硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的急性毒效应评价

杨 熠，高 超，任丽娟，帕力达·亚森，马晓洋，米克热木·沙衣布扎提

（新疆农业大学，新疆 乌鲁木齐 830052）

硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的急性毒效应评价

杨 熠，高 超，任丽娟，帕力达·亚森，马晓洋，米克热木·沙衣布扎提

（新疆农业大学，新疆 乌鲁木齐 830052）

通过对小鼠进行硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合应用的急性毒效应评价，初步探讨这2种抗菌药联合应用的合理性，以期为进一步评价其安全指标提供可靠依据。经查证，硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD50为1 973.95 mg/kg，其95%可信限为1 969.22～1 978.71 mg/kg；氟苯尼考对小鼠腹腔注射的LD50为636.68 mg/kg，其95%可信限为538.5～735.1 mg/kg，该试验利用等效应线图法求出硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药时的LD50。试验表明，硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药中，硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD50为510.51mg/kg，其95%可信限为437.52～595.66 mg/kg；氟苯尼考对小鼠腹腔注射的LD50为765.60 mg/kg，其95%可信限为656.15～893.31 mg/kg。结果显示，硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合应用后的LD50剂量直线交点落在95%可信限上限之外，即这2种抗菌药的联合用药产生毒效应颉颃，初步认为联合使用具有一定的合理性与可靠性。

半数致死量；联合用药；硫酸卡那霉素：氟苯尼考

联合用药（drug combination）是指为了达到治疗目的而采用的2种或2种以上药物同时或先后应用。因用药品种多，可以使药物相互作用的概率增加，可能增强或降低药物疗效，甚至产生不良反应。一般认为，化学物质的联合作用可分为相加作用、协同作用、颉颃作用和独立作用4种类型。联合用药在临床上的应用相当普遍，如钙离子颉颃剂联用ACEI或ARB，在控制血压还有逆转左心室肥厚和重构、抗动脉粥样硬化、保护血管内皮功能、减少蛋白尿等方面均具有优势［1］；抗高血压药物与非降压药物如他汀类降脂药物、阿司匹林等药物合用，可使患者减少动脉硬化、血管栓塞等高血压并发症，对高血压治疗极为有益［2］。联合用药所引起的药物相互作用可能使药物效应改变，这种改变既可能是效应强度的变化，也可能是作用性质的改变，从而对药物的有效性和安全性产生影响［3］。因此，联合用药的基本原则是：①选择药代动力学和药效学上可以互补的药物；②避免联合应用降压原理相近的药物；③联合治疗应较单药治疗提高疗效，加强靶器官保护；④减少、抵消不良反应；⑤长效和长效药物联合应用；⑥简化治疗方法，尽可能降低费用［4］。联合用药可以发挥药物的协同抗菌作用以提高疗效、延迟或减少耐药菌的出现、扩大抗菌范围，并且联合用药可减少个别药物的剂量，从而减少毒副反应。各种污染物进入环境中几乎都是以混合物的形式存在的，引起的联合毒性作用越来越受到人们的关注。

笔者通过收集大量用药处方，发现在临床上联合应用抗菌药是应对多重感染等疾病的常用方法。笔者查阅大量文献后发现，在各种抗菌药联合用药上，目前还没有硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的研究。为了探讨这2种抗菌药联合用药时的效果，并对硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的安全性给予客观评价，笔者分别找出2种抗菌药的LD50和95%可信限范围，即硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD50为1 973.95 mg/kg，其95%可信限为1 969.22～1 978.71 mg/kg；氟苯尼考对小鼠腹腔注射的 LD50为 636.68 mg/kg，其 95%可信限为538.5～735.1 mg/kg，并利用等效应线图法求出联合用药时的LD50，然后对硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的急性毒效应进行了初步探讨，以期为今后进一步开展这2种抗菌药联合用药的研究提供可信依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验药物：10 mL∶1.0 g硫酸卡那霉素注射液（上海骑骠动物保健品有限公司），批号：（2011）090161211；10 mL∶1.5 g 氟苯尼考注射液（上海骑骠动物保健品有限公司），批号：（2012）090162547。

