不明原因复发性流产患者月经血和外周血NK细胞亚群水平变化及意义

贾新转，张娜，郭丽娜，赵素英，董翠，魏兰

（1河北医科大学第四医院，石家庄050011；2河北省胸科医院）

不明原因复发性流产患者月经血和外周血NK细胞亚群水平变化及意义

贾新转1，张娜1，郭丽娜1，赵素英1，董翠1，魏兰2

（1河北医科大学第四医院，石家庄050011；2河北省胸科医院）

目的 观察不明原因复发性流产（URSA）患者月经血和外周血自然杀伤（NK）细胞亚群水平变化，并探讨其临床意义。方法 选择URSA患者30例（URSA组）、健康女性30例（对照组）。于月经周期第2天抽取两组外周血，并留取月经血，应用流式细胞术测定CD56、CD3、CD16、CCR7、CD45RO NK细胞水平。结果 与对照组比较，URSA组外周血CD56+CD3-CD16-NK细胞、CD56+CD16+CCR7+NK细胞、CD56+CD3-CD45RO-NK细胞水平升高，CD56+CD3-CD45RO+NK细胞水平降低，月经血CD56+CD3-CD45RO+NK细胞水平降低（P均＜0.05）；两组月经血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+高于外周血；URSA组外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+、CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-高于对照组（P均＜0.05）。结论 URSA患者CCR7优先表达于CD16+NK细胞，其外周血、月经血CD45RO+NK细胞均较少，对月经和外周血NK细胞亚群进行检测有助于URSA的诊。

不明原因复发性流产；月经；自然杀伤细胞

复发性流产（RSA）是指连续2次或2次以上的自然流产，有60%～70%的RSA患者病因不明，即不明原因复发性流产（URSA）［1］。近年来研究发现，自然杀伤（NK）细胞活性的改变在RSA中具有重要意义。在非孕女性的子宫内膜与妊娠时蜕膜化的子宫膜中的NK细胞统称为子宫自然杀伤（uNK）细胞，在妊娠起始、维持妊娠方面发挥重要作用，而uNK细胞数量增加或活性增强可能是导致早期流产的因素之一［2］。但由于uNK标本采集具有创伤性，且不易收集，使其检测具有局限性。而月经血易于收取，且可通过非侵入性方法收集。有研究发现，月经血与子宫内膜活体组织中NK细胞表面标记物的表达无统计学差异［3］，推测月经血替代子宫内膜活体组织检测NK细胞水平具有可行性。本研究对URSA患者月经血和外周血NK细胞亚群水平变化进行观察，并探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1临床资料 选择2014年8月～2015年8月在河北医科大学第四医院生殖中心就诊的URSA患者30例（URSA组），年龄25～30（27.87±1.74）岁，BMI（22.41±0.55）kg／m2，月经周期（27.17±1.70）d。入选标准：①夫妻双方染色体核型均正常；②盆腔彩超检查排除生殖道器质性病变；③宫颈分泌物检查排除生殖道感染：④生殖内分泌激素检查无异常，且无内分泌疾病史；⑤抗磷脂抗体、抗核抗体等自身免疫抗体均阴性；⑥无血栓形成倾向或高凝状态；⑦月经周期规律，最近2个月内未应用内分泌或免疫调制剂（维生素D3和泼尼松龙）；⑧男方精液常规检查无异常。同期选择健康生育女性30例作为对照组，年龄25～30（28.27±2.46）岁，BMI（22.57±0.56）kg／m2，月经周期（27.23±1.79）d。入选标准：≥1次活产且无流产病史，月经周期规律，最近2个月内未应用内分泌或免疫调制剂，无自身免疫疾病、血栓形成倾向或高凝状态、内分泌疾病、重要脏器疾病。两组年龄、BMI、月经周期比较差异无统计学意义。本研究经医院伦理委员会批准，研究对象均已签署知情同意书。

1.2月经血及外周血NK细胞亚群检测 两组均于月经周期第2天，抽取空腹静脉血3 mL，并留取月经血5 mL（消毒阴道，将直径1.5 mm一次性吸引管置入宫腔内，吸引管末端接一次性5 mL注射器，轻微负压吸取月经血）。应用流式细胞术测定CD56、CD3、CD16、趋化因子受体7（CCR7）、CD45RO NK细胞水平。

1.3统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计量资料用±s表示，同组比较采用Wilcoxon秩检验，两组间比较采用Mann-Whitney U检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

两组月经血及外周血中NK细胞亚群水平比较见表1、2。与对照组比较，URSA组外周血CD56+CD3-CD16-NK细胞、CD56+CD16+CCR7+NK细胞、CD56+CD3-CD45RO-NK细胞水平升高，CD56+CD3-CD45RO+NK细胞水平降低，月经血CD56+CD3-CD45RO+NK细胞水平降低（P均＜0.05）；两组月经血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+高于外周血；URSA组外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+、CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-高于对照组（P均＜0.05）。

