APP下载

牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠体内的代谢和排泄研究

2016-11-19袁媛张建奎姜泓刘丽康廷国

云南中医中药杂志 2016年4期

袁媛 张建奎 姜泓 刘丽 康廷国

摘要:目的对牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠体内的代谢和排泄物进行了研究,获得药物在大鼠体内的代谢和排泄情况。方法建立一种高效液相色谱方法,同时测定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量。结果尿液排泄为牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途径。结论该方法准确、可靠。

关键词:牛蒡子;代谢;排泄

中图分类号:R2855文献标志码:A文章编号:1007-2349(201.6)04-0057-04

牛蒡子为常用中药。《中华人民共和国药典》201.5年版收载为菊科植物牛蒡(Arctium lappa L)的干燥成熟果实[1]。从该药材中提取得到的化学物质主要有木脂素类成分、萜类成分和挥发油类成分等[2-4]。查阅相关文献,尚未发现对其代谢和排泄的相关研究,本文建立了一种高效液相色谱方法,同时测定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量[5-6]。

1仪器与试药[HTSS][HJ24mm]

1.1仪器Agilent 1.100高效液相色谱仪;DZTW调温电热套;XS105电子天平;XW-80A微型旋涡混合仪;Anke-1.8C-C高速台式离心机。

1.2试药所用试剂均为分析纯和色谱纯。牛蒡苷购自中国药品生物制品检定所,批号为81.9-9401;牛蒡苷元购自上海融禾医药科技有限公司,批号为070928;牛蒡子药材购于辽宁省中医药研究院药局,经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为菊科植物牛蒡Arctium lappa L的干燥成熟果实;健康昆明种大鼠,体重400 g,由沈阳医学院动物实验中心提供,合格证号:XCXK(辽)-2003-001.6

2实验方法

2.1色谱条件色谱柱:Hypersil ODS柱(46 mm×200 mm,5μm);流动相:甲醇∶[KG-2]05%磷酸水(48∶[KG-2]52);流速:08 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:28℃;进样量:20μl

2.2灌胃样品制备称取牛蒡子药材78 g,第1次加入10倍量的水回流提取1 h,第2次加入8倍量的水回流提取1 h,2次滤液合并,浓缩成0624 g/mL的药液(按牛蒡子药材量计算),于4℃冰箱保存备用。

2.3给药方案与样品采集健康昆明种大鼠6只,给药前禁食1.6小时,自由饮水,灌胃给予牛蒡子水提物,剂量为临床等效剂量的1.6倍,分别于3、6、24 h取大鼠的尿液,于3、24 h取大鼠的粪便。

2.4代谢和排泄样品的预处理取尿液,粪便液(用生理盐水研磨)以1.3900 r/min高速离心10 min,取上清液100 μL,加入高氯酸80 μL,充分涡旋混合3 min,再以1.3900 r/min高速离心10 min,取上清液,再一次以1.3900 r/min转速离心10 min,取上清液50 μL,注入高效液相色谱仪分析,记录色谱图。

2.5对照品溶液制备精密称取减压干燥至恒重的牛蒡苷对照品1.65 mg,置于5 mL容量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解,加甲醇至刻度制成浓度为033 mg/mL的牛蒡苷标准溶液贮备液。

精密称取减压干燥至恒重的牛蒡苷元对照品1.44mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解,加甲醇至刻度制成浓度为01.44 mg/mL的牛蒡苷元标准溶液贮备液。

2.6分析方法确证

2.6.1方法的专属性取大鼠空白尿、粪便匀浆液,按“组织样品的预处理”项下的方法操作,获得空白尿、粪便匀浆液样品色谱图1(A)、(B);将一定浓度的牛蒡苷及牛蒡苷元对照品溶液加入到空白尿、分辨匀浆液中,依同法操作,得色谱图2(A)、(B);同法操作得到大鼠给药后的尿、粪便匀浆液样品色谱图3(A)、(B)。结果表明,空白血清中的内源性物质和代谢物不干扰牛蒡苷和牛蒡苷元的测定。