1.1.2 实验动物：健康昆明系小鼠100只，雌雄各半，体重16～21 g，由新疆地方病学研究所实验动物中心提供。

1.1.3 器材：PL2002电子天平［梅勒特—托利多仪器（上海）有限公司］。

1.2 试验方法

1.2.1 预试验：挑选健康昆明系小鼠50只，雌雄各25只，等分为2大组，各大组随机等分为5小组，每小组5只，进行预试验，硫酸卡那霉素和氟苯尼考腹腔注射，按估计剂量给药，确定正式试验的剂量梯度。找出100%与0的半数致死量为试验的上下限剂量。

1.2.2 正式试验：挑选健康昆明系小鼠50只，于试验前饥饿6～10 h，雌雄各25只，等分为2大组，各大组随机等分为5小组，每小组5只。

注射前先用蒸馏水将药物配成公比为1.4的一定浓度的溶液，采用硫酸卡那霉素腹腔注射（5个剂量组：1 000、714、510、364、260 mg/kg）和氟苯尼考腹腔注射 （2个剂量组：1 500.00、1 071.42 mg/kg）方式进行（见表 1、表 2）。

注射后3 h再喂食，但可以喂水。注射时如有立即死亡的，要另补小鼠。给药后观察记录小鼠的死亡情况，观察时间为1周，对死亡小鼠及时进行大体剖解。

表1 硫酸卡那霉素用药剂量

表2 氟苯尼考用药剂量

1.2.3 数据处理：按照寇氏法［5］计算LD50及其95%可信限。1931年，Karber提出寇氏法，由于它计算复杂，当时并没有得到广泛推广。1963年，孙瑞元设计了合理的试验，改进并发展了寇氏法，使其计算简化，即为LD50的综合计算方法，后称之为改良寇氏法［6］。

当含有0和100%死亡率，各组动物数相等，各剂量组的组距等比或剂量对数等差时，即用下述基本公式计算LD50：

当不含0和100%死亡率时，即用下述公式计算LD50：

以上各式中，i为组距，即相邻2组剂量对数剂量之差；Xm为最大剂量对数；P为各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示）；Pm为最高死亡率；Pn为最低死亡率；q为各组剂量存活率，q=1-p；∑p为各剂量组死亡率之和；n为各组动物数，此处单位为只；Sx50为 lg LD50的标准误［7］。

等效应线图法以纵坐标表示一种化学毒物的剂量范围，以横坐标表示另一种化学毒物的剂量范围，分别将2种化学毒物在纵坐标与横坐标上的LD50值及95%可信限的上下限值连成一条直线，此后再以等效应剂量通过动物试验求出2个化学毒物混合后的LD50值，分别在相应的坐标线上找到各自剂量的位置，并由相应剂量点作垂直线，视其交点所落的位置，进行评定。如交点正好落在2个化学毒物的95%可信限的上下两条线之间，表示为相加作用；如交点落到95%可信限以下，则表示为协同作用；如若交点落到95%可信限上限直线之外，则表示颉颃作用［8］。

表3 硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药中硫酸卡那霉素的LD50测定结果

表4 硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药中氟苯尼考的LD50测定结果

2 结果

经数据处理可知，硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药对小鼠腹腔注射的LD50分别为510.15 mg/kg（见表 3）和 765.60 mg/kg（见表 4）。评定硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的等效应线图见图1。

图1 硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的等效应线图

在进行硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药给小鼠腹腔注射时，小鼠发生死亡的时间与剂量浓度相关，浓度最高的剂量组注射后2～3 min便开始有小鼠死亡，随着浓度的递减，死亡数量也呈递减趋势。再对死亡小鼠及时进行大体剖解，发现肾脏为暗灰色，心脏为暗红色，肝脏没多大变化。耐药抗过不死的小鼠采食和饮水均正常。

由表3和表4可以看出，硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药中，硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD50为 510.51 mg/kg，其 95%可信限为 437.52～595.66 mg/kg，氟苯尼考对小鼠腹腔注射的LD50为765.60 mg/kg，其 95%可信限为 656.15～893.31 mg/kg，硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合应用后的LD50剂量直线交点所落的位置在95%可信限上限之外，即这2种抗生素的联合用药产生毒效应颉颃。

