鼻咽癌组织中BLU／ZMYND10α蛋白的表达变化及意义

韦祝新，张增峰，梁珍丽，陈霜，罗殿中

（1广西医科大学第一附属医院，南宁530021；2广西医科大学）

鼻咽癌组织中BLU／ZMYND10α蛋白的表达变化及意义

韦祝新1，张增峰2，梁珍丽2，陈霜1，罗殿中1

（1广西医科大学第一附属医院，南宁530021；2广西医科大学）

目的 探讨BLU／ZMYND10α蛋白在人鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌发生发展的关系。方法 选取鼻咽癌蜡块标本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮）和正常鼻咽黏膜组织蜡块标本18例，采用组织微阵列技术结合免疫组化法检测标本中BLU／ZMYDD10α蛋白表达，分析BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。结果 鼻咽癌组织中BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率低于癌旁正常鼻咽上皮组织、正常鼻咽上皮组织（P均＜0.05），鼻咽癌组织BLU／ZMYDD10α蛋白在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率低于正常鼻咽上皮组织和癌旁正常鼻咽上皮组织（P均＜0.05）。鼻咽癌组织中BLU／ZMYND10α蛋白表达与患者性别、肿瘤组织学分类、淋巴结转移和TNM分期无关（P均＞0.05）。结论 BLU／ZMYND10α蛋白在鼻咽癌组织中呈低表达，其低表达可能促进鼻咽癌的发生。

鼻咽肿瘤；组织微阵列；BLU／ZMYND10α蛋白；免疫组织化学

鼻咽癌（NPC）是我国南方和东南亚地区的高发恶性肿瘤，其发病机制仍未完全清楚。NPC的发生、发展与多个癌基因和抑癌基因的激活和失活密切相关［1］。最近文献报道，BLU／ZMYDD10α基因与某些恶性肿瘤的发生有关［2，3］，然而BLU／ZMYDD10α基因在NPC组织中的表达尚未见报道。本研究采用组织芯片结合免疫组化技术对正常鼻咽上皮组织、癌旁和NPC组织中BLU／ZMYDD10α蛋白水平进行检测，同时分析NPC组织中BLU／ZMYDD10α蛋白的表达与患者临床病理特征之间的关系，以探讨BLU／ZMYDD10α在NPC发生发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料 选择2003年2月～2008年12月广西医科大学第一附属医院病理科保存的NPC蜡块标本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮），患者男69例、女21例，年龄13～75（43.12±3.21）岁；患者均未行放化疗。WHO的NPC组织学分类［4］：分化型83例，未分化型7例。90例NPC患者中，有69例经临床检查、头颈部MRI和（或）CT、淋巴结活检病理诊断证实颈淋巴结转移57例，无淋巴结转移12例。TNM分期采用2003年修改的国际抗癌联盟（UICC）、美国肿瘤联合会（AJCC）联合制定修改的标准，90例NPC患者中，有58例有完整临床资料，TNM分期如下：Ⅰ期2例，Ⅱ期18例，Ⅲ期20例，Ⅳ期18例。同时选取正常鼻咽黏膜组织蜡块标本18例，男10例、女8例，年龄16～73（41.89 ±3.73）岁）；其性别、年龄与NPC患者比较差异无统计学意义。

1.2不同鼻咽上皮组织中BLU／ZMYDD10α蛋白检测 组织微阵列采用美国Beecher公司的组织阵列仪制作。兔抗人多克隆抗体BLU／ZMYDD10α蛋白抗体购自Santa Cruz公司，抗兔免疫组织化学超敏SP试剂盒、正常非免疫羊血清和DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。组织蜡块标本采用全自动切片机连续切片，切片厚4 μm。采用免疫组织化学SP染色法，首先将标本芯片切片脱蜡，水化后置于3%H2O2中室温封闭30 min后，滴加1∶500浓度的兔抗人多克隆抗体BLU／ZMYDD10α置于密封湿盒中4℃过夜；取出，滴入即用型生物素标记二抗，以标记过氧化物酶的链霉菌抗生物素蛋白，DAB显色后，苏木素复染，采用中性树胶封片。阳性对照为确诊的肺腺癌切片，阴性对照以PBS代替一抗。采用盲法由2位资深病理医师显微镜下观察，高倍镜下（×400）计数1 000个（要求避开坏死区及其周边部位）细胞，视野中棕黄色细小颗粒为细胞阳性。阳性细胞数＞20%为BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达［5］。

