反相高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片含量分析

王文义 李绍娜

反相高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片含量分析

王文义 李绍娜

目的 建立单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片中两主药成分含量测定的反相高效液相色谱法方法。方法 采用反相高效液相色谱法。色谱条件：色谱柱：Agilent ZOBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：流动相：甲醇-0.1%二乙胺水溶液-冰醋酸（40:60:4）；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：235 nm；进样量：20 μl。结果 在选定色谱条件下单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片中辅料对两主药无干扰，单硝酸异山梨酯和阿司匹林分别在12～60 μg/ml内、15～75 μg/ml内，峰面积与浓度线性关系良好，相关系数分别为r=0.9999（n=5）、r=0.9999（n=5）；平均回收率依次为99.90%、100.02%，相对标准偏差（RSD）依次为0.02%、0.32%；重复性试验RSD依次为0.06%（n=6）、0.27%（n=6）。结论 本方法简便，准确可靠，专属性强，可用于单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片的含量测定。

反相高效液相色谱；单硝酸异山梨酯；阿司匹林；含量测定

单硝酸异山梨酯为新一代硝酸异山梨酯类抗心绞痛药物［1］，可通过扩张外周血管，尤其是增加静脉血容量，减少回流量，降低心脏前后负荷，而减少心肌耗氧量；同时还可通过促进心肌组织血流重新分布而改善缺血区血流供应。临床常用于防治慢性心绞痛。小剂量阿斯匹林对血小板聚集具有特异抑制作用，能明显减少周围动脉内阻塞性血栓形成，两者合用，可以有效提高单硝酸异山梨酯的治疗效果［2］。在单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片的质量研究过程中，本研究采用反相高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片中单硝酸异山梨酯和阿司匹林含量。经药品质量标准分析方法验证，本法简便、准确、专属性强，可用于单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片的含量测定。

1 材料与仪器

1.1材料 单硝酸异山梨酯对照品（中国药品生物制品检定所，其纯度为100.0%，批号：100694-201302）；阿司匹林对照品（中国药品生物制品检定所，其纯度为100.0%，批号：100113-201405）；单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片（制剂试验室提供，规格：单硝酸异山梨酯60 mg:阿司匹林75 mg，批号：160501、160502、160503）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，二乙胺为分析纯。

1.2仪器 Agilent1100高相液相色谱仪；VWD检测器。

2 方法与结果

2.1色谱条件与色谱图 色谱柱：Agilent ZOBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%二乙胺水溶液-冰醋酸（40:60:4）；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：235 nm；进样量：20 μl。在上述条件下，理论塔板数均应大于3000，单硝酸异山梨酯峰、阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合要求。对照品、样品HPLC色谱图见图1。

图1　对照品（A）和样品（B）色谱图（1.单硝酸异山梨酯；2.阿司匹林；3.水杨酸）

2.2系统适用性试验 在上述色谱条件下，精密称取对照品溶液进样，记录色谱图，理论板数按阿司匹林峰计为7180，按单硝酸异山梨酯峰计为5818。单硝酸异山梨酯与水杨酸峰分离度为15.24，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度为7.74。

2.3辅料干扰试验 取处方量辅料适量（相当于阿司匹林15 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇-水（40:60）的混合溶剂适量，振摇使主药溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果表明辅料不干扰单硝酸异山梨酯与阿司匹林的测定。方法专属性良好。HPLC图谱见图1。

2.4线性范围 取单硝酸异山梨酯与阿司匹林对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释成每1毫升含单硝酸异山梨酯1.2 mg与阿司匹林1.5 mg的溶液作为储备液。精密量取储备液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 ml置于10 ml容量瓶中，用甲醇-水（40:60）的混合溶剂定容至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，分别取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，将峰面积与浓度进行线性回归。结果表明：单硝酸异山梨酯与阿司匹林进样量分别在12～60 μg/ml及15～75 μg/ml范围内与峰面积均呈良好的线性关系，回归方程分别为：A=914.1C+28.466，r=0.9998；A=4997.8C+140.253，r=0.9999（n=5）。

2.5供试品溶液的稳定性 按含量测定方法，取含量测定项下的样品，分别在0、1、2、4、6 h进行测定，记录峰面积，单硝酸异山梨酯RSD为0.5%，阿司匹林RSD为1.5%，说明样品溶液在6 h内稳定。

