海南民族习用香药两用降真香的原植物品种鉴定

张丹雁，高世军，张 雷，张靖年，莫 伟

(1.广州中医药大学中药学院，广东广州 510006；2.江苏天士力帝益药业有限公司，江苏淮安 223003；3.广州市合赢医药科技有限公司，广东广州 510410)



海南民族习用香药两用降真香的原植物品种鉴定

张丹雁1，高世军1，张 雷2，张靖年1，莫 伟3

(1.广州中医药大学中药学院，广东广州 510006；2.江苏天士力帝益药业有限公司，江苏淮安 223003；3.广州市合赢医药科技有限公司，广东广州 510410)

[目的]鉴定海南民族习用2种香药两用藤类降真香的原植物品种，保护和开发海南降真香资源。[方法]采用实地调研、采访观察山区植物生长状况和形态特征、收集标本，用基原鉴定法、性状鉴定法以及植物DNA条形码技术鉴别海南降真香原植物品种。[结果]海南大叶降真香和海南小叶降真香的藤本植物形态、香药材性状特征及DNA条形码特征分别与两粤黄檀DalbergiabenthamiiPrain和斜叶黄檀Dalbergiapinnata(Lour.)Prain相吻合。[结论]海南民族习用2种藤类降真香分别来源于豆科蝶形花亚科黄檀属植物两粤黄檀Dalbergiabenthamii和斜叶黄檀Dalbergiapinnata富含树脂的木材。

降真香；基原鉴定；性状鉴别；DNA条形码

降真香又名紫藤香、鸡骨香，古代本草《南方草木状》[1]、《证类本草》[2]、《本草纲目》[3]已有收载。史料[3]和现代文献[4]记载，降真香早在古代就成为宫廷达官贵族的熏香原料，同时古战场常用作刀伤止血外用药。海南民间亦视其为珍品，尤其是少数民族地区，实地考察证明，民间认为其具有活血化瘀、祛风湿、消肿止血及解毒等作用，常用作跌打损伤、刀伤、烫伤、虫蛇叮咬等外用药，同时亦可内服作为心血管疾病防治用药，此外《中国植物志》斜叶黄檀项下记载其“治风湿、跌打、扭挫伤，有消肿止痛之效”[5]。鉴于古今中外及民间有关降真香香药两用的记载和应用历史，海南降真香具有较高的香药两用的潜在经济价值和应用前景。

近几年来海南香料及工艺品市场上出现一类被当地民间称为降真香的藤类木质香料，经笔者实地考察发现，该香料按其原植物形态分为大叶型和小叶型2个品种，均采自海南各山区森林中。民间采访发现当地民众尤其是少数民族将其分别称为花梨藤和酸豆藤，自古以来除用作熏香香材外，还常用作创伤外用药，且泡酒内服用于心血管等疾病防治，故降真香又被当地民众称为“藤总管”。除此以外，现今工艺品市场上还出现了大量以降真香藤材做成的根雕、摆件、佛珠、手串、项链、线香及炼制精油等工艺品和熏香用品。然而这些被当地民众和工艺市场称为降真香的藤类材质究竟来源于何物种，至今尚未明确。笔者采用实地调研、采访观察山区植物生长状况和形态特征、收集标本，用基原鉴定法、性状鉴定法以及植物DNA条形码技术鉴别海南降真香原植物品种，以期更好地保护和开发海南降真香资源。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试材。海南大叶降真香及海南小叶降真香植物藤本，采自海南省尖峰岭、霸王岭及黎母山等山区；海南大叶降真香木材及海南小叶降真香香料木材，海南降真香协会提供；样品均保存于广州中医药大学中药鉴定教研室。

1.1.2 试剂。天根植物基因组DNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司，DP305]；6×Loading buffer(Thermo，美国)；Goldview(Life Technologies，美国)；Agarse(Life Technologies，美国)；PrimeSTAR®HS Premix(TaKaRa，大连)；DL2000 DNA Marker(Bioteke，北京)；rbcL、matK及ITS2序列引物(由华大基因合成)。

