甲状腺乳头状癌nm23H1和VEGF的表达及其意义

李永庆,尚培中,任爱玲，柳 勇，谷化平，李 伟

(1.中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000；2.中国人民解放军第251医院病理科，河北 张家口 075000)



甲状腺乳头状癌nm23H1和VEGF的表达及其意义

李永庆1,尚培中1,任爱玲1，柳 勇1，谷化平2，李 伟2

(1.中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000；2.中国人民解放军第251医院病理科，河北 张家口 075000)

目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)nm23H1和VEGF表达及其意义。方法 应用免疫组化染色EliVisionTMplus两步法检测164例PTC癌组织和30例癌旁甲状腺组织中nm23H1和VEGF的表达状况。结果 癌组织nm23H1总体阳性表达率(57.3%)显著低于癌旁组织(93.3%)(P<0.05)，有浸润和有淋巴结转移者阳性表达率显著低于无浸润和无淋巴结转移者(P<0.05)；癌组织VEGF总体阳性表达率(59.8%)显著高于癌旁组织(13.3%)(P<0.05)，有浸润和有淋巴结转移者阳性表达率显著高于无浸润和无淋巴结转移者(P<0.05)；癌组织nm23H1和VEGF表达呈负相关(r=-0.47)。结论 nm23H1和VEGF表达与PTC浸润转移相关，联合检测对判断预后有一定意义。

甲状腺肿瘤；nm23H1；VEGF；浸润；转移

nm23H1(nm表示non-metastasis，23表示第23个克隆基因，H1表示人类nm23家族成员的第1个)是人类一种肿瘤转移抑制基因，与细胞分化、凋亡、增殖及DNA突变等相关，其表达状况影响多种癌细胞转移潜能。VEGF(血管内皮生长因子，vascular endothelial growth factor)在肿瘤中高表达可刺激新生血管形成，促进肿瘤生长和转移。甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲状腺癌最常见的一种病理类型，约占甲状腺癌的70%～80%[1]。我们采用免疫组化染色EliVisionTMplus两步法检测164例PTC组织nm23H1和VEGF的表达，探讨其与PTC浸润与转移的关系，以期为指导临床随访和治疗提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009-03-2016-02月于中国人民解放军第251医院行手术治疗的PTC患者164例，其中男53例，女111例；年龄17～75岁，平均(39.4±11.9)岁。所有患者术前行彩超、CT、磁共振等影像学检查了解肿瘤大体情况；术中根据具体探查及纳米炭混悬液淋巴示踪，按照治疗指南及专家共识确定甲状腺切除和颈淋巴结清除范围；术后根据病理诊断及免疫组化结果综合判定肿瘤大小、部位，是否有甲状腺包膜、腺体外组织或血管浸润及区域淋巴结转移。本组有浸润者99例，无浸润者65例；有淋巴结转移者93例，无转移者71例。选取距瘤体2 cm以上、经病理检查确认无肿瘤组织的同侧或对侧癌旁甲状腺组织30例作为对照组。

1.2 纳入标准

入选患者原发癌瘤直径>1.0 cm，术前均未曾接受任何相关治疗，针吸细胞学诊断或术中冰冻快速病理诊断为PTC，术中证实未累及气管、食管。研究方案通过医院伦理委员会批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

1.3 剔除标准

①直径≤1.0 cm的微小乳头状癌；②术前曾接受甲状腺制剂、131I或中药治疗的患者；③合并甲状腺炎；④伴发其他部位肿瘤；⑤伴发其他部位明显炎性疾病。

1.4 免疫组化染色方法

手术标本均行常规HE染色，取相邻切片行免疫组化染色。即用型鼠抗人nm23H1和VEGF单克隆抗体、EliVision试剂盒和二氨基联苯胺显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，常规制备4 μm厚连续切片，65 ℃烘烤备用。微波-枸橼酸钠缓冲液修复抗原，采用EliVisionTMplus两步法，按试剂盒说明书操作。以公司提供的阳性染色切片作阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.5 判定标准

阳性颗粒呈棕黄色或棕褐色，由2位有经验的病理医师在光学显微镜下进行双盲独立观察，按染色深浅强度评分：无染色0分，棕黄色1分，棕褐色2分；按染色癌细胞所占比例评分：≤30%1分，31%～70%2分，≥71%3分。每例按两项评分之和定性：0分阴性(-)，1～3分弱阳性(+)，4～6分强阳性(++)。弱阳性和强阳性均计为阳性。

