西番莲提取物对三七炭疽病菌和黑斑病菌的抑制作用

岑春艺 黄正学 李善登 等

摘要： 研究西番莲（Passiflora coerulea L.）提取物对三七[Panax notoginseng （Burk.）F.H. Chen]黑斑病（Alternaria panax Whetz）、炭疽病（Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）菌的抑菌活性，为三七病害生物防治提供参考。采用病原菌生长速率法测定不同浓度新鲜西番莲叶、茎、果提取物对三七黑斑病、炭疽病菌的抑制效果。结果表明，西番莲水和乙醇提取物对供试菌有良好的抑制活性，抑菌活性与浓度呈正相关，对黑斑病抑制作用最明显的是1 g/mL西番莲叶的乙醇提取液，抑制率达40%；对炭疽病菌抑制作用最明显的是0.5 g/mL西番莲叶的水提取液，抑制率达61%。

关键词：西番莲（Passiflora coerulea L.）；提取物；黑斑病（Alternaria panax Whetz）；炭疽病（Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）；抑菌活性

中图分类号：S432.4+4 文献标识码：A 文章编号： 0439-8114（2016）04-0912-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.04.024

The Antibacterial Activity of Passiflora coerulea Extracts on Alternaria panax and

Colletotrichum panacicola of Panax notoginseng

CEN Chun-yi1，HUANG Zheng-xue2，LI Shan-deng2，WEI Ji-guang1，LI Liang-bo1，HUANG Rong-shao1

（1.College of Agriculture，Guangxi University，Nanning 530005，China； 2.Debao County Bureau of Agriculture，Baise 533700，Guangxi，China）

Abstract： In order to provide references for Panax notoginseng pathogen biological control，the antimicrobial activities of passion fruit extracts on Alternaria panax Whetz and Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto were rearched. The antibacterial activity of extracts with different concentrations of fresh leaves， stems and fruits to A. panax Whetz and C. panacicola were measured respectively by mycelia growth rate method. The results showed that the water extraction and the ethanol extraction of passion fruit could inhibit A. panax and C. panacicola propagation. The higher concentration had the stronger antimicrobial activities. The ethanol extraction of the passion fruit leaf had the better inhibitory effect to A. panax by the concentration of 1 g/mL. The water extraction of the passion fruit leaf had the better inhibitory effect to C. panacicola by the concentration of 0.5 g/mL.

Key words： Passiflora coerulea L.； extracts； Alternaria panax Whetz； Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto； antibacterial activity

三七[Panax notoginseng （Burk.）F.H. Chen]为五加科人参属植物，别名参三七、田七、三七人参、金不换、盘龙七等，具有散淤止血、消肿定痛的功效[1]，现代药理学作用主要体现在对血液系统、心血管系统、脑血管系统、神经系统、代谢、免疫调节的影响等[2]。国内外市场年需量8 000 t以上。三七喜冬暖夏凉、半阴和潮湿的生态环境，不耐严寒与酷热，因生长环境的特殊性，适宜的种植区域狭窄，加上驯化栽培历史较长，故易染多种病害。三七黑斑病（Altemaria panax Whetz）和炭疽病（Colletotrichum panacicola Vyedaet Takimoto）是广西产区普遍发生、危害严重的两种病害，其中三七黑斑病发病率20%～35%，严重时达90%以上[3]。三七炭疽病在温暖湿润季节发病严重[4]。目前，关于三七病害病原菌的生物学特性、发生规律、与环境因子的关系、化学防治等方面的研究较多[5-9]，但生物防治相关的报道较少。杀菌剂是目前常用的化防药剂，在防治三七病害方面有一定效果，但增加农药使用次数和浓度，易使病害产生耐药性，最终导致三七药材农药残留严重。因此寻求安全有效的防治方法是目前三七生产中急需解决的重要问题。在生产调查中发现，以西番莲（Passiflora coerulea L.）作为遮阴材料，三七生长健壮，炭疽病、黑斑病等叶部病害较少发生。为此，本试验以西番莲植株鲜体为原料，探讨西番莲有效成分对三七黑斑病和炭疽病的抑制作用，为三七病害生物防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

主要仪器有KQ-250DE型数显超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）、Laborota 4 000型旋转蒸发仪（德国Heidolph仪器公司）、循环水式真空泵RE-52A型（巩义市予华仪器公司）、BS110S型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）、2F-1f型台式三用紫外线分析仪（上海光豪分析仪器有限公司）、LDZX-50FBS立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）、DH27-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、LRH-400-G光照培养箱（韶关市泰宏医疗器械有限公司）。

