不同产地鸡眼草总黄酮含量及动态变化研究

吴瑞云，黄丽丹，蒋　婷，梁宇萍，吴美琳，刘　虹，陈龙清

(1华中农业大学 园艺林学学院，园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉 430070；2中南民族大学 生命科学学院，南方少数民族地区生物资源保护与综合利用工程中心，武汉 430074)



不同产地鸡眼草总黄酮含量及动态变化研究

吴瑞云1,2，黄丽丹2，蒋婷2，梁宇萍2，吴美琳2，刘虹2，陈龙清1,*

(1华中农业大学 园艺林学学院，园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉 430070；2中南民族大学 生命科学学院，南方少数民族地区生物资源保护与综合利用工程中心，武汉 430074)

目的：对鸡眼草种质资源进行了总黄酮含量的测定和评价，并探讨了鸡眼草中总黄酮的动态变化规律. 方法：超声波辅助提取总黄酮，以三乙胺为介质紫外分光光度法考察了鸡眼草的总黄酮含量. 结果：不同产地鸡眼草总黄酮含量差异极显著，其中贵州凯里榕江鸡眼草为最高，贵州余庆龙溪鸡眼草含量最低；根、茎、叶的总黄酮含量差异极显著，由高到低为叶>茎>根；鸡眼草中总黄酮的积累高峰为6、7、8月；鸡眼草干燥低温中存放，总黄酮含量远高于常温保存. 结论：鸡眼草叶片是合成和积累总黄酮的主要器官，夏季是采收鸡眼草的最佳时期并适宜低温干燥保存. 鸡眼草总黄酮含量不仅与产地和采收时间有关，而且与生境也有关.

鸡眼草；总黄酮含量；产地；动态变化

鸡眼草为蝶形花科鸡眼草属鸡眼草Kummerowiastriata(Thunb.) Schindl和长萼鸡眼草Kummerowiastipulacea(Maxim.) Makino的干燥全草 ，分布很广[1]. 民间应用历史悠久. 可治疗胃肠炎、痢疾、肝炎、夜盲症，泌尿系统感染、跌打损伤、疗疮疖肿等. 鸡眼草提取物具有多种生物活性，如抗炎、抗病毒、杀菌、抗肿瘤作用等[2]. 近年来，已从鸡眼草中分离得到多种化合物，主要成分为黄酮类化合物，包括染料木素、槲皮素、山柰酚、 木犀草素、芹菜素及其葡萄糖苷等[3,4]. 王春景等对鸡眼草抗氧化活性部位进行了筛选[5]，但是有关鸡眼草不同产地、有效成分含量动态等均还未见报道. 本研究首次对鸡眼草(Kummerowiastriata)不同产地、不同时间等的黄酮类化合物含量动态变化进行了分析，以期对鸡眼草药材的质量评价、质量控制和开发利用提供参考.

1　材料和方法

1.1材料和仪器

6月至11月(每月中旬)鸡眼草采于中南民族大学南湖校区，用于分析总黄酮含量的时间动态变化；不同产地鸡眼草于7、8月份野外采集，各采集30个样，采集后自然阴干，密封保存. 经中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为蝶形花科鸡眼草属鸡眼草Kummerowiastriata(Thunb.) Schindl.的干燥全草.

对照品：芦丁(槲皮素-3-O-芸香糖苷)标准品购于中国生物制品检定所，批号：100080-200707，供UV法测定，含量为92.5%. 其余试剂均为分析纯.

UV-2401分光光度计(日本岛津公司)，UV-752 分光光度计(上海分析化学仪器公司).

1.2实验方法

1.2.1样品预处理

所采集鸡眼草干品，研磨成粉末，过二号筛，充分混匀备用.

1.2.2标准溶液的制备

120℃下干燥至恒重的芦丁标准品10 mg，加入30 mL 70%的乙醇至50 mL容量瓶中，置水浴上微热溶解，放冷，加乙醇，摇匀配置成0.2 mg/mL芦丁标准液.

