CD105和血管内皮生长因子-C在结肠癌中的表达及临床意义

田建虎， 胡 江， 宋晓彪， 赵冀山， 张 朦

(1.包头医学院，内蒙古包头 014060；2.包头市中心医院普外科)



CD105和血管内皮生长因子-C在结肠癌中的表达及临床意义

田建虎1， 胡 江2， 宋晓彪2， 赵冀山2， 张 朦1

(1.包头医学院，内蒙古包头 014060；2.包头市中心医院普外科)

目的：探讨CD105和血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)在结肠癌中的表达及与临床病理参数的关系。方法：采用免疫组化法，检测50例结肠癌组织和20例癌旁非癌组织中CD105标记的微血管密度和VEGF-C蛋白的表达，分析两者与结肠癌临床病理参数的关系。结果：在结肠癌组织及正常组织中CD105和VEGF-C的阳性表达依次降低(CD105：25.54±8.38，10.80±2.35；VEGF-C：74.0 %，5.0 %)，组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)；CD105在结肠癌中表达与Dukes分期及淋巴结转移情况有关(P均<0.01)；CD105与VEGF-C在结肠癌中的表达呈正相关性(rs=0.605,P<0.01)。结论：(1)CD105和VEGF-C蛋白的表达与结肠癌的发生、发展有一定关系。(2)CD105对结肠癌病人病理分级的诊断、判断预后及预测血管及淋巴管转移有一定的指导作用，联合VEGF-C是否能增强其作用需进一步深入研究。

CD105；血管内皮生长因子-C；结肠癌；免疫组化

根据我国最新肿瘤流行病学统计显示，结直肠癌发病率已位居城市恶性肿瘤的第3位，仅次于肺癌和胃癌，死亡率也上升至第4位，并呈现年轻化发展，严重影响到人们的健康及生活质量。结肠癌的生长、浸润及转移是多因素共同发展的结果，在一定程度上依赖于血管生成。CD105是转化生长因子β受体的复合物之一，在肿瘤新生血管中高度表达，是目前一种较好的可以衡量血管内皮细胞增殖状态指标因子之一。血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)是血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族的一个新成员，也是第一个被发现的淋巴管生成因子，可调节血管发生、淋巴管生成及血管通透性。大多数研究表明CD105和VEGF-C均参与血管及淋巴管的形成和新生。本实验应用免疫组化技术检测结肠癌组织中CD105标记的微血管密度计数及VEGF-C蛋白的表达，探讨其与临床病理特征的关系。

1 材料和方法

1.1 材料 50例结肠癌组织来自包头市中心医院2011年至2015年收治的术前未进行化疗、放疗及免疫治疗的手术切除标本蜡块，同时选取20例癌旁非癌组织作为对照。兔抗人VEGF-C多克隆抗体及兔抗人CD105鼠抗体原液购自北京博奥森公司，稀释倍数1∶200。免疫组化试剂盒等购自北京中杉金桥公司。

1.2 方法 全部标本常规脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4 μm，分别用于HE和免疫组织化学染色，实验程序严格按照SP法试剂盒说明书进行，并设用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 CD105阳性判定按Weidner等[1]报道的方法，微血管密度(microvessel density，MVD)以任何一个棕黄色的内皮细胞或细胞簇作为一个血管。先在低倍镜下观察全部视野，找到染色血管高密度区，然后在高倍镜下计数被CD105染色的微血管数目，计数3个高倍视野，取其平均值为该例的MVD值。VEGF-C阳性判定标准：在高倍镜下随机选取5个视野(每个视野观察细胞数不少于200个)。(1)按切片中VEGF-C着色程度评分：细胞无色，0分；浅黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。(2)按VEGF-C阳性细胞数占肿瘤细胞数的百分比，<30 %为1分，30 %～70 %为2分，>70 %为3分。取(1)、(2)两项评分成绩为总积分，0-1分为阴性(-)，≥2分为阳性(+)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料两组间采用t检验，计数资料组间比较用卡方检验，用Spearman检验相关性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MVD值与VEGF-C蛋白表达在结肠癌中检测结果 结肠癌的MVD为(25.54±8.38)个/HP，正常结肠黏膜组织为(10.80±2.35)/HP，两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结肠癌组织和正常结肠组织中VEGF-C蛋白阳性表达率分别为74.0 %(37/50)及5.0 %(1/20)，两者间差异具有统计学意义(P<0.01)。

2.2 MVD值和VEGF-C蛋白的表达与结肠癌临床病理参数的关系 在结肠癌中有淋巴结转移、Dukes C+D期患者其MVD值高于Dukes A+B期或淋巴结无转移者(p均<0.01)，而与患者的年龄、性别及分化程度无统计学意义(P>0.05)；VEGF-C蛋白的阳性表达率均与结肠癌患者性别、年龄、分化程度、Dukes分期及淋巴结转移没有统计学意义(P均>0.05),见表1。