1.1.3 仪器。1-15型台式高速离心机(德国Sigma有限公司，德国)；JY1000C电泳仪(上海京工实业有限公司，中国)；T100型PCR扩增仪(美国伯乐有限公司，美国)；Eppendorf Research plus微量移液器(艾本德中国有限公司，德国)；Precisa XS 125A型电子分析天平(瑞士Precisa有限公司，瑞士)；K-WHS型数显恒温水浴锅(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂，中国)；Lab Dancer/MS3型涡旋混合仪(德国IKA有限公司，德国)；HR-220型掌上离心机(北京鼎昊源科技有限公司，中国)。

1.2 方法 1.2.1 基原鉴定及性状鉴定。通过实地调研、采访观察山区植物生长状况和形态特征、收集标本，记录描述海南大叶降真香及海南小叶降真香原植物形态及香材性状特征。1.2.2 DNA条形码鉴别。

1.2.2.1 样品前处理。将采集得到的新鲜叶片迅速装入到装有变色硅胶的密封袋中，以使尽量干燥完全。

1.2.2.3 PCR扩增体系及扩增反应程序。PCR扩增体系及扩增反应程序分别见表1～2。

表1 PCR扩增体系

表2 扩增反应程序

1.2.2.4 电泳检测。上样量分别是DNA模板10 μL、PCR产物5 μL、Marker 3 μL。电泳条件是100 V、400 mA、30 min。

1.2.2.5 测序及分析。PCR样品送样30 μL，正向引物rbcLa-F、KIM-3F和s2F分别送样15 μL，交由华大基因进行测序。对测序结果使用DNAMAN手动切除两端引物及低质量片段，登陆Genebank进行在线Blast。

2 结果与分析

2.1 基源鉴别

2.1.1 海南大叶降真香。木质藤本，枝长，干时外皮黑色。羽状复叶，叶轴、叶柄均略被伏贴微柔毛；小叶2～3对，近革质，卵形或椭圆形，先端钝，微缺，基部楔形，上面无毛，下面干时粉白色，略被伏贴微柔毛(图1)。花冠白色，每瓣具长柄，旗瓣椭圆形，先端稍缺，外翻，翼瓣倒卵状长圆形，一侧具内弯的耳，龙骨瓣近半月形，内侧具耳；雄蕊9，子房无毛，花柱锥状。荚果薄革质，舌状长圆形，种子1～2粒，扁肾形。花期2—3月。

图1 海南大叶降真香野外生境Fig.1 Wild habitat of big-leaf Jiangzhenxiang in Hainan

2.1.2 海南小叶降真香。藤状灌木，枝条略为曲折；奇数羽状复叶有小叶23～25片；叶轴、叶柄及小叶柄均被褐色短柔毛；托叶披针形，被毛；小叶纸质，斜长圆形，先端微凹，基部两侧极不对称，一侧偏斜呈楔形，另一侧近圆形，嫩叶两面被褐色短柔毛，老叶上面无毛，背面青白色；小叶柄短。花冠白色，荚果薄，膜质，长圆状舌形，干时褐色有光泽，表面有细网纹，有种子1～4粒，狭长而扁，黑褐色(图2)。花期3—4月。

图2 海南小叶降真香野外生境Fig.2 Wild habitat of small-leaf Jiangzhenxiang in Hainan

2.2 性状鉴别

2.2.1 海南大叶降真香香材。呈不规则的长条圆柱形或短柱状，常弯曲，稍扭曲，皮部刮除。表面见纵向刀刮痕和多数棕黑色树脂条斑纹，残留浅黄棕色至红棕色木部，偶见隆起的结节，年久者见黄色膜状物(习称“黄药膜”)(图3a)。质坚硬，体重，横切面见外层黑色环状树脂斑向内渗透，油润，散在密布导管孔，中部常中空(图3b)或见红棕色木部心材(图3c)，年老者偶见外围多轮同心环状黄色夹层。气芳香，味辛，微苦，火烧冒黑烟，具香气，显油性。