1.6 统计学方法

数据资料应用SPSS 17.0统计软件进行χ2检验及相关分析，检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 nm23H1和VEGF在癌组织及癌旁组织中的表达

nm23H1阳性物质主要定位于细胞质和细胞核，少量可见于细胞膜(图1)，癌组织中nm23H1总体阳性率为57.3%(94/164)，其中强阳性率为26.8%(44/164)，弱阳性率为39.5%(50/164)，阴性率为42.7%(70/164)；癌旁甲状腺组织中nm23H1总体阳性率为93.3%(28/30)，其中强阳性率为83.3%(25/30)，弱阳性率为10.0%(3/30)，阴性率为6.7%(2/30)。癌组织nm23H1总体阳性率(χ2=14.095)、强阳性率(χ2=35.332)和弱阳性率(χ2=5.361)与癌旁甲状腺组织比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。VEGF阳性物质定位于细胞质和细胞膜(图2)，癌组织中VEGF总体阳性率为59.8%(98/164)，其中强阳性率为33.5%(55/164)，弱阳性率为26.2%(43/164)，阴性率为40.2%(66/164)；癌旁甲状腺组织中VEGF总体阳性率为13.3%(4/30)，其中强阳性率为3.3%(1/30)，弱阳性率为10.0%(3/30)，阴性率为86.7%(26/30)。癌组织VEGF总体阳性率(χ2=21.920)、强阳性率(χ2=11.267)与癌旁甲状腺组织比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，而弱阳性率(χ2=3.688)差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

图1 甲状腺乳头状癌组织nm23H1免疫组化阳性染色(EliVisionTMplus×100)

图2 甲状腺乳头状癌组织VEGF免疫组化阳性染色(EliVisionTMplus×100)

表1 nm23H1和VEGF在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达 n(%)

2.2 nm23H1和VEGF表达与浸润转移的关系

有浸润与无浸润PTC患者比较，nm23H1阳性率分别为38.4%(38/99)和86.2%(56/65)，差异有统计学意义(χ2=36.600，P<0.05)；VEGF阳性率分别为69.7%(69/99)和44.6%(29/65)，差异有统计学意义(χ2=10.264，P<0.05)。有淋巴结转移与无转移PTC患者比较，nm23H1阳性率分别为33.3%(31/93)和88.7%(63/71)，差异有统计学意义(χ2=50.508，P<0.05)；VEGF阳性率分别为69.9%(65/93)和46.5%(33/71)，差异有统计学意义(χ2=9.178，P<0.05)。

2.3 nm23H1和VEGF表达的相互关系

nm23H1阳性的94例PTC患者中VEGF阳性35例(37.2%)，nm23H1阴性的70例PTC患者中VEGF阳性63例(90.0%)；nm23H1阳性表达者VEGF阳性表达率显著低于nm23H1阴性表达者(χ2=46.452，P<0.05)。癌组织中nm23H1和VEGF表达呈负相关(r=-0.47)。

3 讨 论

PTC组织大多分化较好，病程较长，但有不少患者癌组织仍具有较高的局部浸润性和区域淋巴结转移率[1]。各种新型超声技术的应用虽然提高了PTC诊断率，但其敏感性仍不够高[2-4]。近年已发现不少与PTC发生、发展、转归相关的肿瘤标志物，其应用价值在临床诊疗中不断得到肯定[5-8]。nm23H1编码的蛋白含有亮氨酸重复序列、α螺旋和碱性结构域，具有典型核苷二磷酸激酶(NDPK-A)活性，能催化多种反应，与癌转移有密切关系，通过参与细胞信号传导、微管蛋白聚合与解体、转录调节以及细胞黏附等复杂的生物学功能，维持细胞正常分裂状态，抑制癌细胞转移。其低表达可引起系列编码产物减少，导致多种信号传导异常，促进肿瘤生长、发展和转移。在胃癌、结直肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中的低表达与浸润转移密切相关，提示预后不良[9-10]。研究表明，nm23H1表达与甲状腺滤泡状癌的发生发展具有相关性[11]，但与PTC恶性发展的相关性尚存争议[12-14]，有作者认为其敏感性高，特异性低，不能单独应用nm23H1 鉴别甲状腺疾病的良恶性[15]。VEGF是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，其结构为链内及链间二硫键交联形成的同型二聚体糖蛋白，与血小板源性生长因子有一定的同源性，可增加微血管通透性，促进血浆纤维蛋白外渗，为血管形成过程中多种细胞迁移提供一个纤维网络，通过与血管内皮上2个特殊受体Flt和Flt/KDR作用，刺激内皮细胞增殖，产生纤维蛋白溶酶原激活物，促进内皮细胞移动，利于肿瘤细胞脱落进入血管，向结缔组织基质扩散，为肿瘤浸润转移创造条件[16-17]。VEGF阳性表达率与PTC发生、发展及淋巴结转移相关[18-20]，中国人较韩国人、日本人等具有更密切的相关性[21]，术后随访过程中血清VEGF高表达提示肿瘤复发[22-23]。

