猪四种疫苗分点同步免疫与单苗免疫的效果对比试验

2016-10-29姚菊霞

甘肃畜牧兽医 2016年15期

关键词：分点猪链球菌免疫抗体

姚菊霞

（定西市动物疫病预防控制中心，甘肃定西　743000）

甘肃省首届兽医系统征文选登

猪四种疫苗分点同步免疫与单苗免疫的效果对比试验

姚菊霞

（定西市动物疫病预防控制中心，甘肃定西743000）

为了研究猪多苗分点同时免疫效果，探索一种切实可行的动物防疫新方法，以此提高基层动物防疫水平。本研究将口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌4种疫苗进行不同组合试验，即分别进行单苗、两两组合、三三组合、4种疫苗同时分点注射。试验分为15组，每组20头，用正向间接血凝试验和ELISA方法检测免疫抗体。结果表明：口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌4种疫苗分点同时注射产生的抗体水平，与单苗注射相比，差异不显著（P＞0.05），疫苗注射后产生的抗体效价相对较高且稳定，不同疫苗间产生的抗体干扰和拮抗作用不明显，且抗体合格率均在70%以上，达到了国家规定的免疫要求，因此该免疫接种方法可在实际工作中推广应用。

猪；疫苗；不同组合；分点注射；免疫抗体；合格率

近年来，随着畜牧业的快速发展，养猪业的规模和数量逐年增长，与此同时发生动物疫病的风险也在增加，部分地区出现了多种猪病的流行，且不断有新病出现［1］，从流行范围和危害程度来看，猪口蹄疫、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征仍然是目前危害养猪业的主要动物疫病。再加上其他畜禽重大疫病的流行和人畜共患病的暴发，使得动物疫病的防控形势异常严峻，也给各级畜牧部门如何做好动物防疫工作提出新的挑战和要求。加强动物疫病防控，提高动物疫病防制技术水平是搞好畜牧养殖业生产的关键，研究和推广这项技术，对提高养殖业经济效益，促进畜牧业可持续发展有着十分重要的意义。

国家对动物疫病防控工作高度重视，实施强制免疫的动物疫苗种类较多且逐年增加，目前正用于强制免疫的猪疫苗主要有口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等3种疫苗，采用“一畜一针，分次注射”传统免疫方法，不但增加了基层兽医工作者的工作量，加大了防疫工作难度，而且从近几年甘肃省通渭县免疫抗体监测情况来看，猪口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等疫病的免疫抗体效价较低。为了探索和创新动物免疫新方法，改进和提高动物防疫水平，2013～2015年，研究组在甘肃省通渭县开展了猪O型口蹄疫苗、猪瘟苗、猪繁殖与呼吸综合征苗、猪链球菌苗分组分点同时免疫试验，从而确定4种疫苗分点同时免疫的效果。

1　材料与方法

1.1试验动物

在甘肃省通渭县辖区随机选择5个存栏量在100头左右的养猪场，选取2～3月龄未经任何疫苗免疫的健康猪300头作为试验猪，免疫前对试验猪进行基础抗体滴度测定，所选试验猪猪瘟抗体检测阴性，口蹄疫感染抗体检测阴性，免疫抗体滴度低于1∶16。

1.2试验疫苗

猪口蹄疫O型灭活疫苗（O/MYA98/BY/2010株），由中农威特生物科技股份有限公司生产，批号为H141060J；猪瘟活疫苗（脾淋源），由山东绿都生物科技有限公司生产，批号为1412053；猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXA1株），由瑞普（保定）生物药业有限公司生产，批号为141216；猪链球菌病2型灭活疫苗，由上海海利生物技术股份有限公司生产，批号为20140609。

1.3检测试剂

O型口蹄疫抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号为20150511201；猪瘟抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号为20150512202；LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒，购自北京天之泰生物科技有限公司，批号为5-TTVETPRA-049；猪链球菌抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法），购自深圳市绿诗源生物技术有限公司，批号为20150501。

1.4试验分组

将从5个养猪场选取的300头试验猪，分别编号为1～300号，随机分为15组，每组20头，依次为第1组1～20号、第二组2～40号……第15组281～300号。

1.5免疫方法

按照表1所示，进行1～4种疫苗注射。单苗和2种疫苗免疫的注射部位为左右颈部；3种疫苗和4种疫苗同时分点免疫的注射部位为颈部左右和臀部左右各注射一针。对蓝耳病相关组，30 d采血后进行二次免疫。注射时严格消毒，规范操作。免疫剂量：口蹄疫疫苗2 ml/头、猪瘟活疫苗2 ml/头、蓝耳病灭活疫苗2 ml/头、猪链球菌苗2 ml/头。

表1　试验猪疫苗注射分组

1.6临床不良反应观察

所有试验猪在免疫注射后临床观察1～10 d，主要观察猪的精神和采食状况、体温是否正常和是否有其他严重不良反应等。

1.7免疫抗体检测

分别于免疫后15 d、30 d、45 d和60 d，经前腔静脉采血，分离血清，用于抗体检测。

1.7.1 O型口蹄疫抗体检测采用正向间接血凝试验，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：抗体效价≥1∶32，抗体阳性；抗体效价＜1∶32，抗体阴性。1.7.2猪瘟抗体检测采用正向间接血凝试验，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：抗体效价≥1∶32，抗体阳性；抗体效价＜1∶32，抗体阴性。

1.7.3猪繁殖与呼吸综合征抗体检测采用间接ELISA方法，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：IRPC值＞20.0为抗体阳性；IRPC值≤20.0为抗体阴性。

1.7.4猪链球菌病抗体检测采用ELISA方法，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：S/P值≥0.2为抗体阳性；S/P值＜0.2为抗体阴性。