注：a.表面观；b.断面观(空心)；c.断面观(实心)。Note：a.Surface view；b.Section view(hollow)；c.Section view(solid).图3 海南大叶降真香香材Fig.3 Fragrance ingredient of big-leaf Jiangzhenxiang in Hainan

2.2.2 海南小叶降真香香材。性状与海南大叶降真香相似，香材表面木纹细腻，见多数黑色树脂条斑，间有浅灰棕色至红棕色木部(图4a)，横切面导管孔细小，外层见黑色树脂环，常中空(图4b)，实心油足者见黑色树脂斑，间有单个或数个浅灰棕色类圆形木质部(图4c)，实心油少者见浅棕色木部，间有单个或数个黑色树脂斑块，表面及断面极少见黄色膜。质地致密坚硬，略显椰香气。

注：a.表面观；b.断面观(空心)；c.断面观(实心)。Note：a.Surface view；b.Section view(hollow)；c.Section view(solid).图4 海南小叶降真香香材Fig.4 Fragrance ingredient of small-leaf Jiangzhenxiang in Hainan

2.3 DNA提取及PCR扩增结果 海南大叶降真香及海南小叶降真香DNA模板电泳条带均呈弥散状(图5a)，表明所提取DNA模板存在一定程度的降解；海南大叶降真香及海南小叶降真香PCR均扩增出单一清晰的目标条带，ITS2序列约500 bp，rbcL序列约为600 bp，MatK序列约为450 bp(图5b)，表明PCR体系及扩增条件对模板DNA扩增效果理想，特异性高，适用于该试验降真香香材模板DNA的PCR扩增研究。

注：M为Marker D2000；1为海南小叶降真香DNA模板；2为海南大叶降真香DNA模板；3为海南小叶降真香ITS2 PCR产物；4为海南大叶降真香rbcL PCR产物；5为海南大叶降真香MatK PCR产物。Note：M.Marker D2000；1.DNA template of small-leaf Jiangzhenxiang in Hainan；2.DNA template of big-leaf Jiangzhenxiang in Hainan；3.PCR products of small-leaf Jiangzhenxiang ITS2 in Hainan；4.PCR products of big-leaf Jiangzhenxiang rbcL in Hainan；5.PCR products of big-leaf Jiangzhenxiang MatK in Hainan.图5 DNA模板(a)PCR产物(b)电泳图谱Fig.5 Electrophoretogram of PCR products(b)of DNA template(a)

2.4 测序结果及分析

2.4.1 海南大叶降真香。剪切后rbcL序列：ATTATAAA TTGACTTATTATACTCCTGACTATGAAACGAAAGATACTGATATCTTGGCCGCATTCCGAGTAACTCCTCAACCTGGAGTTCCTCCTGAAGAAGCGGGTGCCGCGGTAGCTGCCGAATCTTCTACTGGTACATGGACAACCGTTTGGACCGATGGGCTTACCAGTCTTGATCGTTACAAAGGACGATGCTACAACATCGAGCCCGTTGCTGGAGAAGAAAATCAATATATTGCTTATGTAGCTTATCCCTTAGACCTTTTTGAAGAAGGTTCTGTTACTAACATGTTTACTTCCATTGTAGGTAATGTATTTGGGTTCAAGGCCCTGCGTGCCCTACGTCTGGAAGATTTGCGAATCCCTACTTCTTATATTAAAACTTTCCAAGGTCCGCCTCACGGTATCCAAGTTGAAAGAGATAAATTAAACAAGTATGGCCGTCCCCTATTGGGATGTACTATTAAACCGAAATTGGGGTTATCCGCTAAGAATTACGGTCGAGCAGTTTATGAATGTCTCCGCGGTGGATTGAATTTTACAAA，在线Blast结果与两粤黄檀Dalbergiabenthamii的同源性为99%，e-value：0。目标序列GeneBank登陆号：KM510238.1。

