西藏林芝地区猪瘟流行的抗原及免疫抗体检测

2016-11-11罗润波王刚云旦平措益西旺扎索朗斯珠

中国兽医杂志 2016年8期

关键词：头份养猪猪瘟

罗润波，王刚，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大学农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000）

西藏林芝地区猪瘟流行的抗原及免疫抗体检测

罗润波，王刚，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大学农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000）

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病，是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类16种传染病之一，我国亦将其列为一类传染病，是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。

按照农业部国家动物疫病强制免疫计划和省属要求，猪瘟免疫抗体检测采用正向间接血凝试验（IHA）或者酶联免疫吸附试验（ELISA）2种方法［1-3］，其中，ELISA应用最广。针对我国目前猪瘟的流行现状及特点做好免疫监测，保持猪群处于较高的群体免疫水平，坚决淘汰CSFV隐性感染种猪，是猪场有效防控猪瘟的重要手段［4-7］。为了解林芝地区猪场猪群的猪瘟病毒感染情况和疫苗免疫状况，笔者分别采用PCR技术和ELISA方法对猪场300头份猪的组织样品和800头份血清样品进行了猪瘟病毒和猪瘟抗体的检测，现报道如下。

1材料与方法

1.1试验材料血清：随机采集西藏林芝地区米林县、墨脱县、朗县、察隅县、工布江达县5个县的猪场和散养猪血清800头份。

组织：随机采集西藏林芝地区米林县、墨脱县、朗县、察隅县、工布江达县5个县的猪场和散养猪组织300头份。

1.2试剂猪瘟病毒抗体（IgG）诊断试剂盒和猪瘟病毒抗原（CSFV-Ag）检测试剂盒，购自深圳市绿诗源生物技术有限公司，批号：20140601。

1.3主要仪器隔水式恒温培养箱，购自上海三发科学仪器有限公司，型号为为GNP-9050；酶标分析仪，购自深圳雷杜生命科学股份有限公司，型号为RT6100；高速离心机centrifuge5804由德国

Eppendorf生产；PCR仪my cycleTM、电泳仪、凝胶成像系统均由美国Bio-Rad生产；移液器由德国Eppendorf生产。均由西藏大学农牧学院高原动物疫病检测中心实验室提供。

1.4方法

1.4.1ELISA法检测猪瘟抗体对采集的全血样本分离血清后，按照ELISA试剂盒诊断说明书中的方法规范操作。

1.4.2PCR法检测猪瘟对采集的组织病料进行处理后，按照猪瘟病毒抗原（CSFV Ag）定量检测试剂盒说明书的要求规范操作。

1.5判定标准

1.5.1ELISA法判定标准临界值=0.4，在酶标仪上测各孔的OD值，试验成立的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.7，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.1；样品OD值≥0.4判断为阳性；样品OD值＜0.35时判断为阴性；0.35到0.4之间为可疑。

1.5.2PCR法判定标准进行PCR检测，电泳检测结果在271 bp处出现条带判断为阳性，反之判断为阴性。

2结果与分析

2.1猪瘟ELISA抗体检测结果西藏林芝地区猪场和散养猪随机采集的800份血清中CSF抗体阳性率达86%，其中米林县阳性率为76%，墨脱县阳性率为97%，朗县阳性率88%，察隅县阳性率为78%，工布江达县为91%。结果表明，林芝地区5个县抗体水平较高，免疫效果较好。

2.2猪瘟PCR检测结果从林芝地区5个县中随机采集300份组织病料，按照说明书要求处理后进行猪瘟病毒PCR检测，300份样品中只有2份样品在271 bp处出现条带（见图1）。

3讨论

3.1本次试验应用ELISA法对西藏林芝地区米林、工布江达等5个县的800头份猪进行了猪瘟抗体检测，结果显示，林芝地区猪场和散养猪中CSFV血清抗体阳性率达86%，其中米林县为76%，墨脱县为97%，朗县为88%，察隅县为78%，工布江达县为91%。说明猪群抗体水平较高，免疫效果好，免疫工作做得较好。