苜草素对产蛋后期蛋鸡脂肪肝出血综合征的预防作用

高媛媛　杨长进　董晓芳*　佟建明　高玉鹏

(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2.西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100)



苜草素对产蛋后期蛋鸡脂肪肝出血综合征的预防作用

高媛媛1杨长进2董晓芳1*佟建明1高玉鹏2

(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2.西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100)

本试验旨在研究苜草素对产蛋后期蛋鸡脂肪肝出血综合征(FLHS)的预防作用。选用500日龄京红1号产蛋鸡1 008只，随机等分为7组，每组6个重复，每个重复24只鸡。Ⅰ组为对照组，饲喂常规饲粮(代谢能11.10 MJ/kg，粗蛋白质17.68%)；Ⅱ～Ⅶ组为试验组，饲喂高能低蛋白质饲粮(代谢能12.87 MJ/kg，粗蛋白质13.84%)，并分别在饲粮中添加0、200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素。试验期60 d。结果表明：1)与对照组相比，高能低蛋白质饲粮组(Ⅱ组)蛋鸡第30天时即可表现出明显的FLHS病理特征，第1～30天平均日采食量、产蛋率、蛋重、产蛋量显著降低(P<0.05)，料蛋比显著升高(P<0.05)，第1～60天趋势更加显著(P<0.05)；第42天蛋白高度和哈氏单位显著降低(P<0.05)。2)在高能低蛋白质饲粮中添加不同梯度的苜草素均能降低FLHS发生率，提高第1～60天的平均日采食量、产蛋率、产蛋量，降低料蛋比；提高第42天的蛋白高度、哈氏单位。由此可见，高能低蛋白质饲粮能够诱导蛋鸡FLHS，补充苜草素具有预防作用。

苜草素；蛋鸡；脂肪肝出血综合征

与哺乳动物不同，鸡脂肪酸合成的主要场所是肝脏[1]，仅有很少部分在脂肪组织进行。在产蛋期，蛋鸡肝脏大量合成脂肪，与载脂蛋白等结合形成极低密度脂蛋白，转运到肝外组织以满足蛋黄脂质沉积的需要。此时，肝脏代谢负担沉重，极易发生脂肪肝出血综合征(fatty liver hemorrhagic syndrome，FLHS)。FLHS可使整个鸡群产蛋率下降，造成经济损失[2]。目前，FLHS的诱发机制还不清楚，有研究报道，FLHS发生的主要原因为肝脏脂肪合成多于输出[3-4]。此外，蛋鸡肝脏内游离的脂肪酸较多，易被氧化产生自由基，破坏细胞生物膜结构，导致肝损伤[5]。

苜草素是紫花苜蓿经水提后喷雾干燥形成的植物饲料添加剂，主要成分为苜蓿多糖、苜蓿黄酮和苜蓿皂苷。饲粮中添加苜草素可以改善体内脂质代谢[6-7]，其中，苜蓿多糖具有抗氧化作用[8]，可保护肝脏防止自由基损伤[5]；苜蓿黄酮具有增强免疫和调节内分泌的功能[9]；苜蓿皂苷具有调控胆固醇代谢的作用[10-14]。目前，尚未见直接使用苜草素预防蛋鸡FLHS的报道。因此，本试验通过饲喂高能低蛋白质饲粮人工诱发FLHS，研究苜草素的预防作用，旨在为控制FLHS提供解决方案。

1　材料与方法

1.1试验材料

苜草素是以天然植物药物提取原理，采用破壁萃取技术从干燥的紫花苜蓿中提取的一种植物饲料添加剂，其主要有效成分为多糖(≥15%)、黄酮(≥5%)、皂苷(≥5%)，由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所提供。

1.2试验设计和试验饲粮

选取健康的500日龄京红产蛋鸡1 008只(购自北京正大畜牧有限公司)，随机分为7组，每组6个重复，每个重复24只鸡。密闭鸡舍阶梯式笼养，自由采食、饮水，光照时间为16 h/d，自动控制舍内温湿度，温度为(22±3) ℃，相对湿度为45%～65%，按正常免疫程序免疫接种。预试期7 d，试验期60 d。

7组试验蛋鸡中，Ⅰ组为对照组，饲喂常规饲粮(代谢能11.10 MJ/kg，粗蛋白质17.68%)；Ⅱ～Ⅶ组为试验组，饲喂高能低蛋白质饲粮(代谢能12.87 MJ/kg，粗蛋白质13.84%)，并分别添加0、200、400、600、800、1 000 mg/kg的苜草素。所有饲粮均为玉米-豆粕型，试验饲粮组成及营养水平见表1。