表1 结肠癌组织中MVD和VEGF-C表达与患者临床病理特征的关系

2.3 MVD值与VEGF-C蛋白在结肠癌中表达的相关性分析 在结肠癌中VEGF-C阳性组MVD值高于阴性组，通过Spearman分析证明，VEGF-C蛋白的表达与MVD值呈正相关(rs=0.605,P<0.01)。见表2。

表2 结肠癌中VEGF-C蛋白表达与MVD值的相关性

3 讨论

自从Folkman首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的观点，后经过一系列的完善形成了肿瘤抗血管生成治疗的理论。目前已公认，肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的重要条件。CD105(Endoglin)是应用鼠抗人前B淋巴细胞单克隆抗体44G4在儿童白血病患者中首次检出(为细胞膜同型二聚体糖蛋白，其主要是通过调节细胞对转化因子的反应，参与新生血管的发育与重塑)，其主要存在于各组织新生血管内皮细胞上。Yasser M等[2]在对前列腺癌患者的研究中发现，CD105标记的肿瘤微血管密度值能够预测肿瘤的侵袭和转移，并且与肿瘤的预后有关。Kun-ming Rau等[3]研究的结果提示，乳腺癌病情发展程度与微血管密度值呈正相关，可作为预测乳腺癌变的预后指标。

通过本实验发现，在结肠癌中CD105的微血管密度值高表达为(25.54±8.38)个/HP。微血管密度值在患者的Dukes分期及有无淋巴结转移之间有差异；但与患者的性别、年龄及分化程度无关，此结果与其他学者相关研究结果相吻合，说明新生血管的生成对结肠癌的生长、浸润及转移发挥重要作用。通过对新生血管的靶向治疗将对肿瘤新生血管生成起到直接或间接抑制作用而发挥抗癌效应。

VEGF-C是VEGF家族的新成员，其编码基因位于人类4q54上，分子量为46.9 kD。VEGF-C通过与相应受体结合，刺激血管及淋巴内皮细胞的存活、增殖和迁移。同时国内学者[4]发现，VEGF-C在结直肠癌组的阳性表达率为78.2 %(61/78)，其阳性表达高于正常组织阳性表达率15.0 %(3/20)；VEGF-C在结直肠癌组织中的阳性表达率与患者的组织学分级、不同的Dukes分期及有无淋巴结转移相关。而在本实验结果显示，VEGF-C的表达在结肠癌组织中与患者的Dukes分期及淋巴结转移无关。结果与已有的研究结果有差异，不排除与本实验样本量小或肿瘤组织异质性表达有关，需进一步扩大样本量深入研究，减少人为误差。

综上所述，肿瘤的浸润及转移是一个多因素作用的结果。在结肠癌中CD105及VEGF-C高度表达，在VEGF-C阳性组中MVD的表达高于正常组，通过Spearman分析证明，VEGF-C蛋白的表达与MVD值呈正相关。提示在结肠癌中VEGF-C的高表达可能促进了新生血管的增生，导致肿瘤的生长及转移，对两者的联合检测将为临床的免疫治疗和抗血管及淋巴管的靶向治疗开辟新途径。但目前对两者的具体作用机制并未完全明确，需要进一步研究。

[1] Weidner N,Folkman J,Pozza F,et al.Tumor angiogenesis:a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma[J].J Natl Cancer Inst,1992,84(24):1875-1887.

[2] Yasser M.El-Gohary,Jan F.Silver man,Peter R.Olson,et al.Endoglin (CD105) and vascular endothelial growth factor as prognostic markers in prostatic adenocarcinoma[J].American Society for Clinical Pathology,2007，127:572-579.

[3] Kun-ming Rau,Chao-cheng Huang,Tai-Jan Chiu，et al.Neovascularization evaluated by CD105 correlates well with prognostic factors in breast cancers[J].Exp Ther Med,2012，4(2):231-236.

[4] Xu CJ,Xu F.MMP-11 and VEGF-C expression correlate with clinical features of colorectal adenocarcinoma.International Journal of Clinical and Experimental Medicine，2014，7(9):2883-2888.

Expressions of CD105 and VEGF-C in colon cancer and their clinical significance

TIAN JianHu1，HU Jiang2，SONG Xiaobiao2，ZHAO Jishan2, ZHANG Meng1

(1.BaotouMedicalCollege,Baotou014040,China;2.GeneralSurgeryDepartmentofBaotouCentreHospital,Baotou014000,China)

Objective:To detect the expression of CD105 and vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) protein in colon cancer and to analyze their correlation with the clinical pathological features. Methods： Immunohistochemistry was adopted to detect the microvessel density (MVD) marked by CD105 and the expression of VEGF-C in 50 samples of colon cancer tissues and in 20 samples of adjacent normal colon tissues. Their correlation with the clinical pathological features of colon cancer was analyzed.Results： The positive expressions of CD105 and VEGF-C in colon cancer tissues and normal colon tissues decreased in turn (CD105：25.54±8.38，10.80±2.35；VEGF-C：74.0 %，5.0 %) and there was significant difference between the two groups (P<0.01); Expression of CD105 in colon cancer was related to Dukes' staging and lymph node metastasis (P<0.01). Expression of CD105 was positively correlated with expression of VEGF-C in colon cancer (rs =0.605, P<0.01). Conclusions：(1) Expressions of CD105 and VEGF-C protein are somewhat associated with the occurrence and development of colon cancer. (2) The detection of CD105 may be helpful to diagnose pathological staging, judge prognosis and predict blood vessels or lymphatic metastasis, but it needs to be further studied whether the combination of CD105 and VEGF-C can enhance the effects.

CD105; VEGF-C; Colon cancer; Immunohistochemical method

宋晓彪

2015-09-04)