本组研究资料表明，nm23H1在PTC组织中的总体阳性表达率、强阳性表达率和弱阳性表达率均显著低于癌旁甲状腺组织，差异均有统计学意义，表明nm23H1在癌旁甲状腺组织中多呈阳性表达，而在PTC中的表达阳性率较低；VEGF在PTC组织中的总体阳性表达率和强阳性表达率均显著高于癌旁甲状腺组织，差异有统计学意义，而弱阳性表达率差异无统计学意义，表明VEGF在PTC中的表达大多数呈强阳性，在癌旁甲状腺组织中表达大多数为阴性、弱阳性。nm23H1和VEGF在癌组织和癌旁甲状腺组织的不同表达，表明nm23H1基因低表达和VEGF高表达与PTC发生发展具有相关性，有助于甲状腺良恶性病变的鉴别诊断。在有浸润和有淋巴结转移者，nm23H1阳性表达率均显著低于无浸润和无淋巴结转移者，而VEGF阳性表达率均显著高于无浸润和无淋巴结转移者，表明两者在PTC的浸润和转移过程中可能发挥了一定作用。我们还观察到，nm23H1和VEGF在PTC组织中表达呈负相关，与文献[24-25]报道基本一致，提示它们在PTC恶性发展过程中可能具有协同调节作用。联合检测nm23H1和VEGF有助于了解PTC临床病理进程，提高对其生物学特性尤其是浸润能力和转移潜能的判断水平。深入研究nm23H1和VEGF在PTC中的作用机制，对评估患者预后、随访中及时发现复发、指导临床施行再次手术、针对性开展靶向治疗等具有一定临床意义。

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[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：刘彦哲]

Expressions and Significance of nm23H1 and VEGF in Papillary Thyroid Carcinoma

LI Yong-qing1,SHANG Pei-zhong1,REN Ai-ling1,LIU Yong1,GU Hua-ping2,LI Wei2

(1.Department of General Surgery,PLA No.251Hospital,Zhangjiakou,Hebei 075000,China；2.Department of Pathology,PLA No.251Hospital,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the expressions of nm23H1 and VEGF in papillary thyroid carcinoma(PTC)and their clinical significance.Methods The expressions of nm23H1 and VEGF in 164 cases of PTC and 30 cases of para-tumorous tissue were studied by EliVision plus two-step immunohistochemical method.Results The positive rate of nm23H1(57.3%)in PTC was significantly lower than that in para-tumorous tissue(93.3%)(P<0.05).The positive rate of nm23H1 in the patients with tumor invasion and lymphatic metastasis was significantly lower than that without tumor invasion and lymphatic metastasis(P<0.05).The positive rate of VEGF(59.8%)in PTC was significantly higher than that in para-tumorous tissue(13.3%)(P<0.05)．The positive rate of VEGF in the patients with tumor invasion and lymphatic metastasis was significantly higher than that without tumor invasion and lymphatic metastasis(P<0.05).There was a negative correlation between nm23H1 and VEGF expression(r=-0.47).Conclusion Expressions of nm23H1 and VEGF might be correlated with the invasive and metastasic potential in PTC.nm23H1 and VEGF could be considered as prognostic indicators for PTC.

thyroid neoplasm；nm23H1；VEGF；invasion；metastasis

李永庆(1963-)，男，内蒙古锡林浩特人，副主任医师，主要研究方向：普通外科。

尚培中(1964-)，男，河南商丘人，主任医师，主要研究方向：普通外科。

R 736.1

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2016.10.001

来稿日期：2016-08-10