应用自由丝状体培育法筛选坛紫菜良种

褚茂兵，肖徐进，陈高峰，黄景选，郭安托

（苍南县水产研究所，浙江　苍南　325802）

应用自由丝状体培育法筛选坛紫菜良种

褚茂兵，肖徐进，陈高峰，黄景选，郭安托

（苍南县水产研究所，浙江苍南325802）

坛紫菜人工养殖自20世纪70年代初引进浙江省苍南县以来，养殖技术到如今已有了根本性的变革，养殖面积也已大大扩展，但苗种培育方式却一直没有改进。种质异化、退化严重，病害频发，严重制约了苍南县坛紫菜产业经济可持续发展。近年来，我们应用自由丝状体贝壳移植法对坛紫菜良种进行扩种和筛选试验，取得了较好的效果。现总结如下。

1　材料和方法

1.1种菜

A为沿浦本地养殖菜；B为平潭养殖菜；C为南麂野生菜；D为象山养殖菜。挑选成熟度好、健壮无病无烂、不附生杂藻的藻体，要求单株能剪取20 cm2有效叶片。

1.2海水

无工业污染的苍南县近岸海水。比重1.018～1.021，pH值7.9～8.1。海水经沉淀过滤后，在培养用的三角烧瓶中煮沸，冷却后添加适量营养液待用。

1.3培养容器

主要有500、1 000、2 000、3 000和5 000 mL的三角烧瓶。先把瓶子洗净，再加需要量的培养海水作煮沸消毒处理，煮沸后瓶口马上包扎双层滤纸，然后冷却待用。

1.4营养液

在1 000 mL淡水中溶解40 g硝酸钾、40 g硝酸钠、10 g磷酸二氢钾、20 g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、0.8 g氯化钙、2.5 g硫酸亚铁、0.2 g硫酸锰，加热溶化煮沸，冷却后加入VB10.1g、VB120.25 mg。在棕色瓶中存放，一个月重配1次。每1 000 mL培养海水中滴加营养液1 mL，作为标准量。

2　试验过程

2.1种菜的去污处理

上午把挑选的每样种菜各3株洗净，11：00—14：00日晒3 h，日晒温度15～17℃，14：00—16：00进行无菌洗刷。然后，把经此处理后藻体上富含果孢子囊部分的叶片剪取放入果孢子采集瓶中。

2.2果孢子采集

把经除污处理的种菜，加入消毒海水，置于500 mL三角烧瓶里采集果孢子。每天多次摇动瓶子，务必使放散出的孢子不堆集，并在第3或4天以及第7天分两次收集孢子水，收集时要刷干净采集瓶的瓶底和瓶壁，然后计数水中孢子量，以此计算放散量，去掉每样各一瓶放散量最少的。

2.3自由丝状体的培养

2.3.1去污效果检查阶段（附壁培养），1月中旬到2月下旬以每瓶（1 000 mL三角烧瓶）投放果孢子50万～100万的量，进行分瓶培养，A、B、D各为8瓶，C为4瓶。这期间，培养海水中营养盐含量为标准的1/4，水温控制为15～20℃，光强1 000～2 000 lx，光照时间为24 h，每天摇瓶2次。快者4～5 h，慢者7～10 d，可以观察到红色丝状丝出现在瓶底，并逐渐布满瓶底，最后扩展到瓶壁，果孢子投放浓度越高出现时间越早。约20 d左右开始，会逐渐发现有杂藻污染的瓶子，至2月下旬结束此阶段。

2.3.2扩大培养阶段（悬浮培养）2月下旬到4月下旬，附壁培养阶段结束后，去除有污染的瓶子，刷壁收集共得各样自由丝状体湿重（下同）为A 15 g、B 14 g、C 3 g、D 11 g。以每0.5 g（C样）或1 g（A、B、D样）湿重自由丝状体加1 000 mL培养海水为比例进行扩大培养：第1个月每半月加一次标准营养液，第2个月每周加一次标准营养液，水温控制在20℃，光强2 000 lx，光照时间24 h，每天摇瓶3～4次，每次100下，每半月更换培养海水50%。

