UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织中的表达情况及临床意义

2016-11-29郑彦强时志民孙秀敏刘石萍杨俊英

现代中西医结合杂志 2016年32期

庞岚，郑彦强，时志民，孙秀敏，刘石萍，杨俊英，张婕

(1.河北省邯郸市妇幼保健院，河北邯郸 056000；2.河北工程大学，河北邯郸 056000；3.河北省邯郸市中心医院，河北邯郸 056001；4.五矿邯邢矿业有限公司职工总医院，河北邯郸 056000；5.河北省成安县人民医院，河北成安 056000)

庞岚1，郑彦强1，时志民2，孙秀敏1，刘石萍3，杨俊英4，张婕5

目的观察子宫内膜癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂(UPA)和金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况及与病理学指标的关系，探讨UPA和MMP-9表达水平的相关性。方法收集子宫内膜癌组织68例和正常子宫内膜组织32例，采用微波EliVisionTM免疫组织化学方法观察UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的表达水平，Spearman相关分析法分析二者有无相关性，分析二者表达与子宫内膜癌临床病理指标之间的关系。结果子宫内膜癌中UPA和MMP-9表达定位于细胞浆；UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织的阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05)。Spearman相关分析检测UPA和MMP-9表达水平存在正相关性(r=0.261,P=0.000)；UPA和MMP-9高表达均与组织学分级、cTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论 UPA和MMP-9的表达在子宫内膜癌的发生、发展和淋巴结转移中发挥重要作用，提示临床检测二者有可能为评估子宫内膜癌病变程度提供参考。

子宫内膜癌组织；UPA蛋白；MMP-9蛋白；EliVisionTM免疫组化

女性生殖系统的恶性肿瘤包括宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌，其中子宫内膜癌发病率占到女性恶性肿瘤的第二位，且发病率呈逐年上升趋势[1]。子宫内膜癌的浸润转移是其预后较差的主要原因，在肿瘤浸润转移过程中有多种因子共同参与，尿激酶型纤溶酶原激活剂(UPA)和金属蛋白酶-9(MMP-9)通过降解细胞外基质(ECM)和促进血管生成等作用，在肿瘤浸润转移中发挥作用。本研究采用免疫组织化学SP法检测了子宫内膜癌组织中UPA和MMP-9的表达情况，探讨二者在子宫内膜癌的发生、发展的作用，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料选取2011年1月—2014年12月邯郸市妇幼保健院和邯郸市中心医院收集的68例子宫内膜鳞癌组织蜡块为实验组，年龄56～71岁，中位年龄62.9岁；绝经年龄47～62岁，中位年龄55岁。根据国际妇产科联盟(FIGO，2000)病理分期标准：Ⅰ期22例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例；组织学分级：高分化(G1)38例，中分化(G2)22例，低分化(G3)8例；病理类型：子宫内膜样腺癌52例，腺鳞癌2例，透明细胞癌7例，浆液性乳头状腺癌7例；肌层浸润深度：肌层浸润深度≥1/2 28例，1/2 以内及无肌层浸润40例；淋巴结转移：术后证实有淋巴结转移33例，无淋巴结转移35例。另选癌旁正常子宫内膜癌组织标本32例作为对照组。

1.2 试剂与方法 S-P试剂盒、DAB显色液及兔抗人UPA单克隆抗体、兔抗人MMP-9多克隆抗体。采用微波EliVisionTM免疫组织化学方法,先行抗原修复，抗体为兔抗人UPA、兔抗人MMP-9(1∶100)，取已知切片作为阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，DAB显色，苏木素复染，镜下观察UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的表达水平。Spearman相关分析法分析UPA和MMP-9有无相关性，并分析二者表达与子宫内膜癌临床病理指标之间的关系。

1.3 结果判断标准以在阳性细胞内出现棕黄色颗粒为阳性,UPA阳性表达定位于细胞浆，MMP-9阳性表达定位于细胞膜和细胞浆。每张切片均随机观察5个高倍视野(×400)，阳性细胞数<5%为(-)，5%～25%为(+)，26%～50%为()，>50%为()。+～为阳性表达。

1.4 统计学方法数据采用SPSS 19.0软件进行统计学处理，计数资料采用2检验,相关性分析用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UPA和MMP-9在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中的表达 UPA蛋白在正常子宫内膜组织中表达率为15.63%(5/32)，在子宫内膜癌组织中表达率为70.59%(48/68)，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)；MMP-9蛋白在正常子宫内膜组织中表达率为25.00%(8/32)，在子宫内膜癌癌中的表达率为80.88%(55/68)，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理参数的关系 UPA和MMP-9阳性表达与组织学分级、cTNM分期、淋巴结转移均有关(P均<0.05)。见表1。