1.2.3标准曲线的制备

芦丁标准液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀. 不同梯度的芦丁标准液各5 mL，加1%三乙胺溶液至10 mL，摇匀，静置12 min后，以试剂空白作参比，在400 nm波长下测定吸光度. 经回归处理，求得回归方程总黄酮浓度在1.0～25.0 μg/mL范围内，相应吸光度有良好线性关系，回归方程为A=0.04258C-0.0138(r=0.9991).

1.2.4 鸡眼草总黄酮提取

鸡眼草粉末0.1 g，加入70%的乙醇10 mL，温度75℃，超声波功率500 W，提取45 min，放冷，称重，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，离心，取上清液[6].

1.2.5三乙胺法测定总黄酮含量

取供试品溶液0.5 mL，按文献[6]方法测定总黄酮含量.

1.2.6数据统计与分析

采用SPSS20.0和Excel软件进行总黄酮含量差异的方差分析[7].

2　结果与分析

2.1不同产地鸡眼草的总黄酮含量比较

供试鸡眼草样品不同器官中总黄酮含量有明显差异(p<0.01). 其中，叶中的质量分数为2.895%～2.167%，茎中为1.182%～0.968%，根中为0.198%～0.173% (表1).

表1　不同产地鸡眼草的总黄酮含量

其中以贵州凯里榕江所产鸡眼草含量最高，叶可达2.895%，茎1.182%；以贵州余庆龙溪所产鸡眼草含量最低，叶2.167%，茎0.968%；鸡眼草总黄酮含量从高到低的变化顺序是：1-贵州凯里榕江县>2-湖南吉首市龙山>3-湖北恩施>4-湖北英山县大别山>5-湖北武昌> 6-广西河池市都安> 7-广西桂林市恭城>8-安徽安庆市大观>9-广西崇左市龙州>10-贵州余庆县龙溪 (表1). 方差分析表明不同产地、不同部位总黄酮含量的差异具有显著性(p<0.01).可见总黄酮含量与供试样品的产地和器官直接相关.

2.2不同采集期鸡眼草的总黄酮含量比较

幼嫩期和花前期(6～8月)，鸡眼草的总黄酮含量均较高；花期(9月)总黄酮含量有所下降；果期(10月)、果后期(11月)，鸡眼草总黄酮含量均大幅度降低 (表2). 以上结果表明，总黄酮含量的差异与不同的采集时间直接相关. 根据鸡眼草的生长规律及实验结果，6、7、8月份含量较高，均可以采集入药. 方差分析表明不同采集期间总黄酮含量的差异达极显著水平(p<0.01). 以上结果说明总黄酮含量与供试样品的不同采集期直接相关.

表2　不同采集期鸡眼草总黄酮含量

2.3存储条件、时间不同对鸡眼草不同部位总黄酮含量的影响

将7月份采集于湖北武昌的鸡眼草的叶、茎、根研磨成粗粉，每间隔3个月测定总黄酮含量，连续12个月；并测定2年前鸡眼草样品，结果表明，在干燥低温(4℃)下存放，总黄酮含量均远高于常温自然存放(表3).

表3　不同存储条件、不同存储时间及不同部位的总黄酮得率

3　讨论

鸡眼草在我国分布广泛，本研究中，不同产地的鸡眼草总黄酮含量差异极为显著(p<0.01).除了贵州余庆县龙溪镇的鸡眼草之外，其他来自贵州榕江县、湖南龙山县、湖北(恩施市、英山县大别山及武汉市武昌区)的鸡眼草的总黄酮含量均比来自广西(都安县、恭城县、龙州县)、安徽安庆市的样品高，地理因素可能是影响种质资源的关键因素. 不同产地鸡眼草根、茎、叶的总黄酮含量测定结果均表明，叶>茎>根，差异极显著(p<0.01)，这表明总黄酮在不同器官中的积累量有显著差异.