1.3检测指标和方法

1.3.1产蛋性能指标的测定

试验期每天观察鸡只健康状况，以重复为单位，记录每天产蛋情况并称重，每周结料1次。计算平均日采食量、产蛋量、产蛋率、蛋重和料蛋比。

1.3.2蛋品质指标测定

试验期每2周末，取当天每个重复所有鸡蛋测定蛋品质。

蛋壳强度测定采用蛋壳强度测试仪(Model-Ⅲ,Robotmation Co. Ltd.,Tokyo,Japan)；蛋壳厚度测定采用蛋壳厚度检测器(Model P-1,Ozaki MFG.Co.Ltd.,Tokyo,Japan)；蛋白高度、哈氏单位及蛋黄颜色测定采用蛋品质分析仪(EMT-5200,Robotmation Co. Ltd.,Tokyo,Japan)。

1.3.3蛋鸡肝脏病变指标的测定

试验第30天和第60天，每个重复取4只蛋鸡，每组24只蛋鸡，禁食12 h后空腹称鸡体重，并翅下静脉采血，3 000 r/min离心10 min，制备血浆，-20 ℃冻存；采血后麻醉处死，小心取出整个肝脏，用预冷的生理盐水冲洗上面血渍，然后用滤纸擦干并称重记录，取5 g肝组织，锡箔纸包装，液氮速冻，-20 ℃冻存。

肝脏指数(%)=(肝脏湿重/活体重)×100。

肝脏出血指数和FLHS发生率观测：参照董晓芳等[15]试验的划分标准，将本试验肝脏出血程度划分为4级：0=没有出血，1=有少数出血点或斑，2=有明显的出血区或血肿；3=有广泛的局灶性出血区或大出血。2、3级判为FLHS鸡，1级为亚临床FLHS鸡。肝脏出血分级见图1。

表1　试验饲粮组成及营养水平(风干基础)

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provides the following per kg of diets：VA 7 500 IU，VD32 500 IU，VE 15 IU，VK 2 mg，VB64 mg，VB120.01 mg，烟酸 niacin 20 mg，核黄素 riboflavin 4 mg，硫胺素 thiamine 2 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 5 mg，生物素 biotin 0.1 mg，叶酸 folic acid 1 mg，Se 0.2 mg，Mn 63.6 mg，Fe 45 mg，Cu 6 mg，I 0.4 mg，Zn 34 mg。

2)营养水平均为计算值。Nutrient levels are calculated values.

A：正常肝 normal liver；B：1级肝出血 first-degree hepatorrhagia；C：2级肝出血 second-degree hepatorrhagia；D：3级肝出血 third-degree hepatorrhagia。

图1肝脏出血分级

Fig.1Classification of liver hemorrhage

1.4数据统计分析

试验结果用平均值±标准差或平均值表示。采用SAS 9.2统计软件进行单因素方差分析，Duncan氏法进行多重比较，以P<0.05为差异显著水平。

2　结　果

2.1苜草素对蛋鸡生产性能的影响

由表2可知，试验第1～60天，高能低蛋白质饲粮组(Ⅱ组)平均日采食量显著低于对照组(P<0.05)，添加600 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组平均日采食量显著高于高能低蛋白质饲粮组(P<0.05)；高能低蛋白质饲粮组产蛋率显著低于对照组(P<0.05)，添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组产蛋率显著高于高能低蛋白质饲粮组(P<0.05)；高能低蛋白质饲粮组蛋重显著低于对照组(P<0.05)；高能低蛋白质饲粮组料蛋比显著高于对照组(P<0.05)，添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组料蛋比显著低于高能低蛋白质饲粮组(P<0.05)；高能低蛋白质饲粮组产蛋量显著低于对照组(P<0.05)，添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组产蛋量显著高于高能低蛋白质饲粮组(P<0.05)。

表2　苜草素对蛋鸡生产性能的影响

续表2项目Items时间Time/d对照组Controlgroup苜草素添加水平Polysavonesupplementallevel/(mg/kg)02004006008001000产蛋量Eggmass/(g/d)1～3030．4±1．5a22．1±1．5c23．5±1．6bc25．7±3．3b24．6±2．1bc25．0±1．5b25．3±2．1b31～6032．1±3．5a19．7±1．9c23．2±3．9b23．7±1．5b23．8±2．1b22．9±1．5b22．2±2．5bc1～6031．1±1．9a21．0±1．1c23．4±2．0b24．8±2．3b24．2±2．0b24．1±1．3b23．9±2．2b

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2苜草素对蛋鸡蛋品质的影响

由表3可知，第42天，高能低蛋白质饲粮组蛋白高度显著低于对照组(P<0.05)，添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组蛋白高度显著高于高能低蛋白质饲粮组 (P<0.05)；第42天，高能低蛋白质饲粮组哈氏单位显著低于对照组(P<0.05)，添加200、400、600、800 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组哈氏单位显著高于高能低蛋白质饲粮组(P<0.05)。第28天和第42天，高能低蛋白质饲粮组及添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组蛋黄颜色显著高于对照组(P<0.05)；第14天，高能低蛋白质饲粮组及添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白质饲粮组蛋壳强度显著低于对照组(P<0.05)。

