血清及唾液中MMP-9和TIMP-1的水平与不同类型口腔扁平苔藓的相关性研究①

朱建华，杨艳娟，胡 静，郭朝阳，李晓光，刘继光

(佳木斯大学附属第二医院，黑龙江 佳木斯 154003)



血清及唾液中MMP-9和TIMP-1的水平与不同类型口腔扁平苔藓的相关性研究①

朱建华，杨艳娟，胡 静，郭朝阳，李晓光，刘继光

(佳木斯大学附属第二医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨通过检测扁平苔藓(OLP)患者血清及唾液中基质金属蛋白酶因子-9(MMP-9)水平、其天然抑制剂基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)水平和MMP-9/TIMP-1比值,从中筛选出有利于指导OLP临床的敏感性指标。方法：实验分3 组，正常对照组15例，实验组OLP糜烂型 、OLP非糜烂型各15例，采取ELISA 法对正常组和OLP糜烂型 、OLP非糜烂型血清和唾液中MMP-9含量,TIMP-1含量进行测定，对结果进行统计。结果：分析实验数据可知，正常对照组、OLP非糜烂型、OLP糜烂型血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1比值依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05),TIMP-1含量也依次升高，但差异无统计学意义(P>0.05);两实验组血清和唾液中MMP-9水平成正相关(r=0.685,P<0.01)、MMP-9/TIMP-1比值成正相关(r=0.704，P <0.01)。结论:唾液中MMP-9的水平和MMP-9/TIMP-1比值可作为口腔扁平苔藓病情监控的敏感指标。

口腔扁平苔藓；MMP-9；TIMP-1；血清；唾液；ELISA

口腔扁平苔藓(OLP)是一种常见口腔黏膜慢性炎性疾病，患病率为0.1%～4%,是口腔黏膜病中的常见疾病。该病好发于中年，女性患者较多，多数患者感觉不适伴有疼痛等症状[1]。其病因和发病机制尚不十分明确，以往研究证实细胞因子、生长因子、细胞黏附分子、基质金属蛋白酶等均参与了OLP病损局部的炎症和免疫反应，在OLP的发生和发展中起着重要的作用[2]。血清及唾液检测标本收集简洁方便,适用人群广,尤其适合术前无法取得病理组织的患者。本课题通过测定血清和唾液中MMP-9及TIMP-1的水平，研究他们的水平及两者之间的平衡与不同类型OLP的关系，通过检测MMP-9和TIMP-1的水平来监控病情，分析疗效，它们含量之间的失衡可能参与了OLP的病情发展，把MMP-9与TIMP-1的比值作为新因素进行分析。

1 材料及方法

1.1 材料

实验组病例均来自于在佳木斯大学附属第二医院口腔医院牙周黏膜病科就诊并诊断确诊为口腔扁平苔藓的患者。患者近3个月内未接受任何治疗,均无全身系统性疾病,无其他口腔疾病。共采集病例样本30例(男9例，女21例，年龄20～60岁，平均45岁)，其中糜烂型15例，非糜烂型15例。正常对照组样本15例均来自佳木斯大学附属第二医院体检科，无口腔和皮肤扁平苔藓病史，身体健康，体检结果各项指标正常，平均年龄40岁。

唾液样本的采集和血清样本的采集：样本均需1mL，于上午8～10点进行采集，将采集完毕的样本装入已消毒的EP管中，尽快放于-70℃冰箱中保存。

主要仪器及试剂：MMP-9 ELISA 试剂盒、TIMP-1 ELISA 试剂盒、恒温型水槽、酶标仪、MMP-9酶标板、TIMP-1酶标板、低温冰箱、高速离心机。

1.2 方法

按照ELISA试剂盒说明操作，将标准MMP-9液和TIMP-1液与未知质量浓度的MMP-9和TIMP-1的标本分别与抗人的MMP-9和TIMP-1生物素亲和素和抗生物素蛋白发生特异性结合，加入酶标底物，出现颜色反应。，因为颜色的深浅与MMP-9和TIMP-1质量浓度成正比，所以通过标准曲线可测出所有标本的MMP-9和TIMP-1质量浓度。450nm波长下测出所有标本的光密度(OD值)，由标准质量浓度的MMP-9和TIMP-1与其OD值做标准曲线，测出所有标本的MMP-9和TIMP-1质量浓度。

1.3 统计学方法

2 结果

经统计学分析，正常对照组、OLP非糜烂型、OLP糜烂型血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1比值依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05),TIMP-1含量也依次升高，但差异无统计学意义(P>0.05);两种检测媒介中MMP-9浓度和MMP-9/TIMP-1均呈正相关关系(P<0.01)，表1～3。

组别MMP-9(ug/mL)TIMP-1(ug/mL)MMP-9/TIMP-1糜烂组10.15±0.010.39±0.110.38±0.09非糜烂组20.11±0.0070.37±0.090.29±0.07正常对照组30.05±0.0040.32±0.080.16±0.05P13<0.05>0.05<0.05P23<0.05>0.05<0.05P12<0.05>0.05<0.05

