冠心舒通胶囊的抗血小板聚集及抗动脉收缩作用

王卫明，邢晓雪，高慧，王玲燕，刘敏娜，樊官伟

（1.天津市现代中药重点实验室，天津　300193；2.天津中医药大学，天津　300193）

冠心舒通胶囊的抗血小板聚集及抗动脉收缩作用

王卫明1，2，邢晓雪1，2，高慧1，2，王玲燕1，2，刘敏娜1，2，樊官伟1，2

（1.天津市现代中药重点实验室，天津300193；2.天津中医药大学，天津300193）

［目的］检测冠心舒通胶囊在治疗血栓栓塞性疾病中的疗效。［方法］对比冠脉舒通胶囊对二磷酸腺苷（ADP）和凝血酶诱导的大鼠血小板最大聚集率、抑制率；对比其对去甲肾上腺素和氯化钾（KCl）诱导的大鼠胸主动脉环收缩的舒张率。［结果］冠心舒通胶囊对ADP和凝血酶诱导的血小板聚集有抑制作用；对去甲肾上腺素和KCl诱导的大鼠胸主动脉收缩有舒张作用。［结论］冠心舒通胶囊对血栓栓塞性疾病有确切疗效。

冠心舒通胶囊；血小板；动脉环

目前脑部血栓栓塞性疾病包括脑梗死、脑血栓、短暂性脑缺血发作以及心脏疾病中的心绞痛、心肌梗死等，心脑血管疾病常并发，针对各种机制的用药种类繁多，多种药物联合应用导致了胃肠反应、肝肾损伤，导致了生活不便，经济负担加重。这些疾病共同的病理起因是动脉硬化，其病理机制是血管内皮损伤收缩能力下降和血小板的激活聚集，血小板与内皮之间的相互作用在血栓栓塞性疾病的发生中起了重要的作用［1-6］。冠心舒通胶囊是陕西咸阳步长制药有限公司研制的治疗冠心病心绞痛的中成药，由丹参、丁香、冰片、天竺黄等组成，具有活血化瘀、通经活络、行气止痛的作用，在临床中对急性心肌梗死及经皮冠状动脉介入术（PCI）术后再狭窄有较好的疗效［7-12］。而且对血脂异常、心绞痛、室性早搏等有效，主要不良反应是轻微可逆的消化道反应［13］。本实验通过检测冠心舒通胶囊对血小板的抗聚集作用和对大鼠胸主动脉的扩张作用，为冠心舒通胶囊兼具保护内皮和抗血小板聚集治疗血栓栓塞性疾病提供依据。

1　材料与方法

1.1药物与试剂冠心舒通胶囊，陕西步长制药有限公司研制提供，批号为130803；阿司匹林肠溶片，生产企业Bayer Health Care Manufacturing.S.r.l，进口分装企业拜耳医药保健有限公司，批号BJ18283；双嘧达莫片，天津力生制药股份有限公司，批号为1311010；氯化钠（NaCl），氯化钾（KCl），磷酸二氢钾（KH2PO4），七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O），碳酸二氢钠（NaH2CO3），葡萄糖（C6H12O6），氯化钙（CaCl2），天津市北方天医化学试剂厂；氯化镁（MgCl2），去甲肾上腺素（NE），乙酰胆碱（ACH，Sigma公司）；纯水（美国Millipore纯水系统）；柠檬酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）：柠檬酸钠（天津市科密欧化学试剂有限公司）：tris-base；凝血酶（Sigma公司）；二磷酸腺苷（ADP，Sigma公司）。

1.2实验动物SD大鼠，雄性，体质量250～300 g（北京维通利华实验动物技术有限公司）。

1.3实验仪器Maclab AID生物记录软件（澳大利亚Powerlab公司），Radnoti组织器官灌流系统（美国Powerlab公司）；多功能酶标仪（美国perkin Elmer公司）；低速自动平衡离心机（德国Thermo Fisher）。