试剂有无水乙醇（AR，成都市科龙化工试剂厂）、马铃薯葡萄糖琼脂PDA（广东环凯微生物科技有限公司）、灭菌水。

供试原料有西番莲茎、叶片、果实，于2013年5月采自广西百色市靖西县武平乡。

供试菌种有三七黑斑病病原菌人参链格孢、炭疽病原菌，由广西大学农学院植物病理实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 西番莲提取物制备 取无病、无虫害西番莲植株和未成熟果实，用清水洗净。鲜茎剪成4～5 cm长小段，鲜叶和果实剪成长2～3 cm、宽1 cm碎片，分别用8倍量水、乙醇室温浸提1 h后超声0.5 h（超声功率为1 000 W，温度40 ℃），然后用绸布与滤纸分别过滤一次，得到滤液；滤渣再分别用6倍量与4倍量水、乙醇重复以上提取步骤各一次，分别得到滤液，合并3次滤液；减压浓缩，干燥，使用紫外线杀菌后，用无菌水定容至浓度为5 g/mL西番莲水、乙醇提取物供试样。

1.2.2 西番莲提取物抑菌试验 分别取西番莲水、乙醇提取物供试样20、10、5 mL，倒入尚未凝结的80、90、95 mL已灭菌的PDA培养基中，混匀，制得含不同浓度提取物的PDA培养基（供试样浓度分别为1.00、0.50、0.25 g/mL）。将配好的PDA培养基倒入直径为9 cm的培养皿中，每个培养皿15 mL，待培养基冷却后，用直径0.5 cm的打孔器（高温灭菌）在预先培养的病原菌菌落边缘打取菌饼，用接种针将菌饼转接到培养皿的中央，每培养皿接种一块。以未加任何试剂的PDA培养基为空白对照。将接种后的培养皿置于生化培养箱中28 ℃培养，至第5天时取出，用十字交叉法测量菌落直径，结果取3次重复试验的平均值，得到不同浓度提取物对供试菌的抑菌效果。

1.3 统计学处理

用Williamson提出的敏感指数RI作为衡量指标，RI={当T≥C时，1-C/T；当T0时表示促进作用；RI<0时为抑制作用；RI=0时表示没有作用。RI绝对值代表作用强度的大小。用SPSS17.0软件进行显著性分析。

2 结果与分析

2.1 西番莲水提取液对三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用

由表1可以看出，西番莲的水提液对三七黑斑病菌、炭疽病菌均有抑制作用，抑制作用随提取液浓度增高而增强。根据RI值，西番莲叶和茎的水提液对炭疽病菌的抑制作用大于对黑斑病菌的抑制作用，但果的水提液对黑斑病菌抑制作用大于对炭疽病菌。叶的水提取液对炭疽病菌抑制作用最明显，在3个浓度下的抑制率均达到了50%以上，但对黑斑病菌作用不明显，在0.5 g/mL和0.25 g/mL浓度下均没有作用。果的水提液在0.5 g/mL和1 g/mL浓度下对黑斑病菌抑制作用均达到20%以上，但对炭疽病菌没有抑制作用。1 g/mL西番莲水提液对三七黑斑病抑制作用由强到弱依次为茎、果、叶，0.5 g/mL和0.25 g/mL浓度下抑制作用由强到弱依次为果、茎、叶；3个浓度下对三七炭疽病抑制由强到弱的顺序均为叶、茎、果。

由顯著性分析可知，西番莲茎、果水提液对三七黑斑病菌在1 g/mL和0.5 g/mL浓度时抑制作用与对照相比差异极显著，0.25 g/mL浓度时与对照差异不显著，说明西番莲茎和果的水提液在高浓度时对三七黑斑病菌抑制作用明显，低浓度时作用不明显；叶的水提液在供试的3个浓度下差异均不显著，说明叶的水提液对三七黑斑病菌没有抑制作用。西番莲茎、叶水提液对三七炭疽病菌的抑制作用在供试的3个浓度下与对照相比差异极显著，说明西番莲茎、叶的水提液对三七炭疽病菌有明显的抑制作用。叶的0.25、0.5、1 g/mL水提取液对炭疽病菌抑制率分别为57%、61%、59%，且3个浓度之间差异不显著，推测西番莲叶的水提液在比0.25 g/mL更低的浓度下即对三七炭疽病菌有极强的抑制作用。西番莲果实的水提液与对照相比差异不显著，说明果的水提液对三七炭疽病没有抑制作用。