2.4自由丝状体的贝壳移植及培养

4月下旬，取4样自由丝状体各50 g，用切碎机切碎，装入喷壶，加入育苗海水，充分搅匀后，均匀喷洒到池底的贝壳上。喷洒后盖光48 h，再弱光培育7 d时间，防止藻段浮起。移植后约半个月时间可见苗，至7月上旬其生长发育程度已与传统于2—3月采果孢子的贝壳丝状体同步。8月上旬开始缩光培育（与大众同样），培育条件也相同。如此同传统育苗法相比，可节省2个月（30%）贝壳管理时间，洗壳总次数也减少了30%。

2.5秋季采苗（采壳孢子）和海上养成

9月中旬（比海区大众统一采苗时间迟一天）下午，取已完全成熟的贝壳丝状体下海刺激，刺激时间为当日傍晚16：30至次日4：30。刺激完后，每样贝壳各放一桶，分别加清洁海水50 L，并取贝壳（与试验组同样量）于一桶作对照，观察发现7：00开始有壳孢子放散，9：00进入放散高峰期，尤以A、B为显著，对照组水色无变化。10：30镜检孢子放散量，10×10倍下每视野孢子数：A为110，B为107，C为83，D为103，对照组为26。用染布法采壳孢子，每样各采3行60张网帘（3 m×4 m），晾1小时挂入海区筏架。于10月上旬分苗完毕，每样各一行分别养在高、中、低潮区。按照普通的方法进行养殖管理及收割。

3　试验结果

3.1第一年试验结果

3次收割各试验组（另取各试验组所在同排同时收割中产量较好的传统养殖紫菜一行作对照组）总产量见表1。如此计算得：A增产（总产，下同）12.1%，B增产10.9%，C增产4.9%，D增产2.0%。通过第一年的自由丝状体培育技术研究及应用于生产，初步选定由沿浦海区（A）和平潭海区（B）挑选的种菜具有养殖优势，次年将在这两个品种的试验筏架上挑选出个体健壮的菜种进行重复扩大验证试验，并着重探索降低育苗成本的技术方法。

3.2第二年进一步筛选结果

次年1月中旬，在各试验筏架上分别选取优良种菜各3株，进行果孢子采集和自由丝状体扩大培育。4月下旬进行自由丝状体贝壳移植，A、B各12 000只。并在3月上旬，用从A、B筏架上选取的种菜各10 kg进行传统育苗法采苗（春季采苗，下称A（传统）、B（传统），各采40×667 m2（4万只贝壳）。9月中旬统一下海刺激，采壳孢子。观察壳孢子放散量（每千只贝壳加海水10 L，10×10倍下每视野孢子数）：A为116，B为122，A（传统）为24，B（传统）为27，对照组为21。采得网帘：A、B各6行，A（传统），B（传统）各10行。

计算结果，A：新育苗法可增产12.5%，传统育苗法可增产5.6%；B：新育苗法可增产11.7%，传统育苗法可增产4.8%。从A及B的试验数据中可见：同样种菜来源，采用新育苗法，其增产效果更加明显。

表1　收获情况表

4　小结

据有关研究报告和笔者这几年的试验生产结果表明，通过自由丝状体进行紫菜生产和通过传统贝壳丝状体进行紫菜生产相比，其效果是相同的，甚至更好。而自由丝状体法是通过单株采苗、纯种培育，这样就能很容易鉴别出品种的性状是否优良，从而使选种育种工作更容易取得进展。

坛紫菜果孢子萌发温度范围为7～26℃，在这一范围内，温度在低限时萌发速度虽然比较慢，但萌发率比较高，病死率较低；而温度倾向高限时，则萌发快，萌发率在短期内也比较高，但病死率增加。因此具备控温控光条件的，为大规模生产性育苗着想，可以在11—12月份就进行果孢子采集，也可以把经过养成证明为良种的自由丝状体通过试验室常规条件培育，连续为下年育苗用，这也是本育种法的优势之一。另外海水比重在1.020～1.025，pH值在8.0～8.2之间最好。

采用同样的种菜，用该育苗方法能比传统育苗法有较大程度增加产量的结果，再加上其种菜需求量极少，育苗时间短，管理成本也可降低30%左右。因此，该法具有较大的推广应用价值。

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.11.016

（2015-09-14）