卵巢上皮性肿瘤患者血清中hK10的表达①

石磊，张德慧，胡玉红，邹晓燕，王福超，李颀

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯154003；2.大庆油田总医院，黑龙江 大庆 163001)



卵巢上皮性肿瘤患者血清中hK10的表达①

石磊1，2，张德慧2，胡玉红1，邹晓燕2，王福超2，李颀2

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯154003；2.大庆油田总医院，黑龙江 大庆 163001)

卵巢上皮性癌；激肽释放酶；癌抗原(CA125)；肿瘤标志物

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，最多见的是上皮性卵巢癌。尽管给予了标准的治疗方案,5年的生存率仅在20%～40%,中晚期卵巢癌复发率和死亡率仍然很高，治疗效果差，严重威胁了全球妇女的健康。目前研究最广泛深入的卵巢癌血清肿瘤标志物是癌抗原(CA125),但是其阳性率大约只达45%～50%[1]。CA125灵敏度较高，但其特异度不是很高，在子宫内膜异位症、盆腔炎性肿物患者的CA125也可出现轻度增高[2]。因此，应该寻求一种新的特异性的肿瘤标志物，以提高卵巢癌早期诊断的特异性及敏感性。人组织激肽释放酶10(Kallikrein10，KLK10) 又称正常上皮细胞特异性基因1(normal epithelial cellspecific1 gene，NES1)，是KLK 家族新发现的肿瘤相关基因成员之一，编码组织激肽释放酶10(HumanKal1ikrein，hK10)，多种肿瘤发生与其异常表达密切相关，最早于乳腺癌发现[3]。KLK10 在一些组织中表达降低，比如肝癌、睾丸癌、肺癌(非小细胞)和前列腺癌中，但在胃癌、卵巢癌中显示表达升高[4]。国外初步研究发现KLK10mRNA在上皮性卵巢癌中表达异常，具有一定的肿瘤标志物价值[5]。本实验运用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测卵巢上皮性癌中血清激肽释放酶 10(hK10)的水平，进一步研究卵巢上皮性癌发生、发展的机制，从而探讨血清hKl0在卵巢上皮性癌早期诊断中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014-03～2014-12在黑龙江省大庆油田总医院和大庆市人民医院妇科病房住院患者53例。运用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测31例原发性卵巢上皮性癌组按FIGO分期，早期卵巢癌患者15例，其中I期3例，II期12例，I期包括浆液性囊腺癌2例，黏液性囊腺癌1例，II期包括浆液性囊腺癌7例，黏液性囊腺癌5例；晚期卵巢癌患者16例，其中III期10例，IV期6例，III期包括浆液性囊腺癌5例，黏液性囊腺癌5例，IV期包括浆液性囊腺癌3例，黏液性囊腺癌3例，10例为卵巢上皮性良性肿瘤组(浆液性囊腺瘤5例，黏液性囊腺瘤5例，均因卵巢囊腺瘤行手术治疗)及取同期体检中心健康体检合格的女性12例为正常对照组。检测各组血清hKl0水平及卵巢癌组血清CA125水平。根据各组数据进行统计分析。

所选病例入选标准：①排除合并严重心脏病、肝肾疾病、骨关节病、凝血功能障碍、内分泌疾病和其他肿瘤病史者；②卵巢癌术后病理证实均为卵巢上皮来源原发性肿瘤，排除器官转移癌；③所有患者术前3个月内均未行化疗、放疗、激素类药物及中医中药等特殊治疗；④所有患者手术时间均小于3h；⑤标本的采集均取得研究对象的知情同意。原发性卵巢上皮性癌组平均年龄56岁 (41～71岁)；卵巢上皮性良性肿瘤组的平均年龄42岁(33～51)岁；正常对照组平均年龄50岁 (40～61岁) 。各组患者年龄差异无统计学意义(P>0.05)。主要试剂：人激肽释放酶10ELISA试剂盒购自北京鼎国医药科技公司，CA125定量测定试剂盒购自北京源德生物医学公司。

1.2 方法

本次实验采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)对卵巢癌组、卵巢上皮性良性肿瘤组及正常对照组血清进行实验,得出血清hK10浓度；对卵巢癌组进行实验，得出血清CA125浓度。

1.3 实验结果判定标准

血清hK10参考值为0～8μg/L，hK10>8μg/L判断为hK10阳性。血清CA125参考值为 0～35U/mL，CA125>35U/mL判断为CA125阳性。根据各组数据进行统计分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 卵巢癌组、卵巢上皮性良性肿瘤组和正常对照组血清hK10比较

在卵巢癌组、卵巢上皮性良性肿瘤组和正常对照组， hK10 的血清浓度分别为(15.06±8.58)μg/L、(6.82±2.59)μg/L、(5.99±2.67)μg/L，运用方差分析(F=10.42， P <0.01)，三组间差异有统计学意义。三组hK10的阳性率分别为80.64%、10.00%、8.33%，三组间差异有统计学意义(χ2=26.37，P<0.01)。两两比较，发现卵巢癌组hKl0阳性率显著高于正常对照组，两者比较有显著性差异(χ2=20.37，P<0.01)。卵巢癌组hKl0阳性率显著高于卵巢良性肿瘤组，两者比较有显著性差异(χ2=16.87，P<0.01)，见表1。

表1 三组hK10的血清浓度及阳性率比较

2.2 卵巢上皮性癌不同FIGO分期血清hK10浓度测定

采用国际妇产科联盟(FIGO)分期，早期(I～II期)卵巢癌组15例，血清hK10阳性例数11例，阳性率为73.33 %，平均(10.28±4.04)μg/L；晚期卵巢癌组(III～IV期)血清hK10组16例，血清hK10阳性例数14例，阳性率为87.5%，平均(19.54±9.36)μg/L。晚期卵巢癌组hK10水平高于早期卵巢癌组，两者比较有统计学意义(t'=3.61，P<0.01)，见表2。