表3　苜草素对蛋品质的影响

2.3苜草素对蛋鸡肝脏病变的影响

由表4可知，第30天，高能低蛋白质饲粮组肝脏指数显著高于对照组(P<0.05)。第60天，高能低蛋白质饲粮组肝脏指数显著高于对照组(P<0.05)；高能低蛋白质饲粮组肝脏出血指数显著高于对照组(P<0.05)。本研究中，第30天，各组的FLHS发生率分别为10%、60%、26%、25%、21%、31%、40%，第60天，各组的FLHS发生率分别为0、47%、39%、27%、24%、22%、30%。

表4　苜草素对肝脏病变的影响

3　讨　论

3.1产蛋后期蛋鸡FLHS病理模型的建立

利用高能低蛋白质饲粮饲喂蛋鸡能够诱发蛋鸡FLHS。董晓芳等[15]采用代谢能13.46 MJ/kg、粗蛋白质13.0%的饲粮，饲喂36周龄海兰灰商品蛋鸡24 d即可诱发。本试验采用代谢能12.87 MJ/kg、粗蛋白质13.84%的饲粮饲喂产蛋后期蛋鸡30 d，蛋鸡表现出明显的FLHS病理特征。蛋鸡FLHS的发生与诸多因素有关，饲粮能量过高或蛋白质不足是其中之一。高能低蛋白质饲粮引起FLHS，可能有3条途径：1)在产蛋期，肝脏从头大量合成脂肪，与载脂蛋白等结合形成极低密度脂蛋白，转运到肝外组织以满足蛋黄对脂质的需要；当肝脏中脂肪合成速度大于向外转运速度时，过量的脂肪就会沉积在肝脏中；当蛋鸡采食高能低蛋白质饲粮后，合成的脂肪过多，由于低蛋白质饲粮的供给，从而使载脂蛋白合成减少，阻碍了肝脂肪的转运，造成肝脏脂肪的沉积，从而诱发病征[16]。2)蛋鸡采食高能低蛋白质饲粮，会使体内能量物质过高，从而使脂肪酸β氧化作用增强，产生大量的自由基，超过了机体的生理补偿能力，肝细胞受损，肝功能降低，发生脂肪肝[5]。3)蛋鸡采食高能低蛋白质饲粮，造成脂类物质的堆积，肝细胞线粒体功能下降，阻碍了呼吸链电子的传递，生成有毒有害物质，导致肝细胞损伤，形成脂肪肝[17]。

3.2苜草素对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

本研究中，与对照组比较，高能低蛋白质饲粮饲喂产蛋后期蛋鸡第1～30天时，其平均日采食量、产蛋率、平均蛋重、产蛋量显著降低，料蛋比显著升高，与前人研究结果[18]一致，饲喂第1～60天时，趋势更加显著。与高能低蛋白质饲粮组相比，第1～60天高能低蛋白质饲粮中添加600 mg/kg苜草素能够使蛋鸡平均日采食量增加，第1～60天添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素能够改善其引起的产蛋率降低、饲料利用率降低、产蛋量降低的情况。前人研究表明，饲粮中添加苜草素可促进动物生长发育，提高饲料转化率[6]。还有研究显示，随着苜蓿皂苷添加量的增多，蛋鸡采食量在一定程度上表现出上升的趋势[19]。另有研究报道，苜草素可显著降低58～65周龄蛋鸡的料蛋比[20]。此外，本研究中，高能低蛋白质饲粮组与对照组比较，高能低蛋白质饲粮饲喂产蛋后期蛋鸡第42天时，鸡蛋蛋白高度、哈氏单位显著降低，与前人研究结果[21]一致。与高能低蛋白质饲粮组相比，高能低蛋白质饲粮中添加200、400、600、800 mg/kg苜草素后，能够升高蛋白高度和哈氏单位。

本研究表明，添加苜草素能够改善高能低蛋白质饲粮引起的生产性能和蛋品质下降，这可能与苜草素的活性成分有关。苜草素的主要活性成分有多糖、黄酮、皂苷。蛋鸡长期进食高脂饲粮可能会降低血液雌激素水平进而引发产蛋率降低，而黄酮具有弱雌激素和抗雌激素活性双向调节作用，当雌激素水平低时，黄酮与雌激素受体结合表现出雌激素作用，从而改善高能低蛋白质饲粮引起的产蛋率下降的情况[22]。作为苜草素的另一重要成分，潘俊良[19]研究结果发现，苜蓿皂苷对提高蛋鸡采食量具有促进作用，这与本试验的研究结果一致。另外，有研究表明，苜蓿草粉可以提高鸡蛋哈氏单位[23]，这也与本试验的研究结果一致。

