肉苁蓉急性毒性和90 d喂养实验毒性研究

白国辉， 张晓丽， 曲 琳， 樊树理， 王文瑞

(1.包头医学院2013级硕士研究生，内蒙古包头 014060；2.内蒙古疾病预防控制中心)



肉苁蓉急性毒性和90 d喂养实验毒性研究

白国辉1， 张晓丽1， 曲 琳2， 樊树理2， 王文瑞2

(1.包头医学院2013级硕士研究生，内蒙古包头 014060；2.内蒙古疾病预防控制中心)

目的：观察肉苁蓉急性毒性和较长时间饲喂大鼠的亚慢性毒性反应。方法：利用拌饲法90 d喂养，观察动物进食量和食物利用率、血液、生化、脏器系数和组织病理学指标的结果，和急性毒性MTD法对肉苁蓉进行毒性研究。结果：急性毒性试验MTD>15 000 mg/kg，属无毒级；肉苁蓉90 d饲喂对大鼠脏器系数影响，高实验组两性别鼠肝、脾、肾的湿重均高于对照组(P<0.01)，中剂量雄鼠肝、脾、肾，雌鼠脾脏的湿重均高于对照组(P<0.01)，中高实验组雄鼠睾丸重均高于对照组；其他指标未见异常，与对照组比较均无差异(P>0.05)。结论：在本实验室条件下未观察到肉苁蓉有明显的毒性作用。

肉苁蓉；急性毒性；90 d喂养；地域差异

肉苁蓉(Cistanche Deserticola)是列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，中国药典规定正品为肉苁蓉干燥带鳞叶的肉质茎[1]，在我国主产于内蒙古、甘肃、新疆、青海等地[2]。肉苁蓉作为医药、保健食品、添加成分被广泛关注，但在使用安全性、使用剂量限值等方面国内报道少见，尤其作为肉苁蓉主产区的内蒙古自治区肉苁蓉的研究更为少见。本文对内蒙古自治区产肉苁蓉的急性毒性和亚慢性毒性进行研究，为肉苁蓉应用安全剂量提供参考，为肉苁蓉的靶器官以及安全毒性提供毒理学依据，并对不同地区肉苁蓉的安全性研究提供导向。

1 材料与方法

1.1 受试物 内蒙古鸿茅药业有限责任公司提供的同年生肉苁蓉，棕褐色、干燥植物根茎部碎片。推荐摄入量3 g/(人·d)。

1.2 动物及实验环境 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供的清洁级健康昆明种小鼠和Wistar大鼠，实验动物生产许可证号SCXK(京)2012-0001。实验动物房为屏障系统，实验室温度20～24 ℃，湿度40 %～60 %。

1.3 仪器和试剂 Beckman AU480生化分析仪、sysmex血液分析仪、电子天平、生物显微镜；生化试剂盒由长春汇力生物技术有限公司提供；Giemsa染液、伊红染液。

1.4 试验方法

1.4.1 急性毒性实验 采用最大耐受剂量法。选昆明种健康小鼠20只，雌雄各半，体重18～20 g、平均体重19.3 g。受试剂量为15 g/kg，经口灌胃量为0.2 mL/10 g体重，3次/d给予受试物,间隔4～6 h。灌胃前动物禁食16 h，自由饮水，灌胃后正常饮食。观察、记录2周内小鼠的中毒表现及死亡情况，实验结束时称量小鼠体重后脱颈椎处死并进行大体解剖观察。

1.4.2 90 d喂养实验 清洁级Wistar大鼠80只，体重60～80 g、平均体重88.5 g，随机分为4组，雌雄各半。两性别分别设低、中、高(0.25 g/kg、2.5 g/kg、5.0 g/kg)3个实验组及1个对照组，将肉苁蓉粉碎后拌入饲料，使动物自然进食。动物单笼饲养、自由饮水进食。观察动物活动和生长情况，每周测剩食、体重并计算食物利用率。试验中期、末期分别取尾静脉血，进行红细胞、白细胞、血小板及白细胞分类计数。90 d时禁食并股动脉采血，测定血清中总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯、葡萄糖。颈椎脱臼处死动物后解剖并检查，称量心、肝、脾、肾、胃和十二指肠、卵巢或睾丸湿重，计算脏/体比值。对高实验组与对照组的心、肝、肾、脾、胃和十二指肠、睾丸或卵巢用甲醛固定，制成石蜡切片，Giesma染色后显微镜下观察。