组别MMP-9(ug/mL)TIMP-1(ug/mL)MMP-9/TIMP-1糜烂组10.56±0.030.79±0.180.71±0.17非糜烂组20.40±0.020.76±0.130.53±0.15正常对照组30.18±0.0090.69±0.110.26±0.08P13P<0.05P>0.05P<0.05P23P<0.05P>0.05P<0.05P12P<0.05P>0.05P<0.05

表3 血清和唾液中MMP-9、MMP-9/TIMP-1的相关性分析

3 讨论

血液与唾液是人体的重要体液，很多文献报道许多细胞因子在唾液和血清中都能检出，并且在口腔黏膜疾病的诊断，治疗和预后的监控具有临床意义[3]。本实验中血清及唾液的采集和储存对实验结果有很大影响。另外，OLP的不同阶段,患者的免疫状态是变化的，血清细胞因子的水平也可能是变化的，因此,在OLP 的不同阶段,,如果各病型 OLP患者的纳入比例不同,那么检测结果有可能存在差异。

以往研究证实OLP病损局部的炎症和免疫反应有细胞因子、生长因子、细胞黏附分子、基质金属蛋白酶等均参与[4]。基质金属蛋白酶家族(MMPs)是一类生物活性依赖于钙离子和锌离子内肽酶家族,MMPs能降解几乎所有细胞外基质,在体内参与结缔组织的降解、重建、炎症反应等生理、病理过程[5]。然而MMPs的活性受到基质金属蛋白酶天然组织抑制剂(TIMPs)的抑制[6],MMPs与TIMPs在体内维持着细胞外基质(ECM)降解和分泌的平衡[7]。正常机体中MMPs和TIMPs的合成和降解存在一定的比例关系，当组织由于某种因素刺激时，产生炎症反应，即诱导刺激MMPs的分泌，导致基底膜及ECM降解，而其抑制因子TIMPs含量应该升高以起到对机体的保护作用。但本实验研究结果显示随OLP病情严重程度加重TIMP-1的含量并无明显升高(P>0.05)，原因可能是MMPs家族与TIMP-1同源的抑制剂如TIMP-2的含量增加。当MMPs过度分泌时,该平衡被打破,MMPs水平升高，MMP-9与TIMP-1比例失衡，导致OLP的发生发展及癌变[8]。与本实验三组血清及唾液中MMP-9含量随着病情严重程度加重升高而MMP-9和TIMP-1比例失衡相吻合，差异有统计学意义(P<0.05)。说明唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1在OLP临床病情监控中有重要意义。

本实验通过检测糜烂型和非糜烂型 OLP 患者血清和唾液中MMP-9和TIMP-1 的含量并与正常对照组比较,结果显示两种类型OLP患者血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1与正常对照组相比明显升高(P<0.05),进而说明MMP-9含量在OLP的病情发展中有很大的影响，虽然血清和唾液中TIMP-1含量均高于正常对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。通过OLP患者血清和唾液样本中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1的相关性分析(P<0.05),证明OLP患者血清中的及唾液中的MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1均具有高度的相关性。因此，可以通过更简洁方便的检测OLP患者唾液中的MMP-9的含量和MMP-9/TIMP-1来监控OLP临床病情发展。

[1]陈谦明,主编.口腔黏膜病学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2008：83-87

[2]Zhou XJ,Sugerman PB,SavageNW,et al.Matrix metalloProteinases and theirInhibitors in oral liehen Planus[J].J Cutan Pathol,2001,28(2):72-82

[3]宋广斌，徐学武.脂肪移植对皮肤质地的改善研究[J].黑龙江医药科学，2011,35(5):85-86

[4]De Moura Castro Jaeques C,Cardozo Pereira AL,et al.Oral liehen Planus part I:Epidemiology,clinies,etiology,immunopathogeny,anddiagnosis[J].Skinmed.2003，2(6):342-349

[5]王新，何宝江，周昱.腹腔镜胆囊切除术后套管部位疝3例分析[J].黑龙江医药科学，2011,34(5):46

[6]Wei YQ,Zhao X,Kariya Y,et al.Induction of autologous tumor killing by heat treatment of fresh human tumor cells:involvement ofγδcells and heat shock protein 70[J].Cancer Res,1996,56(5):1104-1110

[7]刘友良,唐瞻贵.基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1在口腔鳞状细胞癌中的表达研究[J].口腔医学，2001,30(2)：80-81

[8]Sutinen M,KainulainenT,HurskainenT,et al.ExPression of matrixmetalloprot-Einases (MMP-1 and -2) and their inhibitors(TIMP-l,-2and-3)in Oral liehen Planus,dysPlasia,squamous cell carcinoma and lymPh node metastasis[J].BrJCa-ncer，1998,77(12):2239-2245

1.黑龙江省卫生厅项目，编号：2013215；2.2014年度黑龙江省教育厅科学技术研究项目计划，编号：12541784。

朱建华(1959～)女，黑龙江佳木斯人，本科，教授，硕士研究生导师。

刘继光(1961～)男，黑龙江佳木斯人，博士，教授，硕士研究生导师。E-mail:woaijiarenyz@163.com

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1008-0104(2016)05-0040-02

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