3.3苜草素对产蛋后期蛋鸡肝脏病变的影响

蛋鸡FLHS是由于脂肪代谢紊乱而造成肝脏脂肪堆积的营养性代谢疾病，目前对其发病机制还不清楚，但临床最典型特征是肝出血。本研究中，高能低蛋白质饲粮饲喂产蛋后期蛋鸡30 d，显著提高了肝脏指数，FLHS发生率为60%；而添加不同比例苜草素后，FLHS发生率显著降低，表明苜草素能够调控肝脏脂肪代谢。蛋鸡长期进食高脂饲粮，会使体内能量储存增加，体内胰岛素含量升高，胰岛素会激活乙酰辅酶A羧化酶α的表达，促进脂肪酸的合成，抑制脂肪的水解，这样就会导致肝脏堆积过多的脂肪[24]，过多的脂肪容易发生过氧化作用而产生过多的自由基，改变生物膜的功能和结构，导致肝脏损伤[25]；笔者认为这可能是高能低蛋白质饲粮饲喂蛋鸡导致FLHS发生的机制。有研究报道，苜草素能够降低肉仔鸡血液胰岛素水平，升高血液甲状腺激素水平，降低肝脏中脂肪酸合成酶mRNA的表达量，从而降低肝脏脂肪酸合成[26]；作为苜草素的重要成分，苜蓿皂苷能够降低动物对脂肪的消化吸收，降低肝脏脂肪酸重新合成的原料乙酰辅酶A含量，进而导致肝脏脂肪酸合成减少[19]；此外，苜蓿皂苷具有抗氧化作用[19]，苜草素的另一重要成分苜蓿多糖也具有清除自由基的抗氧化作用[8]；笔者认为这可能是苜草素能够降低蛋鸡FLHS的机制。

4　结　论

高能低蛋白质饲粮中添加200、400、600、800 和1 000 mg/kg苜草素在一定程度上可降低FLHS发生，综合各个方面添加600 mg/kg苜草素预防FLHS效果最好。

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(责任编辑武海龙)

Prophylactic Effects of Polysavone on Fatty Liver Hemorrhagic Syndrome of Laying Hens in Late-Phase

GAO Yuanyuan1YANG Changjin2DONG Xiaofang1*TONG Jianming1GAO Yupeng2

(1. Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2. College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling 712100, China)

This experiment was conducted to investigate the prophylactic effects of polysavone (alfalfa extract) on fatty liver hemorrhagic syndrome (FLHS) of laying hens in late-phase. A total of 1 008JinghongNo. 1 laying hens aged 500 days were randomly divided into 7 groups, with 6 replicates per group and 24 hens per replicate. Hens in group Ⅰ (control group) were fed a common diet (metabolic energy 11.10 MJ/kg; crude protein 17.68%), while hens in groups Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ, Ⅵ and Ⅶ (experimental groups) were fed high-energy and low-protein diets (metabolic energy 12.87 MJ/kg; crude protein 13.84%) supplemented with 0, 200, 400, 600, 800, 1 000 mg/kg ploysavone, respectively. The experiment lasted for 60 days. The results were as follows: 1) compared with the control group, feeding a high-energy and low-protein diet without polysavone for 30 days induced FLHS, at the 1 to 30 days, the average daily feed intake (ADFI), laying rate, egg weight and egg mass were significantly decreased (P<0.05), and the ratio of feed to egg was significantly increased (P<0.05), and at the 1 to 60 days, the trend was more obvious (P<0.05); at the 42 days, the albumen height and Haugh unit were significantly decreased (P<0.05). 2) Adding different gradients of ploysavone in high-energy low-protein diet could decrease the incidence rate of FLHS; increase the ADFI, laying rate, egg mass at the 1 to 60 days, decrease the ratio of feed to egg; increase albumen height and haugh unit at the 42 days. In conclusion, high-energy low-protein diet can induce FLHS in laying hens, while supplement of ploysavone can prevent the induction of FLHS.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(10)：3153-3160]

polysavone; laying hens; fatty liver hemorrhagic syndrome

, associate professor， E-mail: xiaofangd1124@sina.com

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.10.017

2016-04-11

“十二五”国家科技支撑计划课题(2013BAD10B04)；国家蛋鸡产业技术体系建设专项经费(CARS-41-K16)；中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS08)

高媛媛(1989—)，女，山西柳林人，硕士研究生，研究方向为动物营养与饲料科学。E-mail: gaoyuanyuan312@126.com

董晓芳，副研究员，硕士生导师，E-mail: xiaofangd1124@sina.com

S831

A

1006-267X(2016)10-3153-08