剪切后matK序列：TATCCGCAAAAATCGGTTAATAATA TCAAAATCGGATGAATCGGCCCAAACAGGCTTACTAATGGGATGCCCTAATATATTACAAAATTTCGCTTTAGCCAAAGATCTAATTAAAGGAATAATTGGAACTATTGTATCAAGCTTTTTCATAAAAATTTCAATTAAAAATGAATTTTCTAGCATTTGATTCCGGACCACTGAAAAATTTAGCCGCACATTTGAAAAATAGCCCCCCCAAAAAAAATGAAATGAATGCTCGGATAATAATGGATTTATATGGATCGTTCCAGGTTGAAACCAAACATCAAAATGACATTGCCAAAAATAAATGAAATAGTGTTTCCATTTATTCATCAAAAAAGGCGCATTCTTTGAAGCCAAAATGGCTTTTCCTTGATATCTAACATAATGAATCAAAGGATCCTTGAAAAATGATAAGGTAAACAAAAAATTCTTAAAAAAAACTTCCACAAAATGTTCGATTTTTGCATAAAAATAAATTCCCTCAAAAATAACGATAAAAGAGTTTAATCGTAAATAAAAGGATCTCTTACGTAAAAAAAGGAAAATGGATTCGTGTTCACATACATAAAAATTATATAGGAACAAGAGAATTCTTGGATTACTTTTTGAAAAAGTAGAAAT CAGTTTTTTTTTAGTAATAATACTATTCCAATTACAATACTCATAAATAAACAATCTTAATAAATGAAGGAGGGGGATCTTTCACCCAGTATCGAAGACTTTGAACCAAGATTCATTAGGAGAACTGGTTTA，在线Blast结果与两粤黄檀Dalbergiabenthamii的同源性为97%，e-value：0。目标序列GeneBank Accession：KM521278.1。

据文献报道[6]，相似性高于95%时，可判断为同源。样品rbcl序列及matK序列同GenBank中两粤黄檀Dalbergiabenthamii同源性均高于95%，表明样品为两粤黄檀Dalbergiabenthamii。

2.4.2 海南小叶降真香。剪切后ITS2序列：GCGGGGACTC GAGTCTTTGACGCAGTTGCGCCCGAAGCCATTAGGCCAAGGGCACGCCTGCCTGGGTGTCATTGACCGTTGCCCCAGCCCCCCGTGCCCGTGGCCGGGGAGCGGGGCGAATGCTGGCTTCCCGTGAGCGCCGCCTCGCGGTTGGCTGAAAATTGGGTTCGTGGTGGACGAAGCGCCATGACAGACGGTGGTTGAGCGAGTTCTCGAGGCCAGTCATGCGCGCGGCCTCCACCAGCTGCGTGCCCAGTGACCCGCGGGCGATCGCCCATGACGCGACCTCAGGTCAGGCGGGGCTACCCGCTGAGTTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACTAACGAGGATTCCCCTAGTAACGGCGAGCGAA CCGGGAAGAGCCCACCATGAGAATCGGTCGCCACTGGCGTCTGAATTGTAGTCTGAA，在线Blast结果与斜叶黄檀Dalbergiapinnata的同源性为99%，e-value：1e-101，目标序列GeneBank Accession：KP092715.1。样品ITS2序列同斜叶黄檀Dalbergiapinnata同源性高于95%，表明样品为斜叶黄檀。

3 结论与讨论

结合降真香藤茎形态、香材外观性状特征及植物DNA条形码特征，2种藤类降真香的原植物均来源于豆科蝶形花亚科黄檀属，其中大叶降真香为两粤黄檀DalbergiabenthamiiPrain，小叶降真香为斜叶黄檀Dalbergiapinnata(Lour.)Prain。《中国植物志》对于两粤黄檀的拉丁名记载为DalbergiabenthamiPrain，其种加词benthami系拼写错误，新版Flora of China已更正为DalbergiabenthamiiPrain，故该研究采用更正后的名称。

