精血补片的质量标准构建和控制

任金燕，朱海燕，王兆龙

（精华制药集团股份有限公司，江苏南通226000）

精血补片的质量标准构建和控制

任金燕，朱海燕，王兆龙

（精华制药集团股份有限公司，江苏南通226000）

为研究精血补片的质量标准，分别采用显微鉴别法鉴别制剂中紫河车，薄层色谱法鉴别制剂中南五味子、陈皮、制何首乌、人参和红参，高效液相色谱法测定制剂中的2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷含量。结果表明：显微鉴别特征明显；薄层色谱斑点清晰、分离良好；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷在0.028 24～0.706 00μ g内与峰面积有良好的线性关系，R为0.999 9，平均回收率为99.56%，RSD为2.1%（n=9）。所建质量标准能有效控制精血补片的质量。

精血补片；质量标准；显微鉴别法；薄层色谱法；高效液相色谱法

精血补片由人参、红参、制何首乌、紫河车、南五味子和陈皮等6味药材组成，具有补肝肾、益气血、养心神的功效，用于神经衰弱、精神萎靡、头晕目眩、心悸失眠等治疗。为有效控制制剂质量，对该制剂的质量标准进行了研究。

1　实验部分

1.1仪器与药品

显微镜，美国AO公司显微镜；Waters e2695高效液相色谱仪、超声仪、BP211D十万分之一电子天平，德国Sartorius公司；玻璃点样毛细管，华西医科大学仪器制造厂；层析缸，上海信宜仪器厂；硅胶G，青岛海洋化工有限公司。

南五味子对照药材（批号为121118-201008）、安五脂素对照品（批号为111844-201102）、陈皮对照药材（批号为120969-200907）、橙皮苷对照品（批号为110721-201203）、制何首乌药材（批号为121454-201210）、大黄素对照品（批号为110756-200809）、人参对照药材（批号为120917-201004）、人参皂苷Rg1对照品（批号为110703-201109）、人参皂苷Re对照品（批号为110754-201204）、人参皂苷Rb1对照品（批号为110704-200916）和2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷（批号为110844-201205），均为中国食品药品检定研究院提供，试剂均为分析纯或色谱纯。

1.2紫河车显微鉴别

取精血补片置显微镜下观察，显微特征为：无定形团块，表面凹凸不平，有的隐约可见卵圆形细胞轮廓。

1.3薄层色谱鉴别

取精血补片10片，研细，加环己烷30mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加正己烷1mL溶解，作为供试品溶液，进行薄层色谱鉴别。

2　结果与讨论

2.1. 南五味子的TCL鉴别

取精血补片10片，研细，加环己烷30mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加正己烷1mL溶解，作为供试品溶液。取无南五味子的处方药制成阴性供试品溶液，南五味子对照药材0.2g制成对照药材溶液，制备工艺同供试品。取安五脂素对照品，加正己烷制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（60∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性供试品溶液无干扰，如图1所示。

图1　南五味子TLC图

2.2陈皮TCL鉴别

取精血补片10片，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，滤液浓缩至约2mL，作为供试品溶液。取无陈皮的处方药制成阴性供试品溶液，陈皮对照药材0.3制成对照药材溶液，制备工艺同供试品。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂，展开，取出，晾干，喷三氯化铝试液，置紫外灯（365nm）下观察[1]。供试品色谱中，在对照药材和对照品位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性供试品溶液无干扰，如图2所示。

图2　陈皮TLC图

2.3制何首乌TCL鉴别

取精血补片10片，研细，加乙酸乙酯20mL，盐酸0.5mL，超声20min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取无制何首乌的处方药制成阴性供试品溶液，制何首乌对照药材0.2g制成对照药材溶液，制备工艺同供试品。取大黄素对照品加甲醇制成1mL含1mg的溶液作为对照品溶液。按照薄层色谱法，吸取上述四种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶2∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干[2]。供试品色谱中，在对照药材和对照品位置上，显相同颜色的斑点，阴性供试品溶液无干扰，如图3所示。