2 结果

2.1 急性毒性实验 急性毒性实验观察期内，未见小鼠异常，大体解剖未见脏器病变。MTD>15 000 mg/kg，按急性毒性分级属无毒级。

2.2 90 d喂养实验 试验期间动物健康状况良好，各组大鼠均未出现中毒症状，也未见动物死亡。

2.2.1 体重和食物利用率比较 各实验组两性别大鼠的初始体重、1～12周的体重以及第90 d体重、禁食后体重与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组与对照组食物利用率比较见表1。

表1 肉苁蓉对大鼠食物利用率的影响±s)

a为与对照组比较P<0.05

2.2.2 血液学及生化检测 3个实验组动物试验中期、末期的血常规检测结果与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3个实验组雌雄大鼠试验末期血生化指标检测结果与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2.3 湿重及脏体比 90 d喂养实验低剂量组雌、雄大鼠等心、肝、肾、脾、胃和十二指肠、睾丸或卵巢的湿重及脏体比与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，中剂量组、高剂量组部分脏器湿重、脏体比与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

2.2.4 组织及病理学检查 处死动物大体解剖，肉眼未见异常改变。组织学检查均未见异常。

3 讨论

近年来，对肉苁蓉的研究已取得了很大进展，除有传统的壮阳效用外，肉苁蓉在调节神经和内分泌、增强免疫、抗衰老和抗氧化、通便和降压护肝以及提高记忆力等方面功效显著[3]。本研究表明，肉苁蓉的急性毒性属无毒级。食物利用率的差异集中在试验初期和试验中期，不存在剂量反应关系；脏器湿重比较发现，中、高剂量组中部分脏器脏体比高于对照组，且浓度越大涉及脏器越多，可能与肉苁蓉的促细胞分化作用、肝细胞的保护以及纤维细胞生长和睾丸酮促分泌作用有关[4]。本次实验结果表明，在本实验剂量下肉苁蓉不引起血细胞构成、形态和血液生化的改变。

肉苁蓉分布范围较广，地理环境差异大，因地质元素分布不同，肉苁蓉中元素积累、分布和毒性等方面可能存在着很大的差异[5]。肉苁蓉因其复杂成分，在应用中可引起不良反应。

表2 肉苁蓉对大鼠脏器湿重和脏/体比的影响±s)

a为与对照组比较P<0.05，b为与对照组比较P<0.01

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:90.

[2] 雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社，2001:292.

[3] 刘雄，李成明，高建德，等.肉苁蓉的研究进展[J].中国中医药科技，2013,9(5):575-577.

[4] Gu L,Xiong WT,Wang C,et al.Cistanche deserticola decoction alleviates the testicular toxicity induced by hydroxyurea in male mice[J].Asian Journal of Andrology,2013(15):838-840.

[5] 杜友,盛晋华,崔旭盛.不同产地管花肉苁蓉矿质元素分析[J].光谱学与光谱分析,2012,10(10):2824-2827.

Study onacute toxicity and 90 days' feedingsubchronic toxicity of Cistanche deserticola

BAI Guohui1, ZHANG Xiaoli1, QU Lin2,FAN Shuli2, WANG Wenrui2

(1.Postgraduate2013,BaotouMedicalCollege,Baotou014060,China;2.InnerMongoliaCenterforDiseaseControlandPrevention,Hohhot010031,China)

Objective:To observe the acute toxicity andlong time feeding subchronic toxicity of Cistanche deserticola. Methods: After90-day mixed feeding,the animals`indexes of food consumption , food utilization rate, blood, biochemistry, organ coefficients and tissue pathology were observed, with acute toxicity of Cistanche deserticola studied by using MTD method.Results:Acute toxicity test MTD>15 000 mg/kg , belongs to the non-toxic level; effects of Cistanche deserticola on the organ coefficient of rats and gender in the high dose group in liver, spleen and kidney wet weights were higher than those of the control group (P<0.01); liver, spleen and kidney of male rats and spleen wet weight of female rats in the middle dose group were higher than those of the control group (P<0.01); male rats' testisweights in the high and middle dose group were higher than those of the control group; other indicators showed no abnormalities (P>0.05). Conclusion:No obvious toxicity is observed in experimental conditions.

Cistanche deserticola；Acute toxicity ；90 days' feeding ；Regional differences

王文瑞

2016-02-23)