1.4实验方法将ADP诱导的血小板聚集分为5 mg/L双嘧达莫片组、模型组、1.5 g/L冠心舒通胶囊组、1.25 g/L冠心舒通胶囊组、1.0 g/L冠心舒通胶囊组；将凝血酶诱导的血小板聚集分为20 g/L阿司匹林肠溶片组、模型组、1.5 g/L冠心舒通胶囊组、1.25 g/L冠心舒通胶囊组、1.0 g/L冠心舒通胶囊组、0.75 g/L冠心舒通胶囊组、0.5 g/L冠心舒通胶囊组。

1.4.1血小板聚集实验

1.4.1.1复方枸橼酸钠（ACD）溶液的配置柠檬酸38 mmol/L，柠檬酸钠75 mmol/L，葡萄糖124 mmol/L。1.4.1.2血小板缓冲溶液的配置NaCl 130 mmol/L，柠檬酸钠10 mmol/L，碳酸氢钠（NaHCO3）9 mmol/L，葡萄糖6 mmol/L，MgCl20.9 mmol/L，磷酸二氢钾0.81 mmol/L，Tris-base10 mmol/L。

1.4.1.3实验方法腹主动脉取血与ACD溶液混匀离心用缓冲溶液提取血小板，调节血小板混悬液使其A值在1.1～0.88之间，加入各浓度药物及双嘧达莫片混悬液或各浓度药物及肠溶阿司匹林混悬液，模型组加入缓冲溶液，37℃孵育30 min，各组同时加入ADP或凝血酶，迅速在酶标仪检测450nm的A值每次间隔45 s连续检测30 min。根据各时间点的A值计算血小板聚集率，观察对比各药物在30min内聚集率的变化趋势、比较各药物的最大聚集率。血小板聚集率的计算公式为：血小板聚集率=起点A值-各时间点A值/起点A值×100%。通过各药物最大聚集率与模型组比较计算药物对聚集的抑制率，血小板抑制率的计算公式为：模型组最大聚集率-各药物组最大聚集率/模型组最大聚集率×100%。

1.4.2动脉环舒张实验

1.4.2.1Krebs试液的配置NaCl 118 mmol/L，氯化钾（KCl）4.7mmol/L，硫酸镁（MgSO4）1.2 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，CaCl21.3 mmol/L，d-glucose 10 mmol/L。

1.4.2.2实验方法分离剪取胸主动脉，剪成3～4mm的血管环将处理好的动脉环一端固定于洗浴槽，另一端连接张力换能器，固定好后调整动脉环张力至0.5 g，置于不断充入95%氧气（O2）和5%二氧化碳（CO2）混合气体的10 mL的37℃Krebs试液中持续15 min。然后换液，逐步调节动脉环张力到2.0 g，此过程不小于90 min，待稳定后正式实验。加入NE（终浓度10-6mol/L）刺激血管收缩8 min，然后加入ACH（终浓度为10-5mol/L）作用8 min，证明血管内皮是否存在，换液，加入10mL的Krebs试液，平衡到2.0g（15min）。血管的舒张幅度≥80%证明内皮完整为纳入标准，血管的舒张幅度=（加入NE后动脉环张力-加入ACH后动脉环张力）/（加入NE后动脉环张力-动脉环基础张力）×100%。加入NE（终浓度10-6mol/L）或高钾母液（使其终浓度达到60 mmol/L）刺激血管收缩平稳后观察3 min，然后加入冠脉疏通胶囊混悬液，依次各观察3 min与空白组对比舒张率。舒张率的计算方法：（加药物后最大血管张力-基础张力）/（加NE或KCl后最大张力-基础张力）×100%。

2　统计学处理

采用SPSS 22.0进行统计分析，计量资料均以均数±标准差（±s）表示，血小板最大聚集率和血小板抑制率组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，动脉环舒张率组间比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3　结果

3.1冠心舒通胶囊对血小板聚集的影响

3.1.1冠心舒通胶囊对血小板聚集的影响数据汇总ADP为血小板聚集的弱激活剂，双嘧达莫片能够有效抑制其诱导的血小板聚集，凝血酶是血小板聚集的强效激活剂，在本实验中能够使血小板最大聚集率接近80%，阿司匹林肠溶片能够有效抑制其聚集，而冠心舒通胶囊对两者诱导的血小板聚集皆具有疗效，见表1。