试验结果表明目前海南工艺品市场上经营流通和民间所用的香用商品降真香为豆科蝶形花亚科黄檀属植物两粤黄檀Dalbergiabenthamii及斜叶黄檀Dalbergiapinnata富含树脂的木材。现今中医药文献收载、期刊报道以及中药市场也有一种叫降真香的中药，与海南降真香名字相符，但前者为乔木类药用降真香，其来源于芸香科山油柑属山油柑Acronychiapedunculata(L.)Miq.心材[7]，后者为藤类香用降真香，其来源于豆科黄檀属两粤黄檀和斜叶黄檀，因此香用藤类降真香商品名称与现今中药市场上所用乔木类中药降真香实为同名异物，应予以区别。

由于GeneBank中未见有两粤黄檀Dalbergiabenthamii的ITS2序列的上传记录，因此该试验对两粤黄檀Dalbergiabenthamii采取了rbcL+matK方式加以鉴别，对斜叶黄檀Dalbergiapinnata采取了ITS2方式鉴别，试验结果证明，2种方法均有较高的准确率。电泳图可见样品基因组DNA呈微弱涂布状条带，表明DNA已提取出来，但DNA降解严重，质量不佳。PCR产物呈单一、明亮条带，表明ITS2、MatK、rbcL序列对于基因组DNA降解严重的样品仍有较高的扩增成功率。

[1] 嵇含.南方草木状[M].北京：中华书局，1985:14.

[2] 唐慎微.重修政和经史证类备用本草[M].广州：人民卫生出版社，1957:310.

[3] 李时珍，李经纬，李振吉，等.《本草纲目》校注[M].沈阳：辽海出版社，2001：1185.

[4] 梁居红，杜丽敏，麦有专，等.海南霸王岭的斜叶檀野生资源调查[J].热带林业，2015，43(3)：34-35.

[5] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第40卷[M].北京：科学出版社，1979：101.

[6] 陈士林.中国药典中药材DNA条形码标准序列[M].北京：科学出版社，2015.

[7] 谢宗万.全国中草药汇编：下[M].2版.北京：人民卫生出版社，1978：443.

科技论文写作规范——数字

公历世纪、年代、年、月、日、时刻和各种计数和计量，均用阿拉伯数字。年份不能简写，如1990年不能写成90年，文中避免出现“去年”、“今年”等写法。小于1的小数点前的零不能省略，如0.2456不能写成.2456。小数点前或后超过4位数(含4位数)，从小数点向左右每3位空半格，不用“，”隔开。如18 072.235 71。尾数多的(5位以上)的数字和小数点后位数多的小数，宜采用×10n(n为正负整数)的写法。数字应正确地写出有效数字，任何一个数字，只允许最后一位存在误差。

Identification of Original Plant Varieties of National Jiangzhenxiang Conventionally Used as Medicine and Incense in Hainan

ZHANG Dan-yan1, GAO Shi-jun1, ZHANG Lei2et al

(1.School of Chinese Material Medica, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou, Guangdong 510006；2.Jiangsu Tasly Diyi Pharmaceutical Co.,Ltd.,Huaian, Jiangsu 223003)

[Objective] To identify two varieties origins of Jiangzhenxiang vines which were conventionally used as medicine and incense in Hainan Province, and to provide basis for protection and development of Jiangzhenxiang resources in Hainan. [Method] Field research, interview and observation were used to investigate the plant growth condition and morphological characteristics of mountain plants, and to collect the plant samples. Then, germplasm origin identification method, character identification method and plant DNA barcode technology were used to identify the original plant varieties of Jiangzhenxiang in Hainan. [Result] The morphological characteristics, macroscopic characters and DNA barcode information of big-leaf Jiangzhenxiang liana and small-leaf Jiangzhenxiang liana in Hainan were accordant withDalbergiabenthamiiandDalbergiapinnata, respectively. [Conclusion] The two varieties Jiangzhenxiang liana conventionally used in Hainan are respectivelyDalbergiabenthamiiandDalbergiapinnata.

Jiangzhenxiang; Germplasm origin identification; Morphological identification; DNA barcode

张丹雁(1964-)，女，辽宁开原人，教授，博士生导师，从事中药鉴定、质量标准及GAP研究。

2016-08-12

S 567

A

0517-6611(2016)29-0147-04