采于贵州省余庆县龙溪镇鸡眼草总黄酮含量显著低于贵州省凯里榕江鸡眼草(p<0.01). 这可能与产地的气候因素等有关. 贵州省凯里市榕江县平阳乡位于国家级雷公山自然保护区南麓，属亚热带季风性湿润气候. 而同在贵州省、纬度接近的余庆县属亚热带温润季风气候；四季分明. 采于余庆县的鸡眼草药材较干燥、木质化程度较高可能受盛夏伏旱影响较大. 药用植物有效成分的积累受诸多因素的影响，植物的生境除气候因素之外，土质条件等可能对植物次生代谢成分的积累均有重大影响. 其生境如何具体影响鸡眼草的有效成分有待于进一步深入研究.

鸡眼草黄酮含量动态变化结果表明，鸡眼草在干燥低温(4℃)下存放，总黄酮含量均高于常温自然存放的含量；产地在武汉的不同生长发育时期鸡眼草的总黄酮含量各不相同，幼嫩期>花前期>初花期>盛花期>果期>果后期，因此盛花期以前总黄酮含量较高，鸡眼草均可以采集入药. 本研究在确定鸡眼草最佳采收期与产地上初步取得一定结果，但影响植物用药的安全与疗效的因素很多，比如季节、气候、海拔等，还需要进行更全面深入的研究.参考文献

[1]江苏新医学院. 中药大辞典(上册)[M]. 上海：上海人民出版社，1977：1215.

[2]《全国中草药汇编》编写组. 全国中草药汇编(上册)[M].2版. 北京：人民卫生出版社，2000：443.

[3]唐人九. 人字草黄酮类化学成分研究[J]. 华西药学杂志. 1996，11(1)：5-10.

[4]李胜华. 鸡眼草中黄酮类化学成分研究[J]. 中国药学杂志.2014，49(10)：817-820.

[5]王春景，胡小梅，张 鼎，等. 鸡眼草抗氧化活性部位的筛选及其黄酮和总酚含量[J]. 中药材，2014，37(5)：868-871.

[6]池玉梅，居羚，邓海山，等. 分光光度测定总黄酮法的适用性[J]. 分析化学, 2010，38：893-896.

[7]李云雁，胡传荣. 试验设计与数据处理[M]. 北京：化学工业出版社，2005：79.

Total Flavonoid Analysis and Flavonoid Accumulation Dynamics inKummerowiastriatafrom Different Areas

WuRuiyun1,2，HuangLidan2，JiangTing2，LiangYuping2，WuMeilin2，LiuHong2，ChenLongqing1

(1 Key Laboratory of Horticultural Plant Biology (Ministry of Education)，College of Horticulture & Forestry Sciences，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China；2 Engineering Research Centre for the Protection and Utilization of Bioresource in Ethnic Area of Southern China，College of Life Science， South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China)

Objective: To determinate and analyze the total flavonoids ofKummerowiastriata. collected in different places，and to analyze the variety trends of total flavonoids inK.striata. Methods: Using spectrophotometry with the medium of triethylamine，the contents of total flavonoids were determined by ethanol solution extraction assisted with ultrasonic. Results: The contents of total flavonoids inK.striatafrom different producing areas were significantly different，which was the highest inK.striatafrom Rongjiang，Guizhou province，but theK.striatafrom Yuqing，the same province showed the lowest content. The total flavonoids among leaf blade, stem and root system were significantly different and the sequence from high to low was leaf blade>stem>root system. The peak time of total flavonoids accumulation was June, July and August. The total flavonoids ofK.striatastored in low-temperature and dry places were much higher than that in usual storage. Conclusions: Leaf was the main organ for the biosynthesis and accumulation of total flavonoids inK.striata. Summer was the best time to harvestK.striata,and it is suitable to store at low-temperature and dry places. The results suggest that contents of total flavonoids relate not only to collecting place and collecting time，but also to plant biotope.

Kummerowiastriata；total flavonoid content；producing area；variety trends

2016-5-24*通讯作者陈龙清，研究方向：园林植物物质资源及其利用，E-mail:chenlq@mail.hzau.edu.cn

吴瑞云(1968-)，女，博士研究生，讲师，研究方向：药用植物资源学，E-mail:wurain2008@126.com

国家科学技术部科技基础性工作专项重点项目(2014FY110100)；中南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目(ZZY10008)

Q949.95

A

1672-4321(2016)03-0051-04