血栓通注射液对血管性痴呆大鼠的行为学改善作用研究*

王金鑫，杨红云，郭虹，柴丽娟，张玥，王少峡，胡利民

（天津中医药大学中医药研究院，天津市中药药理学重点实验室，教育部方剂学重点实验室，天津300193）

血栓通注射液对血管性痴呆大鼠的行为学改善作用研究*

王金鑫，杨红云，郭虹，柴丽娟，张玥，王少峡，胡利民

（天津中医药大学中医药研究院，天津市中药药理学重点实验室，教育部方剂学重点实验室，天津300193）

[目的]探讨注射用血栓通（冻干）对血管性痴呆（VD）大鼠行为学的改善作用。[方法]将SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、他克林组、血栓通组，每组20只，采用结扎双侧颈总动脉的的方法复制VD大鼠模型，以他克林为对照，通过对给药期间各组大鼠死亡率和体质量的变化，观察生存质量的变化；通过水迷宫和Y迷宫的方法分别观察术后20 d各组大鼠行为学的变化。[结果]与模型组比较，各组间死亡率及体质量变化无统计学意义。与假手术组比较，模型组大鼠学习记忆能力下降，表现为穿过平台的次数减少（P＜0.01）；与模型组比较，血栓通可以使模型大鼠穿过平台次数增加（P＜0.01），和阳性对照药物他克林药效相当；Y迷宫中，与模型组比较，低剂量组的空间记忆能力明显提高（P＜0.05）。[结论]注射用血栓通（冻干）对VD大鼠的学习记忆能力有改善作用。

血管性痴呆；行为学；水迷宫；注射用血栓通

血管性痴呆（VD）是由多次脑卒中或长期慢性脑缺血所致的大脑皮质获得性高级功能进行性衰退性疾病[1－3]。其临床的主要表现为记忆力下降，表情淡漠或呆滞，人格的改变等[4－5]。随着中国老龄化社会的到来，近年VD的发病率明显上升，所以寻找有效预防和治疗VD的药物迫在眉睫。三七为五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]的干燥根和根茎。主要功效为散瘀止血，消肿定痛，在临床上及制剂方面应用都非常广泛。注射用血栓通（冻干），采用三七主根为原料制成，主要成分为三七总皂苷，具有活血祛瘀，通脉活络，扩张血管，改善脑供血、增加脑灌注、减轻缺血所致病理损害，降低胆固醇，抑制血小板聚集，降低血黏度等多种作用，在临床中应用广泛。注射用血栓通对VD是否具有治疗和改善作用还未见报道。本实验通过对大鼠双侧颈总动脉永久性结扎，建立VD大鼠模型。观察注射用血栓通对血管性痴呆大鼠的神经保护性作用，为注射用血栓通在VD中的临床应用提供科学理论依据。

1　材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物健康雄性SPF级SD大鼠80只，体质量250～280 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供（科学研究用SPF级SD大鼠，合格证号：11400700091178）。

1.1.2药品及试剂注射用血栓通（冻干）：广西梧州制药股份有限公司生产（批号：13102015），他克林：Sigma公司生产，其他为市售分析纯。

1.2方法

1.2.1分组及给药SD大鼠进鼠后使其适应饲养环境1周，然后将大鼠按体质量由大到小排列，然后随机分为4组：假手术组、模型组、他克林组、注射用血栓通组，每组20只。二次手术后第2天开始给药，连续给药至取材。注射用血栓通用生理盐水溶解，进行腹腔注射，剂量50 mg/kg；假手术组和模型组腹腔注射等量的生理盐水；他克林用生理盐水配成混悬液，进行腹腔注射，剂量10 mL/kg。

1.2.2模型复制方法参照文献[6]，将SD大鼠用10%的水合氯醛进行麻醉（3 mL/kg，），仰卧于固定台上，固定四肢，颈部备皮并用碘伏进行消毒，颈部正中切口，分离左侧颈总动脉，用4号线结扎，缝合皮肤，1周后重新麻醉，分离右侧颈总动脉并用4号线进行结扎，缝合皮肤，两次手术缝合伤口后都要在切口处局部注射硫酸庆大霉素0.2万U。假手术组只分离颈总动脉，穿线但不结扎，其他处理一样。