1.3统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料用百分比表示，比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白表达 正常鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率为94.4%（17／18），癌旁正常鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率为91.7%（22／24），NPC组织BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率为64.4%（58／90）。NPC组织BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率低于癌旁正常鼻咽上皮、正常鼻咽上皮组织（P均＜0.05）。

2.2不同鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白表达定位 正常鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白单纯在细胞质阳性表达率为5.6%（1／18），在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率为94.4%（17／18）；癌旁正常鼻咽上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白单纯在细胞质阳性表达率为12.5%（3／24），在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率为87.5%（21／24）；鼻咽癌组织BLU／ZMYDD10α蛋白单纯在细胞质阳性表达率为48.9%（44／90），在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率为51.1%（46／90）。正常鼻咽上皮和癌旁正常上皮组织BLU／ZMYDD10α蛋白在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率高于NPC组织（P均＜0.05）。

2.3不同临床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表达 见表1。

表1　不同临床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表达比较（例）

3　讨论

研究发现，BLU／ZMYDD10α基因定位于细胞质和（或）细胞核［6，7］，主要编码糖酵解限速酶的蛋白，能够催化磷酸甘油转化为磷酸烯醇式丙酮酸；同时编码的c-myc启动子结合蛋白（MBP-1），在细胞核内无酶活性，具有负向调控c-myc表达功能［8，9］。研究发现，原癌基因c-myc参与调控细胞的生长和分化，这可能是MBP-1抑制肿瘤细胞生长的主要原因［10］。BLU／ZMYDD10α基因位于人染色体1p35～p36，当此段基因缺失时，成神经细胞瘤、恶性黑色素瘤、嗜铬细胞瘤、乳腺癌和肝癌等恶性肿瘤均可发生［11］。文献报道，转染BLU／ZMYDD10α cDNA，以染色体1p缺失的成神经细胞瘤株诱导细胞凋亡可减少低存活的癌细胞数目，因此成神经细胞瘤特征为染色体1p缺失［12］。缺失1p的成神经瘤细胞在体外被导入转录的BLU／ZMYDD10α mRNA后，生长受到抑制，类似于导入293细胞系，提示MBP-1具有普遍的抑制肿瘤活性。研究发现，前列腺癌细胞被导入腺病毒介导外源的MBP-1后，癌细胞可发生凋亡［9］。BLU／ZMYDD10α在非小细胞肺癌中普遍表达下调，且表达下调程度越严重预后越差［13］。

本研究发现在正常鼻咽上皮和癌旁正常鼻咽上皮组织中BLU／ZMYDD10α蛋白正常表达，而NPC组织中BLU／ZMYDD10α蛋白表达下调，说明其表达下调与NPC的发生可能有关。但是，BLU／ZMYDD10α的表达水平与患者临床特征如性别、组织学分类、淋巴结转移及TNM分期等无关。有报道BLU／ZMYDD10α蛋白在非小细胞肺癌［8］和与HBV相关的肝肿瘤［14］中高表达，且肿瘤恶性程度与表达水平呈正相关。此类瘤细胞较正常细胞代谢率更高，而BLU／ZMYDD10α蛋白具有糖分解酶活性，当细胞代谢升高时，则呈现BLU／ZMYDD10α的高表达状态。

研究显示，BLU／ZMYDD10α蛋白位于细胞内不同部位，其功能活性也有不同。定位于细胞质时，具有糖酵解限速酶的酶活性；而在细胞核时，具有抑制肿瘤细胞生长的作用。本文发现，NPC组织中BLU／ZMYDD10α蛋白在细胞核伴或不伴细胞质的阳性表达低于正常鼻咽黏膜上皮、癌旁正常鼻咽上皮组织。在正常鼻咽上皮、癌旁正常鼻咽上皮组织，大量BLU／ZMYDD10α蛋白为细胞核伴或不伴细胞质表达，而NPC组织中BLU／ZMYDD10α蛋白单纯在细胞质表达量较高，细胞核伴或不伴细胞质BLU／ZMYDD10α蛋白表达相对降低，导致在NPC上皮组织细胞核中抑制肿瘤细胞生长的MBP-1减少或缺失，c-myc活性增强，促进肿瘤的发生。

综上所述，鼻咽癌细胞中BLU／ZMYDD10α蛋白细胞核伴或不伴细胞质表达下调，其表达变化与鼻咽癌发生相关，因此其为临床研究鼻咽癌发病机制提供了新的方向，同时也为鼻咽癌的早期诊断提供了新的分子靶标。

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1002-266X（2016）21-0040-03

广西壮族自治区卫生厅科研课题（z2014046）。

张增峰（E-mail：zfzhangphd＠163.com）

（2015-12-15）