2.6.2标准曲线取空白大鼠尿、粪便匀浆上层液,分别加入适量牛蒡苷和牛蒡苷元标准溶液,使得空白大鼠尿匀浆液中牛蒡苷和牛蒡苷元的浓度分别为0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047 mg/mL;空白大鼠粪便匀浆液中牛蒡苷和牛蒡苷元的浓度分别为0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047mg/ml;按“代谢和排泄样品的预处理”项下依法操作,分别以测定牛蒡苷和牛蒡苷元对浓度作线性回归,制作牛蒡苷和牛蒡苷元尿、粪便匀浆的标准曲线。

2.6.3方法的精密度取空白大鼠尿、粪便匀浆上层液80 μL,向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品标准贮备液,制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度(牛蒡苷的浓度为1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的浓度为1.2.78、1.983、2286 μg/mL);制成粪便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度(牛蒡苷的浓度为1.953、3492、4853 μg/mL和牛蒡苷元的浓度为1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL)的质量控制(QC)样品分析,每一浓度进行5样本分析,计算QC样品的测得浓度与配制浓度对照,求得组织样品测定方法的精密度,结果均符合规定。

2.6.4提取回收率取空白大鼠尿、粪便匀浆上层液80 μL,向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品标准贮备液,制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度(牛蒡苷的浓度为1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的浓度为1.2.78、1.983、2286 μg/mL);制成粪便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度(牛蒡苷的浓度为1.953、3492、4853μg/ml和牛蒡苷元的浓度为1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL)的质量控制(QC)样品分析,每一浓度进行5样本分析,进样50μl,通过测得的峰面积与相同浓度的标准溶液的峰面积比值计算提取回收率。经测定,牛蒡苷在尿中低、中、高3个浓度的提取回收率分别为103.2、905、859%;牛蒡苷元在尿组织中低、中、高3个浓度的提取回收率分别为102.4%、881%、82.5%。同法制得牛蒡苷在粪便中低、中、高3个浓度的回收率分别为1092、1083、980%;牛蒡苷元在粪便中低、中、高3个浓度的回收率分别为1092、1010、974%。

2.6.5样品稳定性取空白大鼠尿、粪便匀浆上层液80 μL,向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品标准贮备液,制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度牛蒡苷的浓度为1.95、22.7、262 μg/mL和牛蒡苷元的浓度为1.28、1.98、229 μg/mL);制成粪便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3个浓度(牛蒡苷的浓度为1.95、349、485 μg/mL和牛蒡苷元的浓度为1.28、1.91、21.2 μg/mL)的质量控制(QC)样品分析,每一浓度进行5样本分析,进样50 μL,样品经处理后室温下1h是稳定的,在-20℃冰箱中1.2 h是稳定的,其RE%分别为3.2、93、1.41和2.4、1.1.6、1.37%与84、3.3、20%和84、10、2.6%。

3结果

大鼠灌胃给予牛蒡子水提物后,不同时间点尿和粪便中牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱图分别见图4、图5;含量图6、图7

4讨论

通过对尿和粪便的研究表明,牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠体内24 h基本可以代谢完全。尿液排泄为牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途径。经给药尿液与空白尿液图谱比较,给药粪便液与空白粪便液比较,发现牛蒡子水提物灌胃给予大鼠服用后在尿液中会生成多种其它成分,在粪便液中也会产生几种其它成分,需进一步用液质色谱仪进行确定。

参考文献:

[1]国家药典委员会中华人民共和国药典[M]一部北京,中国医药科技出版社,2010:66

[2]蔡恩博,郭雪,赵岩,等牛蒡子化学成分研究进展[J]人参研究,201.5,(1):45-48

[3]曾晓燕,戴岳,夏玉凤牛蒡子的研究进展[J]中国野生植物资源,201.4,33(2):6-9

[4]齐艳明,柏玲,张文治牛蒡子化学成分研究[J]齐齐哈尔大学学报:自然科学版,201.2,28(2):1.9-21

[5]牛蒡子苷在小鼠体内的分布状态及药代动力学研究时珍国医国药,2006,1.7(5):698-699

[6]郑一敏,胥秀英,傅善权,等牛蒡子总木脂素代谢化学及其动态研究中国中药杂志,2005,30(1.6):1.287-1.288