1.8数据统计与分析

将检测数据按疫苗种类分类统计，口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌病均以抗体阳性率表示，并应用DPS数据处理系统中单因素随机分组方法进行方差分析［2］。

2　结果与分析

2.1临床观察

除个别猪只在疫苗注射后24 h内出现精神沉郁、体温升高、慢草不食、饮水少量等现象外，未见其他不良反应。出现副反应症状的主要是口蹄疫疫苗注射组，且与试验猪的个体情况相关，个体弱小、营养状况及体质差的反应较重；其他组未见明显临床症状。两两组合组、3种疫苗组合组、4种疫苗组合组与单苗注射组间未见明显差异，平均副反应率在10%以下。有临床症状的猪只在48 h内陆续全部恢复正常，未出现过敏死亡情况。

2.2不同免疫组口蹄疫抗体产生情况

从图1可以看出，除第5组和第13组外其他组试验于15 d时抗体水平均达到最高值，且维持时间较长，第60 d时仍维持高水平稳定态势，抗体阳性率均在70%以上。与其他组相比，第1组抗体水平较低，下降较快；第5、6、7、11、12组总体较稳定；且第1组与第15组之间差异显著（P＜0.05），除第1组外其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

2.3不同免疫组猪瘟抗体产生情况

从图2中可以看出，第8组、14组、15组在15 d时抗体达到最高值，其他各组试验抗体均于30 d时达到最高值；各组试验抗体合格率于15 d均已达到了国家规定70%的免疫要求，且维持时间较长；所有试验组于60 d时抗体水平均有所下降，但仍大于70%。方差分析显示，第15组与其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

图1　口蹄疫抗体检测结果

图2　猪瘟抗体检测结果

2.4不同免疫组猪繁殖与呼吸综合征抗体产生情况

从图3中可以看出，注射猪繁殖与呼吸综合征疫苗的8个组在免疫后15 d、30 d内的抗体阳性率都为0；二免后45 d检测时，各组抗体阳性率在75%以上，除第10组和第11组外均达到了峰值，60 d时抗体水平仍保持较高水平稳定态势。方差分析显示，第15组与其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

图3　猪繁殖与呼吸综合征抗体检测结果

2.5不同免疫组猪链球菌抗体产生情况

从图4中可以看出，每组试验动物在15 d时已产生较高水平的抗体，30～45 d抗体达到最高值，60 d时抗体水平仍维持较高水平，均达到国家规定免疫要求70%。方差分析显示，第15组与其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

图4　猪链球菌病抗体检测结果

3　讨论

猪O型口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪链球菌4种疫苗两两组合、三三组合、或4种疫苗同时分点注射，平均副反应率在10%以下，与单苗注射组相比，临床症状差异不显著。各种组合组试验动物出现精神沉郁、慢草不食、体温变化等一般免疫副反应的比例最高约为10%，有发病临床症状的比例为1%，和传统免疫相比，并未增加免疫副反应。出现副反应症状的猪只与试验动物的个体情况相关，个体弱小、营养状况及体质差的反应较重。出现一般副反应的猪只，在48 h内很快自行恢复，未出现死亡等严重副反应。

第15组口蹄疫免疫抗体水平高于第1组，维持时间较长且稳定，表明口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪链球菌病疫苗同时分点免疫组产生的口蹄疫抗体水平要优于单苗免疫组［3，4］。猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪链球菌病疫苗产生的抗体效价均较高，在抗体产生的整个时期，单苗注射组和4种疫苗同时注射组在抗体达到最高值时抗体合格率均能达到或超过国家规定的免疫标准70%以上，且维持时间也较长。从本次试验结果看出，一畜2苗、3苗、4苗分点同时注射，对抗体不会产生拮抗作用，反而在一定程度上还有促进协同作用［5，7］。

从本次试验看出，口蹄疫疫苗产生的抗体稳定均匀；猪瘟疫苗产生抗体峰值的时间较迟，一般在免疫后4周左右；猪蓝耳病疫苗一次免疫的效果不佳，因此，在以后的防疫工作中，需进行2次加强免疫工作。

口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌苗分点同时免疫对4种抗体的产生没有显著影响，没有增加免疫副反应，通过综合分析，可在实际工作中推广应用“猪一畜多苗多点同时联合注射”免疫操作程序。

本次试验试验规模较大，抗体监测时间较短，对分点免疫注射后抗体消长规律未能进行深入跟踪检测，需在以后的工作中继续深入研究。

［1］崔尚金.2005年我国猪病流行现状及特点［J］.猪业科学，2006，（1）：34-35.

［2］唐启义.实用统计分析及其DPS数据处理系统［M］.北京：科学出版社，2002.

［3］杨慧，封林，黎强，等.口蹄疫和猪瘟疫苗同时免疫注射猪的试验效果［J］.四川畜牧兽医，2008，35（10）：29-31.

［4］华树明.猪口蹄疫、猪瘟、高致病性蓝耳病分点免疫注射效果观察［J］.兽医导刊，2008，（4）：23-24.

［5］沈艳丽，蔡金山，赵志刚，等.猪多种疫苗分点同时注射的免疫抗体检测试验［J］.山东畜牧兽医，2011，32（1）：9-10.

［6］马睿麟，蔡金山，沈艳丽，等.猪瘟、口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征等多种疫苗免疫试验［J］.畜牧与兽医，2010，42（10）：79-82.

［7］张长龙，严宝英，贾文孝，等.猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验初探［J］.中国畜牧兽医文摘，2009，30（7）：28-29.

［本文获甘肃省首届兽医系统征文比赛一等奖］

（编辑：赵鹏飞）