2.2 西番莲乙醇提取液对三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用

由表2可以看出，西番莲乙醇提取液对三七黑斑病菌、炭疽病菌有抑制作用，抑制作用随浓度的增高而增强。相同浓度下，叶的乙醇提取液对两种病原菌的抑制作用最明显。在相同提取物相同浓度下，西番莲乙醇提取液对炭疽病菌的抑制作用大于对黑斑病菌的抑制作用，其中叶的提取液对炭疽病菌抑制率在1 g/mL和0.5 g/mL浓度下均达到50%以上。果的乙醇提取液对两种病原菌的抑制作用均不明显，敏感指数均在-7%至7%范围，出现了正值，可根据差异性结果，与对照相比，分析是否具有明显促进效果。在相同浓度下，西番莲乙醇提液对两种病原菌的抑制作用由强到弱依次为叶、茎、果。

由显著性分析可知，西番莲叶和茎的乙醇提取液在供试的3个浓度下对三七黑斑病菌、炭疽病菌的抑制作用与对照相比差异极显著，说明西番莲叶和茎的乙醇提取液对这两种病原菌都具有明显的抑制效果。叶的乙醇提取液对炭疽病菌3个浓度之间差异不显著，与对照相比差异极显著，说明西番莲叶的乙醇提取液在浓度达到0.25 g/mL时，即对三七炭疽病菌有极强抑制作用，浓度从0.25 g/mL增加到1 g/mL，抑制率增强不明显。果的乙醇提取液对两种病原菌的抑制作用与对照相比差异不显著，说明西番莲果的乙醇提取液对三七黑斑病菌和炭疽病菌无抑制作用。

3 小结与讨论

本试验结果表明，西番莲叶、茎、果的水提液和乙醇提液均对三七黑斑病菌、炭疽病菌有不同程度的抑制作用，其中对黑斑病菌抑制作用最明显的是1 g/mL的西番莲叶的乙醇提取液，对炭疽病菌抑制作用最明显的是0.5 g/mL的西番莲叶的水提取液。利用生物多样性持续控制农作物病害是近年来国内外研究热点，并取得了一些成效[10，11]。

三七属阴生植物，大田种植时需搭建遮阴棚，西番莲属阳生藤本常绿攀援植物，大田种植时也需搭建棚架。本试验表明，西番莲植株的提取物对三七黑斑病菌、炭疽病菌具有一定的抑制作用，研究结果为创建三七生态种植新模式、减少三七药材农药残留、提高三七药材质量提供新思路。

参考文献：

[1] 杨志刚，陈阿琴，俞颂东.三七药理研究新进展[J].上海中医药杂志，2005，39（4）：59-62.

[2] 冯陆冰，潘西芬，孙泽玲.三七的药理作用研究进展[J].中国药师，2008，11（10）：1185-1187.

[3] 王 勇，刘云芝，陈昱君，等.三七黑斑病的研究[J].人参研究，2005（3）：42-45.

[4] 韦继光，陈育新，吴景华.三七炭疽病的病原及其生物学特性的研究[J].广西农学院学报，1989，8（1）：25-33.

[5] 陈昱君，王 勇，刘芸芝，等.三七黑斑病发生规律调查研究[J].中国中药杂志，2005，30（7）：557-558.

[6] 蔣 妮，覃柳燕，叶云峰.三七病害研究进展[J].南方农业学报，2011，42（9）：1070-1074.

[7] 王 勇，范 昌，陈昱君，等.三七的主要病害及防治现状[J].人参研究，2003，15：143-45.

[8] 陈昱君，王 勇，冯光泉，等.三七黑斑病病原生物学特性研究[J].植物病理学报，2005，35（3）：267-269.

[9] 陈昱君，王 勇，冯光泉，等.三七黑斑病发生与生态因子关系调查初报[J].云南农业科技，2003（1）：33-34.

[10] 朱有勇.生物多样性持续控制作物病害理论与技术[M].昆明：云南科技出版社，2004.

[11] 胡 新，许艳丽，李春杰.利用作物多样性控制病害研究进展[J].农业系统科学与综合研究，2011（1）：118-122.