表1　两组外周血中NK细胞亚群水平比较（%，±s）

表1　两组外周血中NK细胞亚群水平比较（%，±s）

组别nCD56+CD3-CD16+CD56+CD3-CD16-CD56+CD3-CD16-／CD56+CD3-CD16+CD56+CD16+CCR7-CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16-CCR7+URSA组3044.67±6.0735.90±5.070.75±0.1923.19±6.1626.33±7.6934.78±7.57对照组3051.80±7.0521.89±4.720.82±0.2227.97±7.1715.55±3.9535.46±7.58组别nCD56+CD16-CCR7-CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-CD56+CD3-CD45RO+CD56+CD3-CD45RO-URSA组3018.27±5.841.49±0.671.14±0.221.33±0.3086.40±6.65对照组3021.63±7.762.41±0.690.63±0.216.13±1.0560.95±6.33

表2　两组月经血中NK细胞亚群水平比较（%，±s）

表2　两组月经血中NK细胞亚群水平比较（%，±s）

注：两组各指标比较，P＞0.05。

组别nCD56+CD3-CD16+CD56+CD3-CD16-CD56+CD3-CD16-／CD56+CD3-CD16+CD56+CD16+CCR7-CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16-CCR7+URSA组3012.47±4.5551.80±7.044.86±2.2410.16±4.407.56±1.9155.13±7.56对照组3013.27±4.0755.12±7.124.51±1.3811.23±4.357.46±2.0453.48±7.45组别nCD56+CD16-CCR7-CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-CD56+CD3-CD45RO+CD56+CD3-CD45RO-URSA组3027.97±7.177.86±2.620.89±0.393.82±1.5061.33±10.45对照组3030.73±5.417.82±2.900.76±0.358.38±1.9157.36±9.00

3　讨论

生殖免疫相关研究［3］认为，胚胎植入是一种半同种异体组织移植，在正常妊娠时胚胎未被排斥，与蜕膜组织中正常免疫微环境有一定的关系。当这种免疫耐受被打破时就会发生病理妊娠，甚至流产。NK细胞是母-胎免疫中的优势细胞群，在妊娠过程中发挥重要作用［4］。趋化因子由白细胞和某些基质细胞分泌，对中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞具有趋化及激活作用。近年来研究发现，趋化因子在生殖过程中（如月经、排卵、胚胎种植及分娩）发挥重要作用［5］。

CCR7在NK细胞的趋化中发挥重要作用。CCR7+CD56brightNK细胞在外周免疫器官中起免疫调节作用，CCR7-CD56brightNK细胞在外周血中发挥细胞毒性作用。CCR7高表达的CD16-NK细胞可趋向富含CCR7配体、巨噬细胞炎性因子和次级淋巴组织趋化因子的子宫内膜组织，与此相反，缺乏CCR7的CD16+NK细胞不能与其配体结合发挥作用［6］。本研究显示，两组月经血CD56+CD16+CCR7-NK细胞和CD56+CD16+CCR7+NK细胞均在较低水平，两组月经血CD56+CD16-CCR7+NK细胞水平显著高于CD56+CD16-CCR7-NK细胞；两组月经血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+均高于外周血。提示CD16-时，CCR7调控CD56+NK细胞优先迁移至子宫内膜；CD16+时，CCR7对CD56+细胞迁移至子宫内膜不发挥作用。又有研究发现，CD16的表达可能决定NK细胞是否迁移到子宫内膜［7］。健康女性的月经血高表达CD56+CD16-NK细胞，而外周血高表达CD56+CD16+NK细胞［8，9］。本研究与其结果相似。

本研究结果发现，URSA组外周血CD56+CD3-CD16-NK细胞水平高于对照组；而对照组外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+显著高于URSA组。提示URSA患者CCR7优先表达于CD16+的NK细胞亚群中。同时本研究发现，URSA组外周血CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-显著高于对照组。URSA组外周血较对照组高表达CD16+NK细胞，但差异无显著性。与之前报道［10］结果相似。本研究结果显示，两组月经血CD45RO+NK细胞水平高于外周血。有研究结果显示［11］，人类外周血CD56brightCD16-NK细胞表达CD45RO水平高于CD56lowCD16+NK细胞。活化的CD56brightCD16-NK细胞表达CD45RO［12］，CD56brightCD16-CD45RO+NK细胞在母-胎界面发挥免疫调节调节作用。本研究发现，URSA组与对照组相比，前者外周血CD45RO-NK细胞水平较高，而外周血、月经血中CD45RO+NK细胞较少。提示CD16-CCR7+CD45RO+NK细胞在成功妊娠中发挥重要作用。CD16-CCR7+CD45RO+NK细胞目前被认为可活化NK细胞亚群，在NK细胞从血液迁移至组织中，在与靶细胞形成复合物过程中发挥作用，但其在母-胎界面的作用机制目前仍不十分清楚，需进一步研究。且本研究首次将月经血作为标本研究NK细胞亚群，样本较少，有待于扩大样本进一步研究探讨。本研究结果显示，URSA患者CCR7优先表达于CD16+NK细胞，其外周血、月经血CD45RO+NK细胞均较少，可能是其发病机制之一。对月经和外周血NK细胞亚群进行检测有助于URSA的诊

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.024

R714.21

B

1002-266X（2016）21-0060-03

魏兰（E-mail：1134979643＠qq.com）

（2015-11-14）