3 讨论

硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药可产生毒效应颉颃，初步认为联合用药有一定的合理性。

联合用药会影响药物在体内的吸收，引起药物或其代谢产物在血液或组织中浓度增加或减少［9］，改变药物的药代属性，进而影响药效。随着一些由于联合用药不当所带来的严重后果的出现，如医疗事故的发生、某些药品的退市（米拉地尔、特非那定、阿司咪唑等）［10］，联合用药越来越受到人们的广泛关注，在药物发展过程中对于药物间相互作用研究的需要也越来越迫切。如附子与甘草联合应用，甘草能够显著地降低附子中乌头碱的含量，从而降低附子的毒副作用［11］；利托那韦和沙奎那韦联合用药能够显著提高它们抗病毒的作用［3］。联合用药可能通过影响与药物吸收、分布、代谢、排泄等相关的酶、转运体等，以改变药物的药代属性（生物利用度、分布特性等），调节体内动态药效物质的构成，改变药物的药效（协同作用、颉颃作用、毒副作用等），从而对药物的有效性、安全性产生影响［3］。

硫酸卡那霉素是临床上常用的氨基糖甙类抗生素［12］，对大多数革兰阴性杆菌如大肠埃希菌、变形杆菌、沙门菌、多杀性巴氏杆菌等有强大抗菌作用，金黄色葡萄球菌和结核杆菌也对其敏感［13］。硫酸卡那霉素内服可用于治疗敏感菌所致的肠道感染；肌肉注射用于敏感菌所致的各种严重感染，如败血症、泌尿生殖道感染、呼吸道感染、皮肤和软组织感染等［14］；生产中可用于缓解猪喘气病症状［15］。氟苯尼考是动物专用的氯霉素类新型广谱抗生素，它以甲砜基取代氯霉素分子结构中的硝基，消除了不可逆性再生障碍性贫血的毒副作用；以氟基取代甲砜霉素分子结构中α-甲基位上的羟基 （细菌产生耐药性的主要结合位点）［16-17］，不仅抗菌活性增强，而且对大部分耐氯霉素和甲砜霉素的菌株仍有活性。氟苯尼考在畜禽细菌病防治上的研究应用逐渐增多，但由于价格高、用量大，在一定程度上限制了其临床应用。

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Evaluation of the Acute Toxic Effects of Combined Medication of Kanamycin Sulfate with Florfenicol

YANG Yi，GAO Chao，REN Li-juan，Palida·Yasen，MA Xiao-yang，Mikeremu·Shayibuzhati
（Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China）

In order to evaluate the clinical rationality of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol and to provide solid basis for further assessment of its safety indicators,the acute toxic effects of the combined medication of these two drugs on mice was investigated.The reported LD50of kanamycin sulfate and florfenicol by intraperitoneal injection were 1 973.95 mg/kg and 636.68 mg/kg respectively,and the reported 95%confidence limit of kanamycin sulfate and florfenicol by intraperitoneal injection were 1 969.22-1 978.71 mg/kg and 538.5-735.1 mg/kg respectively.Based on these reported pharmacological parameters,the LD50of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol was determined by equivalent diagram method.The results showed that in the combined medication,the LD50of kanamycin sulfate by intraperitoneal injection in mice was 510.51 mg/kg and the 95%confidence limit ranged from 437.52 to 595.66 mg/kg;the LD50of florfenicol by intraperitoneal injection in mice was 765.60 mg/kg and the 95%confidence limit ranged from 656.15 to 893.31 mg/kg.Furthermore,the intersection of LD50dose line of combined medication of kanamycin sulfate and florfenicol fell outside the upper limit of 95%confidence limit,indicating that the combined medication of these two antibiotics produced antagonism of toxic effect.These results suggest the clinical rationality and reliability of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol.

LD50；drug combination；kanamycin sulfate；florfenicol

R969.2

A文章顺序编号1672-5190（2016）03-0007-04

2016-03-14

项目来源：国家自然科学基金资助项目（31460677）。

杨熠（1993—），女，硕士研究生，主要研究方向为兽医药理与毒理。

米克热木·沙衣布扎提（1960―），女，副教授，硕士，硕士生导师，主要研究方向为基础兽医学。

（责任编辑：慕宗杰）