代替一抗。未加一抗的为阴性对照，正常胎盘组织作为阳性对照，苏木精染色后，由两位高年资病理医师独立报告，＞10%染色为阳性。

1.4数据分析 ADAM17、HER-2、VEGF的免疫组化表达结果及其与临床病理的关系用Chi-square test表示；n＞40并且所有理论数＞1并且存在≥1个理论数＜5，则用校正Chi-square test检验；n＞40并且存在≥1个理论数=1，则用Fisher精确概率计数法。

2　结果

2.1ADAM17、HER-2、VEGF的表达ADAM17在胃癌组织中表达（图1A），阳性率为15.1%。HER-2在胃癌组织中表达（图1B），阳性率为9.4%。VEGF在胃癌组织中表达（图1C），阳性率为23.2%。

2.2ADAM17与HER-2、VEGF在胃癌细胞中的表达关系 见表1。

图1　ADAM17、HER-2、VEGF在胃癌细胞中的表达

表1　ADAM17与HER-2、VEGF在胃癌细胞中的表达关系（n）

2.3ADAM17表达与临床病理特征的关系 比较ADAM17表达与不表达的胃癌病例，发现年龄、性别、肿瘤位置、临床分期、分化程度的差异无统计学意义（P＞0.05），浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜0.05），ADAM表达阳性病例的淋巴结转移比例87.5%高于阴性病例的40%。见表2。

表2　ADAM17表达与临床病理特征的关系

3　讨论

我国是胃癌高发地区之一，胃癌的诊断手段日趋成熟，但在辅助治疗、预后判断等领域进展缓慢。近年来，众多学者研究发现了许多与胃癌相关的分子，以期通过分子靶向药物、抗体或肿瘤疫苗制定个体化治疗策略，精确判断预后的同时提高辅助治疗的效果。整合素金属蛋白酶（ADAM）家族不仅是细胞生长和组织分化中的调控物质，还在肝癌、食管癌、前列腺癌等肿瘤的发展过程中具有重要的作用［2-4］。ADAM17是ADAM家族的一员，作为TNF-α的转化酶，调节着几乎每个细胞的增殖与迁移过程。本资料结果显示ADAM17（+）组浸润深度、脉管侵犯率、淋巴结转移率均较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。提示ADAM17可能参与胃癌的进展，具有致癌作用。其机制可能是通过剪切蛋白表面分子来实现的。ADAM17介导多种生长因子、细胞因子、受体和粘附分子的胞外结构域的脱落，譬如钙粘连蛋白、EGFR、Notch and Eph/ephrin通路蛋白等。其中，钙粘连蛋白在细胞之间的连接上起重要作用，相关研究发现在结直肠肿瘤中，高表达的ADAM9 可以降解生长因子介导的钙粘连蛋白，从而使肿瘤细胞之间或与基质间的连接变“松散”，促进细胞“游走”，有利于肿瘤细胞的浸润和转移［5］，作为同一家族的ADAM17 在胃癌中可能发挥了类似的作用。

血管内皮生长因子（VEGF）对肿瘤新生血管形成起重要作用［6］。原癌基因HER-2 编码的蛋白产物是分子量为185kD的受体酪氨酸激酶（RTK）。HER-2的异常表达与上皮组织恶性肿瘤的发生、发展密切相关，在肿瘤细胞的增殖、迁移、浸润等多个环节中均有促进作用［7］。其阳性提示肿瘤细胞侵袭性强，肿瘤复发快，化疗不敏感，患者预后不良。ADAM17是HER-2的上游物质，能够调控HER-2的扩增［8］。本研究将ADAM分别与VEGF、Her-2的阳性率对比，结果显示ADAM与与Her-2的阳性率一致，提示两者在胃癌中的表达可能具有一定相关性（相关系数OR=1.46），有待进一步研究阐明。

浸润深度、脉管侵犯率、淋巴结转移阳性率是胃癌预后不良的重要因素，因此，高表达的ADAM17可能是预后标志和抗癌治疗的潜在靶点。ADAM17是HER-2的上游物质，ADAM17抑制剂对HER-2阳性患者应能产生协同的抗癌作用，增强靶向药物的疗效，具有广阔的应用前景。综上所述，ADAM17在胃癌中的表达与局部浸润、淋巴结转移、脉管侵犯有关，是预示胃癌患者预后不良的可能指标。在肿瘤临床分期的基础上检测ADAM17将有助于评估肿瘤侵袭和转移的潜力，指导临床决策，提高预后判断的准确性，增加辅助治疗的效果。本研究结果对利用ADAM17作为胃癌治疗的新靶点提供了新的动力。

［1］张媛媛, 张雪鹏, 徐晶, 等. 去整合素-金属蛋白酶17与肿瘤侵袭及转移的研究. 医学信息, 2014, 27(5): 635-636.

［2］丁翔, 杨连粤, 黄耿文, 等. ADAM17 mRNA在孤立性大肝癌中的表达及其意义. 中华肝胆外科杂志, 2005, 11(8): 544-546.

［3］刘宏斌, 杨其昌, 沈屹, 等. 食管鳞状细胞癌组织中去整合素-金属蛋白酶17mRNA表达的临床病理意义.肿瘤研究与临床, 2012, 24(7): 444-446, 450.

［4］林锋,林平,刘鑫,等.靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响.中华男科学杂志, 2012, 18(8): 687-691.

［5］Hirao T, Nanba D, Tanaka M, et al. Overexpression of ADAM9 enhances growth factor-mediated recycling of E-cadherin in human colon cancer cell line HT29 cells. Exp Cell Res, 2006, 312(3): 331-339.

［6］Liu W, Sha X, Wen Y, et al. Effect of Avastin on the migration and invasion of pterygium fibroblasts. Eye Sci, 2014, 29(4): 214-218.

［7］Qiu Z, Sun W, Zhou C, et al. HER2 expression variability between primary gastric cancers and corresponding lymph node metastases. Hepatogastroenterology, 2015, 62(137): 231-233.

［8］Li J, Liu B, Gao X, et al. Overexpression of sigma-1 receptor inhibits ADAM10 and ADAM17 mediated shedding in vitro. Protein and Cell, 2012, 3(2): 153-159.

Objective Discussion disintegrin metalloprotease 17（ADAM17）expression and significance in gastric cancer. Methods Immunohistochemical method to detect the expression of ADAM17 in gastric cancer tissues.Analyze the relationship between ADAM17 expression and clinicopathological features of gastric cancer.While observing ADAM17，HER-2，VEGF expression. Results ADAM17 expression was 15.1% in gastric cancer.No signifi cant difference between the two groups in age，sex，tumor location，clinical stage，degree of differentiationwere found（P＞0.05）. Depth of invasion，vascular invasion，lymph node metastasis were signifi cantly different（P＜0.05）.ADAM and VEGF expression had significant difference（P＜0.05），whereas the expression of ADAM and Her-2 does not have a statistically significant difference（P＞0.05）. Conclusions ADAM17 expression in gastric cancer with infi ltration，lymph node metastasis，vascular invasion related，is an effective indicator of poor prognosis.

ADAM17 Gastric Cancer Lymph node metastasis Vascular invasion Local infi ltration

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