图3　制何首乌TLC图

2.4人参、红参TCL鉴别

取精血补片10片，研细，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流提取3h，冷却，过滤，滤液蒸干，残渣加水30mL溶解，移至分液漏斗，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20mL，取正丁醇液蒸干，残渣加水30mL溶解，过滤，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），水50mL洗脱，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去两次洗脱液，继续用70%乙醇50mL洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。取无人参、红参的处方药，按同样工艺制成阴性供试品溶液[3]。取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品各2mg，分别加甲醇2mL溶解，制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷足量的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下观察。供试品色谱中，在对照药材和对照品位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性供试品溶液无干扰，如图4所示。

图4　人参、红参TLC图

2.5标准曲线绘制

色谱柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（19∶81）；检测波长：320nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min，理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷计算不得低于5000。

精确称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷对照品7mg，置100mL容量瓶中，用稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取精血补片10片，研细，精确称取1g，，置具塞锥形瓶中，精确加入稀乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理15min，放冷，再称定重量，用稀乙醇不足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

精确量取对照品溶液1、2、5、10mL和15mL，分别置25mL容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度,摇匀。分别精确吸取上述6种浓度的对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积对浓度C（mg/mL）进行回归处理，得回归方程A=5.913×106C-2.308×103（R=0.9999）。结果表明，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷峰在0.02824～0.70600μg内与峰面积有良好的线性关系。

精确吸取供试品溶液10μL，重复进样6次，测定峰面积，其RSD为0.6%。表明仪器精确度良好。

取供试品溶液，分别于0、1、2、3、4h和8h进样10μL，测定峰面积，其RSD为0.7%。表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

按供试品溶液的制备方法，对同一批样品（批号：131001）分别制备5份供试品溶液，分别进样10μL，测定峰面积。表明测定方法重现性良好。

精确称取已知含量的样品（批号：151101，含量1.027mg/g）适量，共9份，置具塞锥形瓶中，加入2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液（0.0506mg/mL）10mL，按供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定。结果表明：2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷的回收率95%～103%，加样回收率良好。

2.6样品含量测定

取3个批号的样品各2份，制成供试品溶液，分别精确吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，进样，测定峰面积，计算2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷含量。平均含量分别为0.233、0.241、0.237mg/片（n=2）。

3　结论

实验比较了超声提取15、30、45min，结果表明：含量测定数据接近，为节约时间，故确定超声提取时间为15min。

试验比较了用超声、回流、冷浸的提取方法，结果显示：超声和回流这两种提取方法的含量测定数据较高，且两种数据较接近，为简化操作方法，故确定提取方法为超声提取。

试验比较了用稀乙醇、乙醇、甲醇作为提取溶剂的方法，结果显示：用稀乙醇所提取的供试品溶液含量较高，杂质峰较少，故采用稀乙醇作为制备供试品溶液的提取溶剂。

[1]阎雪梅,贾凡.扶肾颗粒质量标准研究[J].天津中医药大学学报,2011,30(4):234-237.

[2]李砺,张伟南,毛福林,等.七宝美髯丸的质量标准提高研究[J].海峡药学,2014,26(2):72-74.

[3]国家药典委员会.中国药典2015版[M].北京:中国医药科技出版社,2015:468-469.

Study on Quality Standards of Hematinic Tablets

Ren Jin-yan,Zhu Hai-yan,Wang Zhao-long
(Jinghua Pharmaceutical Group Co. Ltd.,Jiangsu Nantong 226000)

To study the quality standard ofhematinic tablets,the researcher usedmicroscopic observation methodto identifythe Placenta Hominis,TLC method identifiedKadsura longipedunculata,dried tangerine,Radix Polygoni Multiflori,Radix Ginseng and red ginseng,2,3,5,4 '- four hydroxy two styrene-O-β-D-grape glycoside contentin the pillis determined by HPLC. The results showed that the microscopic characteristics was obvious; the TLC spots were clear and separatedwell; 2,3,5,4 '-four hydroxy two styrene-O-β-D-glucoside is 0.028 24～0.706 00μ g,the content and peak area had a good linear relationship whileR is 0.9999,the average recovery rate was 99.56%,RSD was 2.1% (n=9). The quality standard can effectively control the quality of hematinic tablets.

Hematinic tablets; Quality standards; Microscopic identification; TLC; HPLC

R286

A

2096-0387（2016）05-0051-04

任金燕（1983-），女，江苏如皋人，本科，药师，研究方向：制剂分析。