VKORC1与CYP2C9基因多态性对新疆维吾尔族患者华法林日稳定剂量的影响

努尔子亚·曼那洪 帖提古丽·阿卜杜力 范芳芳 赵生俊 聂继红

1.新疆医科大学研究生学院，新疆乌鲁木齐830000；2.新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆乌鲁木齐830000

VKORC1与CYP2C9基因多态性对新疆维吾尔族患者华法林日稳定剂量的影响

努尔子亚·曼那洪1帖提古丽·阿卜杜力1范芳芳2赵生俊2聂继红2

1.新疆医科大学研究生学院，新疆乌鲁木齐830000；2.新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆乌鲁木齐830000

目的探讨维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1（VKORC1）、细胞色素P450 2C9（CYP2C9）基因多态性对新疆维吾尔族患者华法林日稳定剂量的影响。方法选取2014年7月～2016年1月新疆医科大学附属中医医院服用华法林抗凝的120例新疆维吾尔族患者，国际标准化比值（INR）值在2.0～3.0；采用多聚酶链反应（PCR）直接测序法对患者进行VKORC1、CYP2C9基因多态性检测；研究VKORC1、CYP2C9基因多态性、人口学特征、合并疾病及合并用药情况对华法林日稳定剂量的影响。结果年龄与华法林稳定剂量呈负相关（r＜0，P＜0.05），身高、吸烟、高血压与华法林日稳定剂量呈正相关（r＞0，P＜0.05）。CYP2C9*3、VKORC1基因多态性对华法林稳定剂量的影响有统计学意义［（r＜0，P＜0.05）、（r＞0，P＜0.05）］。CYP2C9*3、VKORC1-1639A＞G，VKORC1-1173T＞C分别可解释5.6%、25.1%、25.6%的个体间华法林稳定剂量的差异，而年龄、身高、吸烟、高血压等非遗传因素对个体间华法林稳定剂量差异的贡献分别为9%、4.5%、1.5%、3.2%。结论CYP2C9与VKORC1基因多态性是影响新疆维吾尔族患者华法林稳定剂量的主要因素。

华法林；VKORC1；CYP2C9；基因多态性

华法林是香豆素类口服抗凝药物，临床上被广泛应用于人工瓣膜置换术后、深静脉血栓、肺栓塞、心房颤动、左心室血栓等血栓栓塞性疾病的治疗［1］。华法林治疗窗窄，用量上个体与民族间存在明显差异［2］，在不同个体间的日稳定剂量有1～20 mg/d不等［3-4］。近年的研究发现，细胞色素CYP2C9（CYP2C9）及维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1（VKORC1）基因多态性是影响华法林剂量的主要遗传因素［5］。目前CYP2C9及VKORC1基因多态性对新疆维吾尔族患者华法林稳定剂量影响的研究较少，因此本研究以新疆维吾尔族患者为研究对象，研究VKORC1、CYP2C9基因多态性、人口学特征、合并疾病及合并用药对华法林日稳定剂量的影响，为新疆维吾尔族患者华法林的个体化给药提供依据。

1 象与方法

1.1 研究对象

2014年7月～2016年1月在新疆维吾尔自治区中医院住；或门诊就诊的正在服用华法林抗凝的维吾尔族患者120例，抗凝指征包括人工瓣膜置换术后、心房颤动、深静脉血栓、肺栓塞、左心室血栓。本研究方案已通过新疆医科大学附属中医院伦理委员会批准。

纳入标准：①年龄＞18岁；②坚持服用华法林片治疗至少2个月以上；③国际标准化比值（INR）稳定达标（定义：至少连续2次，每次间隔1周以上，INR值均在2.0～3.0）；④患者自愿参加，签署知情同意书。

排除标准：①孕妇；②有严重性肝功能异常［肝功能分级（CTP）评分C级者］；肾功能异常者（内生肌酐清除率≤50mL/min）；③有出血倾向者［凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶时间（APTT）过度延长者］，凝血机制障碍者；④个体间有血缘关系。

1.2 方法

1.2.1 基因检测临床获取患者抗凝外周血3mL，使用QIAamp全血基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA。采用Sanger直接测序法进行基因分型。基因检测位咖包括VKORC1基因的-1639A＞G（rs9923231）及1173T＞C（rs9934438）位咖、CYP2C9基因的CYP2C9*2（rsl79 9853）及CYP2C9*3（rsl057910）位咖。VKORC1、CYP2C9基因多态性位咖相关引物序列见表1。