1.2.3检测方法

1.2.3.1水迷宫检测水迷宫实验是研究大鼠的海马等脑区受到损害后的学习、记忆和空间定向以及认知能力的实验。分为环境熟悉、定位巡航和空间探索3个阶段。第一阶段主要使大鼠熟悉实验环境及实验人员；定位航行阶段，主要记录大鼠的逃避潜伏期的变化；空间探索阶段，主要记录大鼠穿过平台的次数。

1.2.3.2Y迷宫检测Y迷宫实验是评价动物空间记忆能力的实验，主要用于测试实验动物的短期记忆能力。Y迷宫是将大鼠放在Y形迷宫一个特定的臂末端，自动记录5 min内大鼠进入各个臂的顺序和次数。记录实际交替数，并计算自发交替百分数，记录总进臂数作为自发活动的指标。

1.3统计学处理所有实验数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析，死亡率统计采用百分比表示，其他数据采用均数±标准差（±s）表示。各组死亡率之间的差异进行卡方检验，各组大鼠的体质量变化和逃避潜伏期变化用重复测量的方差分析；各组大鼠穿越平台次数和Y迷宫自发交替百分数先检测其正态性及方差齐性，如果符合正太分布且方差齐则各组间比较采用单因素方差分析，然后用Newman－Keuls检验进行组间两两比较，若不符合正态分布或方差不齐，则采用秩和检验，P＜0.05位差异具有统计学意义。

2　结果

2.1各组大鼠死亡率及体质量变化成模后，统计各组大鼠在给药期间的死亡率，经卡方检验，各组在实验各个时期的死亡率没有差异。从给药期间各组大鼠的体质量变化中可以看出，血栓通组在各个时期的体质量变化与模型组相比没有差异。见表1、表2。

表1　各组大鼠死亡率统计Tab.1　Morality of rats in each group%

表2　各组大鼠体质量变化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

表2　各组大鼠体质量变化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

组别动物数第1周第2周第3周第4周假手术组16274±18.4 266±16.7 327±18.9 345±26.4模型组19272±15.5 267±23.0 305±23.8 332±36.5他克林组（10 mL/kg）17271±15.5 257±10.6 276±38.9 300±41.7血栓通组（50 mg/kg）16271±15.0 271±15.0 257±16.6 292±22.7组别动物数第5周第6周第7周第8周假手术组16357±26.3 390±19.8 408±28.2 424±34.4模型组19351±25.9 373±29.0 382±25.4 391±25.1他克林组（10 mL/kg）17311±49.4 335±58.8 339±60.3 347±68.4血栓通组（50 mg/kg）16307±23.2 324±29.0 355±41.4362±48.6

2.2水迷宫结果统计从水迷宫中得到两组数据，分别是定位航行阶段各组逃避潜伏期的变化（见表3）和空间探索阶段各组穿越平台的次数（见表4）。从各组逃避潜伏期的变化来看，第1次定位航行时模型组与假手术组相比较，逃避潜伏期有统计学差异（P＜0.05），表明模型组巡航能力的下降；各组进入平台期之间无统计学差异。空间探索阶段，与假手术组比较，模型组大鼠学习记忆能力下降，表现为穿过平台的次数减少（P＜0.01）；与模型组比较，血栓通组可以使大鼠穿过平台次数增加（P＜0.01），和阳性对照药物他克林药效相当。

表3　各组大鼠逃避潜伏期的变化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

表3　各组大鼠逃避潜伏期的变化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

注：与假手术组比较，*P＜0.05。

组别动物数逃避潜伏期（s）第1次第2次第3次第4次第5次假手术组1655.8±28.94 19.8±18.63 16.3±16.4817.4±14.9310.3±10.37模型组1968.9±29.16*34.9±29.85 22.2±21.1523.7±21.9311.9±13.04他克林组（10 mL/kg）1756.3±31.11 31.2±26.52 27.7±26.0816.4±15.4717.0±19.17血栓通组（50 mg/kg）1769.1±25.86*40.2±34.00 28.6±30.7328.5±27.3920.7±20.22

