库车县猪高致病性蓝耳病血清学调查研究

魏鲁予

(新疆阿克苏地区库车县兽医站，新疆阿克苏 842000)

库车县猪高致病性蓝耳病血清学调查研究

魏鲁予

(新疆阿克苏地区库车县兽医站，新疆阿克苏 842000)

通过对库车县生猪规模场进行调查采样，进行猪高致病性蓝耳病血清学检测，分析本县区域内断奶仔猪、育肥猪、母猪、公猪高致病性蓝耳病抗体效价，为全县养殖户的合理使用该疫苗提供参考依据。

猪；高致病性蓝耳病；血清学

猪高致病性蓝耳病是一种高度接触性传染病，猪是唯一的自然宿主，不同年龄、各种品种和用途的猪均可感染，但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感染。患病猪和带毒猪是本病的主要传染源。

目前，猪高致病性蓝耳病病毒仍是优势流行毒株[1]，流行数年之后，其致病性和毒力仍未降低，危害大且引发疫情，一旦猪场发病，仍然呈现高发病率、高死亡率、母猪流产，特别是中、小型猪场与散养户多发。主要侵害猪免疫系统细胞，引起局部免疫抑制，常导致继发感染，猪群中若存在高致病性蓝耳病，则猪群中发生流产、早产、死胎及木乃伊胎儿等症状[2]。由于高致病性蓝耳病能破坏猪体免疫系统，并引起繁殖障碍和呼吸问题，常给养猪业带来巨大损失，因此，各国科技工作者对该病的研究也在不断深人。近年来不少猪场采取强制免疫、普遍免疫和频繁免疫的不合理、不科学的免疫方法。

本实验通过对库车县37个猪场进行采样，分离血清394份，进行血清学抗体检测，进而判断在不同的饲喂阶段猪高致病性蓝耳病抗体水平的高低，为进一步推进猪高致病性蓝耳病防控工作提供了一定的科学依据。

1 实验材料

1.1 仪器设备

酶标仪、小型离心机、微量振荡器、微量移液器、稀释板、漩涡振荡器等。

1.2 试剂

LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒（北京天之泰生物科技有限公司提供），包括包被PRRS抗原的96孔板、洗液（×10）、样本稀释液（×3）、酶标复合物、底物TMB、底物终止液希硫酸、阳性对照血清、阴性对照血清、蒸馏水。

2 实验方法

2.1 试剂的准备

洗液（×10）：取1份清洗液加入9份的灭菌水或去离子水中，配好的液体在7天内用完；

样本稀释液（×3）：配制时用1体积的样品稀释液中加入2倍体积的蒸馏水，配好的液体在2d内用完；

2.2 样本的准备

样本需用样本稀释液进行200倍稀释：先吸取5µl样本加入95µl的样本稀释液中，混匀；再吸取5µl稀释了20倍的液体加入ELISA反应板孔，再加入45µl的样本稀释液。

2.3 操作步骤

（1）将试剂放在室温，并轻摇或者倒置混匀；

（2）将样本和对照加入板孔中，加入50µl阳性和阴性对照，及200倍稀释的样品在反应板孔。阳性对照和阴性对照双份；

（3）盖上膜，在37℃作用60min；

（4）去膜，用300µl洗液洗涤3遍，并在吸水纸上将平板弄干；

（5）在每个孔中加入50µl酶标抗体；

（6）盖上膜，在37℃作用60min；

（7）去膜，用300µl洗液洗涤3遍，并在吸水纸上将平板弄干；

（8）加入50µl底物，轻摇板2s；

（9）将平板放在黑暗中在20～25℃作用10min；

（10）加入50µl终止液，轻摇板混匀；

（11）在450nm下读数并记录结果。

2.4 试验结果判定

（1）试验成立条件：阳性对照的平均值OD450＞0.6，

而且阳性对照平均值/阴性对照平均值＞0.4

（2）结果解释 结果用IPRC表示，计算公式是：

IPRC＝【（OD450样品－OD450阴性对照平均值）/（OD450阳性对照平均值－OD450阴性对照平均值）】×100。

IPRC≤20.0，阴性；IPRC＞20.0，阳性。

3 结果

通过间接ELISA实验对37个猪场的394份血清进行猪高致病性蓝耳病抗体检测，全县猪高致病性蓝耳病体合格率达到74.4%，其中断奶仔猪、育肥猪、母猪、公猪抗体合格率分别为66.7%、71%、89.8%、77.8%，具体结果见表1。

表1 猪高致病性蓝耳病血清学抗体效价表

图1 猪高致病性蓝耳病抗体检测结果

4 讨论

通过对394份血清学抗体检测，可以看出，本县在母猪水平上高致病性蓝耳病防疫水平较好，其次是公猪，在断奶仔猪方面，高致病性蓝耳病防疫较弱，对此病的防疫不能忽视。

具体综合防治措施如下：（1）建立稳定的种猪群，坚持自养自繁的原则，如引种，引入后必需建立隔离区，一般需隔离检疫3-4周，健康者方可混群饲养[3]。（2）建立健全规模化猪场的生物安全，实行封闭式管理，生产流通实现全进全出。（3）在科学的管理基础上做好饲喂、环境控制、防疫、检疫、隔离、消毒等工作，以提高猪群对其他病原微生物的抵抗力，从而降低继发感染的发生率和由此造成的损失。（4）定期对猪舍和饲养区域进行消毒，保持猪舍、饲养管理用具及环境的清洁卫生。（5）做好药物控制猪群的细菌性继发感染的敏感阶段。建议在妊娠母猪产前和产后阶段、哺乳仔猪断奶前和断奶后、转群等阶段按预防量适当在饲料中添加一些抗菌药物，以防治猪群的细菌性继发感染。（6）对发病猪场要严密封锁，对发病猪场周围的猪场也要采取一定的防范措施，避免疫病扩散。对流产的胎衣、死胎及死猪做好无害化处理，产房彻底消毒，隔离病猪，对症治疗，改善饲喂条件等。

[1] 李公美，钱爱东，高云航，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机制及防制研究进展[J].中国兽药杂志，2008，42（10）：40-44.