1.2.2 数据收集采用Epidata 3.2软件和CRF（病例报告表）收集数据，主要包括：人口学特征：性别、年龄、身高、体重等；华法林日稳定剂量；个人史：主要包括吸烟（既往有连续或累计吸烟6个月及以上，并且在纳入本研究时每天至少吸1支卷烟者）、饮酒史（长期大量饮酒，即摄入纯酒精125 mL/d，或白酒＜150 g/d，或啤酒＜＞4瓶/d，持续6～10年）；合并用药情况（β受体阻滞剂，他汀类，地高辛，阿司匹林等）；合并疾病（高血压、冠心病、脑梗死等）；基因多态性检测结果。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 17.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。非正态分布的计量资料用中位数（M）及四分位数（P25，P75）表示，采用非参数检验。计数资料以率表示，采用X2检验。分析患者非遗传因素（年龄、身高、体重、吸烟史、饮酒史、合并疾病、合并用药等）及CYP2C9、VKORC1基因型与华法林日稳定剂量的相关性，采用线性回归的方法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 各个检测位点的引物

2 果

2.1 纳入患者临床基线特征

患者一般临床信息及华法林日均稳定剂量具体见表2。

2.2 基因检测结果

CYP2C9及VKORC1的各位咖等位基因及基因型频率分布情况见表3。结果显示，在本研究患者中位咖CYP2C9*2的变异较少，仅有3.7%的患者携带突变基因。CYP2C9*3位咖的变异也较少，仅有6.7%的患者携带突变基因。VKORC1-1639AA、AG、GG基因型的患者分别占44.2%、41.7%、14.2%。基因检测结果中新疆维吾尔族患者基因分布基本符合Hardyweinberg遗传平衡定律（P＞0.05），因此本研究人群具有群体代表性。

2.3 CYP2C9及VKORC1基因型患者华法林稳定剂量的差异

不同CYP2C9及VKORC1基因型患者的华法林稳定剂量的差异见表4，本研究中CYP2C9*2基因型患者的华法林稳定剂量差异无统计学意义（P＞0.05）。不同CYP2C9*3、VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C基因型患者的华法林稳定剂量差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 患者基线特征（n=120）

表3 CYP2C9及VKORC1的等位基因及基因型分布

VKORC1-1639GG基因型患者的日均稳定剂量是AA基因型患者的1.7倍［（4.47±1.69）比（2.52±0.88）mg］，VKORC1-1639AG基因型患者的日均稳定剂量是AA基因型患者的1.3倍［（g3.35±1.15）比（2.52±0.88）mg］。VKORC1-1173TC基因型患者的日均稳定剂量是TT基因型患者的1.3倍［（3.40±1.15）比（2.48±0.84）mg］，VKORC1-1173CC基因型患者的日均稳定剂量是TT基因型患者的1.8倍［（4.48±1.79）比（2.48±0.84）mg］。

表4 不同CYP2C9及VKORC1基因型患者华法林稳定剂量

2.4 影响华法林稳定剂量的因素分析

2.4.1 非遗传因素对华法林稳定剂量的影响考虑单因素而排除其他因素的影响时，非遗传因素中年龄与华法林稳定剂量呈负相关（r＜0，P＜0.05），身高、吸烟、高血压与华法林日稳定剂量呈正相关（r＞0，P＜0.05）。年龄、身高、吸烟、高血压分别可解释9%、4.5%、1.5%、3.2%的个体间华法林稳定剂量差异。见表5。

2.4.2 CYP2C9、VKORC1对华法林稳定剂量的影响CYP2C9*2基因多态性与华法林稳定剂量无相关性（r＜0，P＞0.05），而CYP2C9*3呈负相关（r＜0，P＜0.05）。VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C呈正相关（r＞0，P＜0.05）。CYP2C9*3可解释5.6%个体间华法林稳定剂量的差异。VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C分别可解释25.1%、25.6%的个体间华法林稳定剂量的差异。见表5。