2.6精密度试验 取含量测定项下的对照溶液连续进样6次，以单硝酸异山梨酯与阿司匹林峰面积计算，单硝酸异山梨酯相对标准偏差（RSD）为0.05%，阿司匹林为0.32%。

2.7回收率试验 根据处方比例精确配制含单硝酸异山梨酯与阿司匹林各为标示量80%、100%、120%的样品9份，按含量测定项下方法操作，得平均回收率，单硝酸异山梨酯为99.90%；阿司匹林为100.02%。

2.8重复性试验 取含量项下样品平行分析6次，单硝酸异山梨酯的RSD为0.06%，阿司匹林的RSD为0.27%。

2.9含量测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量细粉（约相当于单硝酸异山梨酯12 mg）置100 ml容量瓶中加甲醇-水（40:60，pH=3.0）的混合溶剂适量，振摇使主药溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取单硝酸异山梨酯与阿司匹林对照品适量，使用甲醇-水（40:60，pH=3.0）溶解并定量稀释制成每1毫升含单硝酸异山梨酯0.12 mg与阿司匹林0.15 mg的溶液，作为对照品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各20 μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算供试品中单硝酸异山梨酯与阿司匹林含量。3批样品中单硝酸异山梨酯与阿司匹林含量见表1。

表1　3批样品中单硝酸异山梨酯与阿司匹林含量（%）

3 讨论

3.1单硝酸异山梨酯无明显吸收特征 中国药典和USP有关阿司匹林和水杨酸的高效液相色谱测定法中的检测波长多采用276 nm和300 nm。但在这2个波长下，单硝酸异山梨酯的响应值非常低［2］，为了兼顾单硝酸异山梨酯的检测，参照相关文献［3-4］，选择235 nm波长作为检测波长，以甲醇-0.1%二乙胺水溶液-冰醋酸（40:60:4）为流动相，在此试验条件下，两种主药均有较好的响应值，并且空白辅料在此波长处无吸收，不干扰主药的测定。

3.2样品配制时应选用甲醇-水（40:60，pH=3.0） 混合溶剂可降低阿司匹林的水解速度，保证了检测结果的准确性。

［1］ 蒋金富，龚伟，扬中泽.HPLC法测定5-单硝酸异山梨酯渗透泵片含量［J］.药物分析杂志，2010，30（8）:1482-1483.

［2］ 吕莉.HPLC法同时测定复方单硝酸异山梨酯阿司匹林片含量［J］.药物分析杂志，2002，22（1）:41.

［3］ 张涛，严复，赵一玫.HPLC用于复方单硝酸异山梨酯阿司匹林缓释片的质量分析［J］.中国药学杂志，2003，38（7）:530-532.

［4］ 崔颖，吕凌，陆宇，等.HPLC法测定复方单硝酸异山梨酯缓释片中单硝酸异山梨酯和阿司匹林的含量［J］.安徽医药，2003，7（2）: 131-132.

Determination of aspirin sustained release tablets by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography

Wang Wenyi Li Shaona

Objective RP-HPLC method for the determination of two main components in aspirin sustained release tablets.Methods Reverse phase high performance liquid chromatography.Chromatographic condition:chromatographic column:Agilent ZOBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；mobile phase: mobile phase: methanol -0.1% aminoethane solution of two acetic acid （40:60:4）；column temperature:30 C；flow rate:1.0 ml/min；detection wavelength:235 nm；sample size:20 μl.Results AT the validated method，the stability tests under various conditons were performed.The standard curve for isosorbide mononitrate and aspirin were liner over the ranges of 12～60 μg/ml（r=0.9999） and 15～75 μg/ml （r=0.9999），respectively.The average recovery for isosorbide mononitrate and aspirin were 99.90% and 100.02%，respectively.The relative standard deviation（RSD）were 0.02% and 0.32% respectively，The RSD of the repeatability were 0.06%（n=6） and 0.27%（n=6）.Conclusion This method is sample，accurate，specific and could be used in quality control of isosorbide mononitrate and aspirin incompound isosorbide mononitrate sustained-release tablets.

RP-HPLC；Lsosorbide mononitrate；Aspirin；Determination of conten

R927.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.10.003

山东绿因药业有限公司，山东临沂 276017