表2 早期卵巢癌组与晚期卵巢癌组血清hK 10比较

2.3 卵巢上皮性癌不同FIGO分期血清CA125浓度测定

采用国际妇产科联盟(FIGO)分期，早期(I～II期)卵巢癌组15例，血清CA125阳性例数12例，阳性率为80.00%，血清CA125水平为(256.77±183.27)U/mL;晚期(III～IV期)卵巢癌组16例，血清CA125阳性例数15例，阳性率为93.75%，血清CA125水平为(828.76±407.27)U/mL;两组比较，晚期卵巢癌组CA125水平高于早期卵巢癌组，两者比较有统计学意义(t'=5.09,P<0.01)，见表3。

表3 早期卵巢癌组与晚期卵巢癌组血清CA125比较

2.4 早期卵巢上皮性癌中血清hK10阳性率和血清CA125阳性率的比较

早期卵巢上皮性癌组血清hK10阳性率为73.33%(11/15)，血清CA125阳性率为80% (12/15)。在早期卵巢上皮性癌中，二者阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

编码激肽释放酶10(hK10)是 KLK家族新发现的肿瘤相关基因成员之一，它的生理作用仍不清楚,可能通过分泌蛋白激酶消化一个或多个底物,在多种组织中表达，提示在不同组织中能作用于不同的底物,其酶活性可以通过活化而启动,也可以通过灭活而终止。而介导这种生理机制的则是其他生物分子如激素、 生长因子和细胞因子等。很多激肽释放酶在同一组织中同步表达,说明hK10 可能参与级联反应如同体内的消化、纤维蛋白溶解、凝血和细胞凋亡一样。hK10在许多正常组织如乳腺、前列腺、肾脏、子宫内膜及多种体液如血液、唾液、羊水等均有表达;其在多数肿瘤(肝癌、睾丸癌与前列腺癌)中为负调节，而在胃癌、卵巢癌中则是正调节[6]。

本研究发现，hK10在原发性卵巢上皮性癌组的阳性率明显高于卵巢上皮性良性肿瘤组和正常对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。提示hK10很可能参与了卵巢癌的发生发展过程，这结果与Luo等人的研究结果相符。Luo等测定146例卵巢癌患者、141例妇科良性疾病患者以及97例健康女性对照组血清hKl0水平，结果表明，56%的卵巢癌患者表达水平明显增高，而在健康女性及妇科良性疾病组均未见明显增高[7]。Jacobs等采用酶联免疫法测定卵巢癌血清中hKl0水平，证实联合检测可明显增加早期卵巢癌诊断灵敏度，并发现其与预后密切相关,hK10水平高的更易复发、转移和死亡，认为hKl0可作为卵巢上皮性癌的早期诊断及判定预后的指标，是一种有力的卵巢癌检测方法[8]。张晓霞等应用基因芯片及PCR技术探索hK10在卵巢癌中的表达水平，结果显示在卵巢癌患者组织中异常增高，hKl0基因在正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤组织中有弱表达[5]。同样，在卵巢癌的腹水中也检测出hKl0表达升高[7]。hK10在卵巢癌中高表达，可能的机制是 hK10 基因外显子3 的 CPG 岛甲基化导致其在卵巢肿瘤中异常表达，肿瘤组织中KLK10mRNA及蛋白合成失调。随着基因表达的深入研究，几乎每种类型肿瘤的启动子甲基化都有其独特的模式。KLK10异常的DNA 甲基化可能成为一种有用的分子标记。目前去甲基化用于临床治疗肿瘤已初见端倪,利用一些去甲基化的试剂能使一些不表达的基因再次重新表达恢复功能，这已成为肿瘤基因治疗的一种战略新思路，具有广阔的临床应用前景。目前对KLK10的甲基化研究尚局限于模型构建和机制的研究，有待深入的是对调控后细胞的生物学行为及其功能的研究，这将是KLK10肿瘤治疗的重要理论依据。

本研究同时检测了15例早期卵巢癌组及16例晚期卵巢癌组患者的血清hKl0值。结果显示，hK10在晚期卵巢癌组hK10血清水平高于早期卵巢癌组，差异具有统计学意义(P<0.01)。此实验证实hKl0的阳性表达与临床FIGO分期密切相关，说明其表达可能与卵巢癌的进展相关。Luo等同时发现hKl0水平在卵巢癌的不同阶段表达也有不同，证实hK10可能是卵巢癌早期诊断的肿瘤标志物[8]。郝艳华等应用酶联免疫法研究报道通过测定血清中hKl0水平并以正常对照组95%可信区间的上限值为阳性标准，探讨hK10水平及阳性率在卵巢癌中的价值，结果发现卵巢癌患者hKl0水平和阳性率都明显高于正常对照组和卵巢良性肿瘤组;I/II期与III/IV期卵巢癌患者血清中hK10水平相比较，差异有显著性(t=1.21，P<0.05)[9]。这与本次实验研究结果基本相符。

综上所述，hK10在卵巢癌血清中的水平明显高于其在良性肿瘤组及正常对照组，在临床分期晚的卵巢癌血清中的水平高于早期卵巢癌。总之，KLK10基因编码的hK10蛋白可能是一种新的反映卵巢癌早期诊断及临床分期的指标，有望成为具有划时代意义的诊断卵巢癌的肿瘤标志物。

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石磊(1983～)女，黑龙江大庆人，在读硕士研究生，主治医师。

胡玉红(1967～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，教授，硕士研究生导师。E-mail:2273316364@qq.com。

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1008-0104(2016)05-0076-03

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