3 论

本研究结果显示，CYP2C9*2的基因变异较少见，与Xiong等［6］研究中的CYP2C9*2基因分布情况一致。有6.7%的患者携带至少一个CYP2C9*3变异基因，这一结论与中国汉族人群CYP2C9*3基因分布相近［7］，低于高加索人，但高于东亚的日本、韩国人［8-10］。VKORC1-1639A＞G的基因分布与张艳等［11］在新疆维吾尔族人群中的基因分布频率基本相近，但不同于汉族人群、欧美人群的基因分布［7］。此外，不同VKORC1-1639A＞G基因型患者的华法林稳定剂量差异也有统计学意义（P＜0.05）。这一结果与既往的研究已证实的VKORC1-1639AA基因型在各民族间的分布不一致可解释民族之间华法林剂量的差异相符［8］。

分析影响华法林日稳定剂量的因素线性回归结果显示，本研究非遗传因素中年龄、吸烟对华法林日稳定剂量的影响也有统计学意义（P＜0.05）。年龄与稳定剂量的相关性与已有的研究报道［5，12-14］一致，患者华法林剂量随着年龄的增加而降低。CYP2C9*3与VKORC1-1639A＞G、-1173T＞C变异基因型对华法林稳定剂量的影响是相反的，即携带CYP2C9*3突变基因的患者所需的华法林稳定剂量比"生型低，而携带VKORC-1639A＞G、-1173T＞C变异基因的患者所需的华法林稳定剂量比"生型增加。CYP2C9*2基因多态性对本研究纳入的维吾尔族患者华法林稳定剂量没有影响，考虑本研究维吾尔族患者中同中国汉族人群一样CYP2C9*2基因变异率极低有关系。本研究发现CYP2C9*3基因多态性对华法林剂量个体差异的贡献是5.6%高于Lee等［15］研究结果、低于Gen［16］研究结果，CYP2C9*3、VKORC1两种基因多态性对新疆维吾尔族患者华法林剂量个体差异的贡献比例大于非遗传因素，与既往国内外研究报道的结果一致［17-20］。

表5 影响华法林稳定剂量因素分析

综上所述，CYP2C9与VKORC1基因多态性是影响新疆维吾尔族患者华法林稳定剂量的主要遗传因素。

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Im pact of VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism s on W arfarin m aintenance dose variation in Xinjiang Uyghur population

Nuerziya·Mannahong1Patigul·Abdulla1FAN Fangfang2ZHAO Shengjun2NIE Jihong2
1.Postgraduate School of Xinjiang Medical University，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，China；
2.Department of Pharmacy，Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to College of Xinjiang Medical University，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，China

Objective To explore the effect of vitamin K epoxide reductase complex1（VKORC1），cytochrome P450 2C9（CYP2C9）gene polymorphism on Warfarin maintenance dose in Xinjiang Uyghur patients.M ethods 120 patients who took Warfarin to anticoagulation recruited in Traditional Chinese Medical Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University from July 2014 to Jan 2016 were selected，all patients required international normalized ratio（INR）was range from 2.0 to 3.0；Using PCR direct sequencing method detected VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism；analyzed the effect of VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism，demographic characteristics，accompanied diseases and concomitant medications on Warfarin maintenance dose.Resu lts There was negative correlation between age and Warfarin maintenance dose（r＜0，P＜0.05），height，smoking，hypertension had positive correlation with Warfarinmaintenance dose（r＞0，P＜0.05）.CYP2C9*3，VKORC1 gene polymorphisms had statistical significance in interindividual variation on Warfarinmaintenance dose［（r＜0，P＜0.05），（r＞0，P＜0.05）］.CYP2C9*3，VKORC1-1639A＞G，VKORC1-1173T＞C genetic factors and age，height，smoking，hypertension non-genetic factors respectively contributed to 5.6%，25.1%，

Warfarin；VKORC1；CYP2C9；Gene polymorphism

R968

A

1673-7210（2016）05（c）-0017-05

2016-02-18本文编辑：苏畅）

新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目（2014211C102）。

努尔子亚·曼那洪（1988.2-），女，新疆医科大学2013级药学专业在读硕士研究生；研究方向：临床药学。

聂继红（1962.10-），女，教授，硕士生研究导师，新疆医科大学附属中医医院药学部主任；研究方向：药事管理和中药新药研发。

25.6 %and 9%，4.5%，1.5%，3.2%individual variation on Warfarin maintenance dose.Conclusion CYP2C9 and VKORC1 gene polymorphisms are the main factors for the effecting Warfarin maintain dose in Xinjiang Uyghur population.