表4　各组大鼠穿过平台的次数（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

表4　各组大鼠穿过平台的次数（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

注：与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01。

组别动物数穿过平台次数（次）假手术组162.6±1.58模型组191.3±0.50##他克林组（10 mL/kg）173.7±1.65**血栓通组（50 mg/kg）153.4±0.88**

2.3Y迷宫结果从Y迷宫中得到自发交替百分比（见表5）。与模型组比较，血栓通组自发交替百分比明显增多（P＜0.05），说明血栓通对慢性脑缺血大鼠空间记忆障碍有改善作用。

表5　Y迷宫中自发交替百分数（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

表5　Y迷宫中自发交替百分数（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05。

组别动物数穿过平台次数（次）假手术组853.8±24.5*模型组954.5±34.9*他克林组（10 mL/kg）942.4±31.1*血栓通组（50 mg/kg）567.2±19.6*

3　讨论

VD是指各种脑血管病引起脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征，VD在欧洲和美国是仅次于阿茨海默氏病的第2位的最常见痴呆[7]。然而由于生存环境、生活方式、体质差异等原因,在亚洲及许多发展中国家,VD的发病率超过了阿茨海默氏病[8-9]。随着中国老龄化社会的到来，VD的发病率也在逐年提高，VD已经成为威胁老年人身心健康的主要因素。因此笔者对VD的研究也具有十分重要的临床及社会现实意义。

以往大量临床及科学实验研究[10-16]证明VD的致病过程与多种因素相关，主要的致病机制包括：炎性、凋亡、氧化应激、突触结构和功能异常、中枢胆碱能及单胺能系统神经递质功能紊乱、能量代谢障碍等。目前临床常用的痴呆治疗药物[17-21]有：抗氧化剂、神经营养药物、胆碱酯酶抑制剂、钙通道阻滞剂、中医中药等，但这些药物的长期治疗效果有待进一步论证。

本实验通过对SD大鼠两侧颈总动脉永久性结扎，得到VD模型。通过记录给药期间的死亡率和体质量变化，考察血栓通对VD大鼠生存质量的影响；采用水迷宫和Y迷宫的行为学方法，考察其对学习和记忆能力的影响。实验表明，血栓通组的水迷宫的穿越平台次数及Y迷宫的自发交替百分比较模型组有明显的提高，说明血栓通对血管性痴呆大鼠的学习及记忆有明显的改善作用。笔者的研究为注射用血栓通在VD中的临床应用提供了一定的科学实验依据。

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（本文编辑：马英，滕晓东）

Study of the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection on vascular dementia rats

WANG Jin-xin,YANG Hong-yun,GUO Hong,CHAI Li-juan,ZHANG Yue,WANG Shao-xia,HU Li-min
（Institute of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Key Laboratory of Chinese Medicine Pharmacology, Key Laboratory of Pharmacology of Traditional Chinese Medical Formulae,Ministry of Education, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To research the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection(lypolized)in curing vascular dementia(VD)rats.[Methods]SD rats were randomly divided into 4 groups(n＝20 per group):Sham group,Model group,Tacrine (Control)group and Xueshuantong group.All groups in addition to sham group

a surgery called bilateral common carotid artery occlusion(BCCAO)to establish VD models.The survival quality of all rats was recorded.Water morris and Y-maze were taken to be behavioral test.[Results]Compared with model group,there was no statistical significance among all groups in death rate and weight’s change of rat.Compared with sham group,learning and memory ability of model group dropped with a reduced number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test.Compared with model group,Xueshuantong could increase the number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test which is the same as Tacrine group.Compared with model group,spatial memory ability of low dose group (Xueshuantong)obviously improved in Y-maze test.[Conclusion]Xueshuantong for injection(lypolized)could improve learning and memory ability of VD rats.

vascular dementia；behavioral test；water morris,；Xueshuantong for injection

R749.1

A

1672-1519（2016）11－0682－04

“重大新药创制”科技重大专项课题（2012ZX09 101201－004）；天津市应用基础与前沿技术研究计划（14JCYBJC28900）；广西科学研究与技术开发计划（14125008－2－5）。

王金鑫（1990－），男，硕士研究生，研究方向为脑血管病及糖尿病并发症。

王少峡，E－mail:wangshaoxia1@163.com。

（2016-04-26）