表1　冠心舒通胶囊对血小板最大聚集率及抑制率影响的对比（±s）%

表1　冠心舒通胶囊对血小板最大聚集率及抑制率影响的对比（±s）%

注：与模型组比较，*P＜0.05；与20 mg/L阿司匹林肠溶片相比，#P＜0.05。

ADP凝血酶最大聚集率抑制率最大聚集率抑制率5 mg/L双嘧达莫片26.45±0.33*19.73±0.62--20 mg/L阿司匹林肠溶片--14.35±0.02*81.90±0.39模型组32.96±0.15-79.32±1.58-1.5 g/L冠心舒通胶囊27.43±3.6816.40±6.904.16±1.57*84.78±1.89#1.25 g/L冠心舒通胶囊25.49±0.60*22.67±1.543.13±0.35*96.04±0.53#1 g/L冠心舒通胶囊34.12±0.14-12.83±3.39*83.86±4.06 0.75 g/L冠心舒通胶囊--22.77±4.11*71.37±4.67 0.5 g/L冠心舒通胶囊--55.19±11.07*30.63±12.71组别

3.1.2冠心舒通胶囊对ADP诱导的血小板聚集的影响冠心舒通胶囊（1.25 g/L和1.5 g/L）和5 mg/L双嘧达莫片对ADP诱导的血小板聚集率有降低的趋势，1.25 g/L冠心舒通胶囊对血小板聚集率的降低与模型组比较具有统计学差异（P＜0.05），见图1。冠心舒通胶囊（1.25 g/L和1.5 g/L）与5 mg/L双嘧达莫片对ADP诱导的血小板聚集的抑制率无统计学差异，见图2。

图1　冠心舒通胶囊对ADP诱导的血小板最大聚集率的影响

图2　冠心舒通胶囊对ADP诱导的血小板聚集抑制率的影响

3.1.3冠心舒通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集的影响冠心舒通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集的抑制作用具有剂量相关性，显著降低了凝血酶诱导的血小板最大的聚集率，与模型组比较具有统计学差异（P＜0.05），见图3。冠心舒通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集的抑制率亦呈剂量相关性，且冠心舒通胶囊（1.25 g/L和1.5 g/L）与20 mg/L阿司匹林肠溶片相比具有统计学差异（P＜0.05），见图4。

图3　冠心舒通胶囊对凝血酶诱导的血小板最大聚集率的影响

图4　冠心舒通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集抑制率的影响

3.2冠心舒通胶囊对动脉收缩的抑制作用

3.2.1冠心舒通胶囊对NE诱导的胸主动脉收缩的影响冠心舒通胶囊对NE诱导的胸主动脉收缩具有抑制作用，在1.5、3.0、4.5 g/L浓度范围依次增强，与空白组比较具有统计学差异（P＜0.05），见图5。

3.2.2冠心舒通胶囊对氯化钾诱导的胸主动脉收缩的影响冠心舒通胶囊对氯化钾诱导的胸主动脉收缩具有抑制作用，在0.75、1.5、3.0 g/L剂量范围内呈剂量依赖关系，与空白组比较有统计学差异（P＜0.05），见图6。

图5　冠心舒通胶囊对NE导致的大鼠胸主动脉收缩的影响

图6　冠心舒通胶囊对KCl导致的大鼠胸主动脉收缩的影响

4　讨论

冠心舒通胶囊中的广枣含有黄铜、酚酸等25种化合物，具有改善血液流变、抑制血小板聚集的作用［14］。丹参素可明显改善血管收缩舒张功能损伤［15］。还能够改善局部微循环障碍［16］。冠心舒通胶囊及其组方中的丹参、冰片、天竺黄均能抑制AngⅡ引起的心肌细胞和动脉平滑肌细胞增殖的作用［17］，而且冠心舒通胶囊也能够抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌增值［18］，从而抑制心和血管的慢性舒缩功能失调。丁香具有散寒止痛，温中降逆的功效，能够佐制丹参、冰片、天竺黄的寒凉之性，以防因寒而凝滞，有相反相成之意。

