银杏内酯对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

刘红美+李红月+王清

【摘要】 目的：探讨银杏内酯对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法：将40只SD小鼠随机分为五组，分别为空白组、模型组及银杏内酯低、中、高剂量组。采用一次大剂量酒精灌胃制作小鼠肝损伤模型。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）来评估银杏内酯对小鼠肝脏的作用。结果：模型组血清ALT及AST水平高于空白组，差异均有统计学意义（P<0.01），说明动物模型复制成功。银杏内酯中、高剂量组AST、ALT水平低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；模型组肝组织MDA明显高于空白组，SOD明显低于空白组，差异均有统计学意义（P<0.01）；银杏内酯中、高剂量组肝组织MDA均低于模型组，SOD均高于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：银杏内酯对小鼠急性酒精性肝脏氧化损伤有保护作用。

【关键词】 银杏内酯； 酒精； 氧化损伤； 保护作用

中图分类号 R285.5 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）24-0160-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.24.091

酒精性肝损伤已成为继病毒性肝炎后主要肝损伤病因，过量饮酒严重威胁人类健康。银杏内酯是银杏叶中一类重要的活性成分，银杏内酯是强效的特异性PAF拮抗剂，可与PAF竞争受体，发挥保肝的作用[1]，银杏内酯具有抗炎、抗氧化、抗过敏等药理作用[2]。本实验通过观察银杏内酯对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平和肝组织肝脏丙二醛（MDA）、肝脏超氧化物歧化酶（SOD）的影响，以明确银杏内酯对肝脏的保护作用，初步探讨其作用机制，为应用于临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验动物：40只SD雄性小鼠，体重18～22 g，购自三峡大学实验动物中心。主要试剂：银杏内酯购自宜昌康正药业有限公司（规格：2 ml/支，批号：1408143），酒精度42%（V/V）稻花香白酒，湖北稻花香酒业股份有限公司，ALT、AST检测试剂盒，MDA、SOD试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，全自动生化分析仪（迈瑞BS-350，中国迈瑞公司），离心机（TG16-WS，上海卢湘仪公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 将40只SD雄性小鼠按体重随机分为五组：空白组、模型组、银杏内酯低、中、高剂量组，每组8只。

1.2.2 给药方法 空白组、模型组用生理盐水灌胃10 d，银杏内酯低、中、高剂量组小鼠分别采用银杏内酯0.4、0.8、1.6 g/kg灌胃，连续10 d，第11天隔夜禁食后，模型组和银杏内酯各组小鼠白酒灌胃0.016 L/kg（6.72 g/kg），空白组灌胃相同剂量的蒸馏水，3 h后处死。

1.2.3 血清AST、ALT及肝脏MDA、SOD测定 小鼠断头处死后，迅速心脏采血与分离肝脏，-80 ℃保存备用。心脏采血后，13 000 r/min，离心15 min，取血清，在全自动生化分析仪上检测ALT、AST。取肝组织0.3 g，观察其病理变化，将剪碎的肝组织在玻璃匀浆管中匀浆，再将匀浆液离心13 000 r/min，离心10 min取上清液，分装待用，分别按MDA、SOD试剂盒说明书操作，采用考马斯亮蓝法测定肝组织蛋白含量，通过计算可求出样品中的MDA的含量及SOD的活力。

1.3 统计学处理

所得实验数据采用SSPS 11.0进行分析，计量资料用（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠血清AST、ALT水平比较

模型组血清ALT及AST水平高于空白组，差异均有统计学意义（P<0.01），说明动物模型复制成功。银杏内酯各组小鼠血清中ALT和AST水平均低于模型组，随银杏内酯剂量增加，小鼠ALT、AST水平降低。银杏内酯中、高剂量组AST、ALT水平低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表1。

2.2 各组肝组织MDA、SOD水平比较

模型组肝组织MDA明显高于空白组，SOD明显低于空白组，差异均有统计学意义（P<0.01）；银杏内酯中、高剂量组肝组织MDA均低于模型组，SOD均高于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表2。

2.3 肝组织病理学观察

光镜观察空白组肝组织形态学正常；而模型组可见紊乱的肝细胞索，肝细胞肿胀变性，胞质疏松，胞质内可见大小不一的脂肪空泡和水样变性，小叶内片状坏死，毛细血管及汇管区内胆管胆汁淤积，汇管区大量炎细胞浸润，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，门管区有不同程度的小胆管增生，与正常组有明显差异；银杏内酯低剂量组与模型组无明显差异，而银杏内酯中、高剂量组表现为肝细胞点状或灶状坏死，甚至有的仅有肝细胞变性和点状坏死，肝小叶结构基本正常，与模型组比较有明显差异。

3 讨论

肝脏是酒精吸收后的主要代谢场所，对酒精发生生物转化作用。正常情况下，机体内存在活性氧和自由基清除抗氧化系统，自由基清除剂对维持机体的正常生命活动起着重要的作用。乙醇导致肝细胞损伤的机制较复杂，普遍认为抗氧化损伤、脂质过氧化损伤及免疫损伤等起主要作用[3]。乙醇作为一种强烈的氧化应激源，在代谢过程中诱生出大量的自由基，许多疾病的发生都与自由基的氧化破坏有关，是造成多器官、多系统损伤的重要机制之一[4-5]。过量饮酒，当超过机体抗氧化系统的清除能力时，氧化损伤难以避免，其中以肝脏的损伤最为严重[6]。

本研究采用酒精急性肝损伤模型，一次大剂量酒精冲击（42% V/V，0.016 L/kg）和禁食联合造模，其机制除与乙醇早期干扰肝脂质代谢外，还与禁食引起肝脂肪动员有关，引起糖原含量降低，加速糖异生合成脂肪[7-8]。ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，在一定程度上可以反映肝细胞的损伤程度。本研究发现，预先给予银杏内酯进行干预，银杏内酯中、高剂量组和模型组比较，血清ALT和AST水平明显降低，可见银杏内酯对急性酒精性肝氧化损伤具有较强的保护作用。MDA是脂质过氧化反应的主要产物之一，MDA也是反映肝损伤程度的有效指标，其含量越高说明肝细胞膜脂质过氧化越强，受损越严重[9]。SOD为自由基清除剂，是生物体内清除自由基的首要物质，减弱机体的氧化应激状态。本研究预先给予银杏内酯进行干预，银杏内酯中、高剂量组和模型组比较，肝组织MDA明显较低，肝组织SOD明显较高，说明银杏内酯可提高肝组织SOD水平，降低MDA水平，从而有防治酒精性肝损伤的作用。

综上所述，不同剂量的银杏内酯可以降低小鼠血清中ALT、AST和肝组织MDA水平，并能提高SOD水平，结合光镜观察结果，说明银杏内酯起到抗脂质过氧化作用，对小鼠酒精性肝损伤有保护作用，为临床上银杏内酯用于防治酒精性肝细胞氧化损伤提供科学依据。

参考文献

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（收稿日期：2016-04-21）