表1 UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理参数的关系例

2.3 UPA和MMP-9二者表达的相关性分析 UPA和MMP-9在子宫内膜癌中的表达呈明显正相关(r=0.261，P<0.05)。见表2。

表2 UPA和MMP-9在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析例

3 讨论

UPA是一种丝氨酸蛋白水解酶，具有激活纤溶酶原(PLG)作用，在组织改建、细胞迁移、肿瘤侵袭转移及肿瘤血管形成等病理、生理过程中发挥重要作用[2]。肿瘤发生侵袭性成长基本需要几步来完成，首先要对ECM进行黏附，接着对ECM进行降解，最后肿瘤细胞通过ECM后迁徙到新的部位[3]。其中降解ECM是关键，多种蛋白酶能降解ECM，UPA是重要的ECM降解蛋白酶，除了可以直接降解ECM外，作为激活物还可以通过激活纤溶酶原转化成纤溶酶；还可以激活金属蛋白酶，刺激血管生成。UPA具有的生物学作用最终目的是降解ECM成分。研究也证实，在乳腺癌、胃癌、大肠癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤组织中UPA呈现高表达，UPA参与肿瘤的发生、发展的同时也参与了这些肿瘤的浸润、转移[4-7]。本研究也证实，UPA在子宫内膜癌组织中呈高表达，提示其在子宫内膜癌组织中有促癌作用；且UPA在子宫内膜癌中的表达与cTNM分期及淋巴结转移相关，在分化程度较差、cTNM分期晚、淋巴结转移的病例中UPA呈明显高表达，其水平高低预示着子宫内膜癌的恶性程度，原因为UPA与其生物学功能密切相关，通过降解肿瘤组织的ECM和促进血管生成等作用实现其促癌功能。故检测UPA在子宫内膜癌组织中的水平，可以正确认识和判断子宫内膜癌的进展情况，对临床工作具有一定实用价值。

金属蛋白酶家族(MMPs)包括26个成员，金属蛋白酶在破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障中扮演主要角色，其中MMP-9是MMPs家族中最重要的一员，由巨噬细胞、纤维母细胞、内皮上皮细胞分泌产生，其作用为通过降解、破坏ECM中Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ、Ⅺ型胶原，破坏ECM和基底膜的结构，使肿瘤细胞可以沿着受损的基底膜向周围组织浸润[8-10]；还可以降低肿瘤细胞之间的黏附性，使肿瘤细胞容易脱离原发灶，提高肿瘤细胞的浸润和游走能力，最终达到恶性肿瘤浸润及转移的目的[11-12]。同时MMP-9在降解ECM过程中释放促血管生成因子，提高血管内皮生长因子(VEGF)水平，促进血管生成，血管生成是肿瘤生长、浸润和转移的基本条件，在为其提供途径同时也为肿瘤提供养分等新陈代谢。本研究结果发现其表达与子宫内膜癌发生关系密切，且与cTNM分期、淋巴结转移密切相关，提示MMP-9在子宫内膜癌的淋巴转移途径中产生了重要作用，其高表达直接证明预后差，值得临床医生关注。

相关研究显示，在某些肿瘤组织中UPA和MMP-9相互作用，共同降解肿瘤组织的ECM，UPA激活纤溶酶原转化为纤溶酶，MMP-9重要的功能是被激活后形成胶原酶，二者在肿瘤组织中相互配合，这种配合称为基因协同作用假说[13-15]。基因协同作用假说认为在肿瘤形成、发展和转移过程中至少存在2个基因的异常激活。本研究结果显示，在子宫内膜癌组织中UPA和MMP-9呈显著正相关，说明在子宫内膜癌中MMP-9与UPA呈现高度的一致性，在肿瘤发生、发展和转移过程中起到协同作用，共同参与降解ECM。对两者的检测有助于不良预后(侵袭和转移)的早发现。

综上所述，UPA和MMP-9的表达在子宫内膜癌的发生、发展和淋巴结转移中发挥重要作用，提示临床检测二者有可能为评估子宫内膜癌病变程度提供参考，为今后对抗子宫内膜癌治疗及预防转移及复发提供了一个新思路。

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