ADP和凝血酶等是血小板激活后释放的物质，它们能够进一步激活血小板。双嘧达莫片能够抑制磷酸二酯酶活性，激活腺苷酸环化酶，增加血小板内cAMP含量，对ADP诱导的血小板聚集有抑制作用。阿司匹林能够抑制环氧合酶-1的活性，从而抑制血小板血栓素A2的合成发挥抗血小板聚集作用。双嘧达莫的扩血管作用可能导致头痛、晕厥甚至诱发心绞痛等不良反应，而且双嘧达莫缓释片同阿司匹林合用预防中风再发与单用没有差异、大出血风险稍高［19］。阿司匹林不良反应时有报道，如胃肠道反应及黏膜损伤、阿司匹林哮喘、过敏反应、瑞氏综合征、水杨酸反应，另外还有大疱性表皮松解型药疹、血液系统反应、中毒性低血糖、听力损害、肝脏毒性、肾损害、心脏毒性、诱发癫痫、习惯性和成瘾性、眩晕、鼻炎、涎腺肿大等特殊不良反应［20］。即使采用小剂量和制成肠溶片也增加上消化道出血的风险［21］。并且阿司匹林抵抗现象影响了其疗效，多项临床试验证实与临床事件相关［22］。本实验中冠心舒通胶囊抑制ADP、凝血酶诱导的血小板聚集在一定剂量范围内与双嘧达莫片或阿司匹林肠溶片疗效相当或强于两者。目前冠心舒通胶囊没有此两药类似的不良反应报道。至于冠心舒通胶囊在1.5 g/L浓度时效果无剂量相关性与其浓度过高对血小板的聚集有物理刺激有关。

本实验中去甲肾上腺素通过激活大鼠胸主动脉的α受体而起到收缩作用的。而KCl是通过诱导平滑肌细胞超极化，钙离子（Ca2+）通道开放，细胞外Ca2+内流，增加细胞内Ca2+的浓度，收缩血管。冠心舒通胶囊对此两者诱导的大鼠胸主动脉收缩都具有拮抗作用。

本研究针对血栓栓塞性疾病发生的血小板激活和血管舒缩功能障碍两个关键环节，通过实验研究证实冠心舒通胶囊能够抑制血小板的抗聚集作用和扩展胸主动脉，为临床上冠心舒通胶囊治疗血栓栓塞性疾病提供了依据。

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Anti-platelet aggregation and anti-atrial contractile effect of Guanxinshutong capsule

WANG Wei-ming1，2，XING Xiao-xue1，2，GAO Hui1，2，WANG Ling-yan1，2，LIU Min-na1，2，FAN Guan-wei1，2
（1.Research Centre of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300100，China）

［Objective］Our explicit objective was to study the function of Guanxinshutong capsule in the treatment of thromboembolic disease.［Methods］We determined the maximal aggregation ratio of Adenosine diphosphate（ADP）and Thrombin-induced platelet aggregation and inhibition rate.We further determined the diastolic ratio and KCl norepinephrine-induced contraction of rat aortic ring.［Results］We found that Guanxinshutong capsule had a potential inhibitory effect on platelet aggregation stimulated by ADP and Thrombin. Furthermore，it was found that Guanxinshutong could inhibit both noradrenaline and KCl-induced contraction of aortic ring and the consequent platelet aggregation.［Conclusion］Guanxinshutong capsule has a definite therapeutic effect against thromboembolic disease.

Guanxinshutong capsule；platelet；aortic ring

R285.5

A

1673-9043（2016）02-0104-05

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.02.09

王卫明（1978-），男，硕士研究生，研究方向为中药心血管药理作用研究。

樊官伟，E-mail：fgw1005@hotmail.com。

（2015-12-15）