LC-MS测定豆芽中的无根豆芽素的应用

◎赵丽燕（浙江华才检测技术有限公司，浙江 诸暨 311800）

LC-MS测定豆芽中的无根豆芽素的应用

◎赵丽燕
（浙江华才检测技术有限公司，浙江 诸暨 311800）

超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用快速准确测定豆芽中无根豆芽素的分析方法。样品经适当样品前处理后，用超高效液相色谱分离，三重四极杆质谱仪进行定性定量分析。结果表明：无根豆芽素在0.50～50.00 ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数为0.999，仪器检出限为0.01 ng/mL，定量限为0.04 ng/mL。实际样品加标不同浓度所得回收率范围为100.10%～112.20%，精密度R SD%范围为3.22%～6.53%。

豆芽；无根豆芽素；超高效液相色谱仪；三重四极杆质谱

6-苄基腺嘌呤是一种人工合成的植物生长调节剂，主要用于促进细胞分裂，促进果实生长，促进细胞增大，促进种子发芽等，是常说的“无根豆芽素”的最主要成分，在国际上被广泛应用于农业园艺，包括葡萄、苹果、水稻、西瓜等作物。但在我国，6-苄基腺嘌呤在豆芽生产上的应用，却经历了从“允许”到“禁止”的转变过程。目前，在国家已登记的农药目录中，找不到一款明确规定可在豆芽培育中使用的农药，这就意味着目前培育豆芽不能使用任何农药；而在6-苄基腺嘌呤严禁作为食品添加剂使用后，则意味着加工豆芽不能使用任何食品添加剂。国家质量监督检验检疫总局早在2011年就发布了《关于食品添加剂对羟基苯甲酸丙酯等33种产品监管工作的公告》，公告中明确指出，包括6-苄基腺嘌呤等33种产品，禁止作为食品添加剂出厂销售，食品生产企业禁止使用。添加含有6-苄基腺嘌呤的添加剂后，豆芽不仅产量会大为提高，生产周期也会大幅缩短，而且生产出来的豆芽更具卖相。人们如果长期食用添加了6-苄基腺嘌呤的食品，对生理机能和内分泌系统都会造成损害，并面临致癌、致畸形等危险。

1　试验部分

1.1仪器和试剂

LCMS-8050联用系统；高速冷冻离心机；超声波振荡器；匀质器；超纯水仪（密理博）；甲醇（色谱纯），甲酸（质谱级），6-苄基腺嘌呤（标准品）；豆芽购买自菜市场。

1.2分析条件

1.2.1液相色谱条件

分析仪器：LC-30A系统；色谱柱：Shim-pack XR-ODS Ⅲ；流动相：A-水（含0.1%甲酸），B-甲醇；洗脱方式：梯度洗脱；流速：0.4 mL/min；柱温：40 ℃。

1.2.2质谱条件

分析仪器：LCMS-8050；离子源：ESI，正离子扫描；离子源接口电压：4.5 kV；雾化气：氮气2 L/min；干燥气：氮气18 L/m in；扫描模式：多反应监测（MRM）。

1.3标准溶液配制

1.3.1标准储备液

精密称取6-苄基腺嘌呤对照品0.01 g置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度即得标准储备液1.0 mg/mL，于-18 ℃下保存。

1.3.2标准中间液

取100 μ L 6-苄基腺嘌呤标准储备液于10 m L容量瓶中，用水稀释配制成浓度为10 μ g/m L的中间储备液。

1.3.3标准工作液

用水稀释上述标准中间液，配成5个不同浓度的系列标准工作液，浓度分别为0.50、1.00、5.00、 10.00 ng/mL和50.00 ng/mL，采用外标法进行定量。

1.4样品前处理方法

称取2.00 g事先粉碎好的豆芽样品（精确到0.01 g），加入10 mL含体积分数为0.1%乙酸的乙腈溶液，涡旋30 s，混匀，超声15 min，加入2.00 g无水硫酸镁，再加入0.50 g无水乙酸钠，涡旋混匀，以1万r/min离心5 min，移出上清液，60 ℃旋转蒸发至近干，加入2 mL甲醇水溶液（3∶7，v/v）溶解，用0.45 μ m滤膜于进样小瓶中，待LC-MS/MS测定。

2　结果分析

2.1标准品的MRM色谱图

6-苄基腺嘌呤0.50 ng/mL的MRM色谱图（见图1），6-苄基腺嘌呤的标准工作曲线（见图2）。

图1　6-苄基腺嘌呤0.50 ng/mL的MRM色谱图

图2　6-苄基腺嘌呤的标准工作曲线图

2.2线性关系

按标准系列工作液进行测定，建立外标定量法，线性相关性良好，相关系数为0.999。由软件算出信噪比，按照3倍信噪比和10倍信噪比分别作为仪器检出限和定量限结果，计算所得结果为6-苄基腺嘌呤仪器检出限为0.01 ng /mL，定量限为0.04 ng/mL。

2.3基质加标实验

图3为市售豆芽按照1.4中样品制备方法所得MRM检测色谱图，由图3可知该市售豆芽检出含有无根豆芽素6-苄基腺嘌呤含量为3.20 μ g/kg。豆芽基质加标0.50 μ g/kg的6-苄基腺嘌呤MRM色谱图如图4所示。豆芽基质加标不同浓度标样，所得回收率范围为100.10%～112.20%，精密度RSD%范围为3.22%～6.53%（见表1）。

表1　豆芽加标6-苄基腺嘌呤所得回收率结果表（n=3）

图3　市售豆芽MRM检测色谱图图

图4　豆芽加标0.5 μ g/kg MRM检测色谱图

3　结论

LCMS-8050联用测定豆芽中无根豆芽素的分析方法。6-苄基腺嘌呤在0.50～50.00 ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数为0.999，实际样品加标所得回收率范围为100.10%～112.20%，精密度RSD%范围为3.22%～6.53%。结果表明液质联用仪建立无根豆芽素分析方法具有简便、快速、灵敏度高的特点，可以满足检测需求。

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.食品中6-苄基腺嘌呤的测定高效液相色谱法（GB/T 23381-2009）[S].北京：中国标准出版社，2009.

[2]浙江省质量技术监督局.无公害豆芽 第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定（DB33/T 625.3-2007）[S]，2007.

[3]北京市质量技术监督局.DB11/T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2，4-滴、赤霉素、福美双的测定[S]，2006.

Application of LC-MS in the Determination of Bean Sprout in Bean Sprouts

Zhao Liyan
（Zhejiang Huacai Detection Technology Co.，Ltd.，Zhuji 311800，China）

Using ultra high performance liquid chromatography LC-30A and three mass quadrupole mass spectrometer LCMS-8050 to quickly and accurately determine the bean sprouts in the analysis method without root，samples were treated before the appropriate sample，qualitative and quantitative analysis was performed by using ultra performance liquid chromatography and three quadrupole mass spectrometer. The results showed that there was a good linearity in the concentration range of 0.50～50.00 ng/mL，the correlation coefficient was 0.999，the detection limit of the instrument was 0.01 ng/mL，and the limit of quantification was 0.04 ng/mL. The recovery rate of the actual samples spiked with different concentration ranged from 100.10% to 112.20%，and the precision of RSD% ranged from 3.22% to 6.53%.

Bean sprouts； No root bean sprouts； Ultra high performance liquid chromatography； Three quadrupole mass spectrometry

O657.63

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.028