兔耳创伤后创面即刻外用药物预防瘢痕增生的实验研究

兔耳创伤后创面即刻外用药物预防瘢痕增生的实验研究

杨正兵，乔 柱
（雅安市人民医院烧伤整形科 四川 雅安 625000）

目的：本实验观察兔耳创伤后创面立即外用曲安奈德与维拉帕米预防瘢痕增生的疗效。方法：健康的新西兰大耳白兔48只，制作兔耳创伤模型，随机分为A，B，C三组，每组16只计创面32个，A组为外用曲安奈德霜，B组外用维拉帕米霜，C组为生理盐水对照组。术后第一天起用药至4周后兔耳上皮化，切取瘢痕组织计算瘢痕增生指数，观察masson染色胶原纤维的形态分布及成纤维细胞数量。结果：A组与B组比较差异有统计学意义（P＜0.05），A组、B组与C组比较，差异皆具有统计学意义，差异显著（P＜0.01）。结论：兔耳创伤后创面立即外用曲安奈德与维拉帕米能有效预防抑制瘢痕增生，曲安奈德作用强于维拉帕米，但曲安奈德可能使皮肤萎缩，甚至坏死。

曲安奈德；维拉帕米；创伤；成纤维细胞；增生性瘢痕；实验研究

较深的烧伤创伤创面愈合后必然形成瘢痕，严重影响患者的功能及外观。针对瘢痕的治疗，目前无良好治疗措施，常采用手术切除联合其它辅助方法如按摩［1-2］、药物注射、加压［3］、冷冻、激光［4］、超声波、硅凝胶膜［5］等。临床常用经证实有效的药物如糖皮质激素［6］，钙通道阻滞剂等。Lee［7］，京萨［8-9］等研究证实肌注或者外用维拉帕米均能有效抑制兔耳瘢痕增生。在创伤后立即外用药物能否有效预防抑制瘢痕增生，依此本实验在兔耳创伤后即用曲安奈德与维拉帕米至创面上皮化愈合，观察其预防抑制瘢痕增生的疗效。

1　材料和方法

1.1实验动物：由四川农业大学动物实验中心提供兔48只，兔耳完好，雌雄不计，年龄8～12月，体重为2.0～2.5kg。由四川农业大学动物实验中心代为饲养。

1.2主要仪器及试剂：动物实验手术器械包（四川农业大学动物实验中心），三星数码相机（自备），曲安奈德（北京曙光药业有限责任公司），维拉帕米（上海禾丰制药有限公司），无菌生理盐水（四川科伦药业股份有限公司）。

1.3兔耳创伤创面模型制作方法：本实验动物模型的制作是依据李荟元［10］研究设计的瘢痕模型，创面形成方法：去除兔耳腹侧1.5cm×1.5cm全层皮肤，刮除软骨膜。

1.4实验动物分组：实验共48只兔分3组，每组16只共32个创伤模型。A组为外用曲安奈德（将凡士林99g加热熔化，缓缓加入到1g曲安奈德注射液，冷却即得1%的维拉帕米霜），B组为外用维拉帕米（将凡士林99g加热熔化，缓缓加入到1g维拉帕米注射液，冷却即得1%的维拉帕米霜），C组为生理盐水对照组（将凡士林99g加热熔化，缓缓加入到1g无菌生理盐水，冷却即得1%的生理盐水霜）。

1.5用药方法：术后第1d，A组32个兔耳创伤创面外用曲安奈德霜，每日一次，每次均匀涂抹薄层药霜在创面上，至兔耳上皮化愈合共计4周。B组C组同A组外用方法，B组外用维拉帕米霜、C组生理盐水霜至兔耳上皮化愈合共计4周。

1.6取标本及处理：实验第29d，利用空气栓塞处死实验动物，无菌条件下切取兔耳标本，带有部分正常皮肤软组织及软骨膜。将标本固定在10%的甲醛溶液里，用石蜡包埋，行HE染色及Msson染色。

2　观察指标

2.1大体观察：每天观察并拍照记录创面手术区情况，肉芽生长情况，创面愈合情况，瘢痕形成情况如：组织的颜色、质地、大小、厚度等。大体表现：采用温哥华瘢痕评分标准［11］。

2.2瘢痕增生指数HI：依据Morris等［12］提出的公式HI=A/ B，A为瘢痕凸起最高点到兔耳软骨表面的垂直距离，B为瘢痕周缘正常皮肤皮缘到兔耳软骨表面的垂直距离。

2.3成纤维细胞计数FBI：依据Weidner等［13］对瘢痕组织的成纤维细胞计数方法，首先在低倍镜下寻找HE染色标本中清楚显示并且成纤维细胞数最多的区域，再通过高倍镜下观察计数4个不同区域，结果取均数，此数为该实验动物的成纤维细胞数目。

3　统计学方法

本实验采用PASW Statistics18（SPSS18.0）软件进行统计分析，组间比较采用了t检验，并且按检验水准a=0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义，P＜0.01差异显著；P＞0.05则差异无统计学意义，可认为实验组与对照组对瘢痕的预防抑制作用无明显差异。

4　结果

4.1一般观察：A组给药组肉眼可见瘢痕平，软，颜色淡，斑块体积小；B组瘢痕略平，稍软，颜色稍淡，斑块体积较小；C组对照组瘢痕高出皮表，硬，色红，斑块体积大。

4.2 Masson染色观察：A组、B组胶原纤维排列整齐，形态纤细；C组胶原纤维蓝染颜色深，纤维排列紊乱，粗大。

4.3瘢痕增生指数及成纤维细胞计数比较：通过对表1及表2数据进行软件分析，A组与B组比较P＜0.05，差异有统计学意义；A组、B组与C组比较，差异皆具有统计学意义，差异显著（ P＜0.01）（见表1、表2）。

表1　瘢痕增生指数（Hl）比较

表2　成纤维细胞计数比较

5　讨论

曲安奈德抑制前胶原基因的表达，减少透明质酸的含量及胶原酶抑制剂，抑制胶原蛋白的合成，促进胶原纤维降解，减少胶原纤维含量，直接抑制成纤维细胞DNA，抑制肉芽组织形成［14］，抑制瘢痕形成。钙通道阻滞剂维拉帕米主要作用于Rho激酶（Rho激酶参与如平滑肌收缩、抑制细胞增殖、形成应力纤维、细胞骨架的重构等多种细胞功能活动，在细胞分化与迁移以及细胞凋亡中发挥相应的药理作用［15］）、肌球蛋白轻链激酶、蛋白激酶A、C、G等多种蛋白激酶，抑制细胞内游离钙离子活动，减少产生炎症介质而减轻炎症反应，减轻损伤并保护受损的组织。维拉帕米引起成纤维细胞球形化，减少胶原及纤维粘连蛋白合成，重塑细胞外间质而抑制瘢痕增生［16］。另外，许宁［17］等研究表明，维拉帕米增强Smad7表达，抑制成纤维细胞α-Smad7 mRNA及细胞外基质合成。刘冲［18］等认为，钙通道阻滞剂能够改变损伤处血管分布状况，直接影响瘢痕形成。陶灵［19］等提出，抑制成纤维细胞的增殖和分化以及抗瘢痕组织纤维化在瘢痕增生形成过程中起重要作用。综上机制，认为维拉帕米通过抑制Rho激酶、抑制蛋白激酶活性，抑制细胞增殖，减轻组织器官重构，有效地抑制成纤维细胞的增殖。

深度创伤烧伤创面瘢痕愈合是必然结局，能否在创伤即期即使用药物预防抑制瘢痕的增生。基于此，本实验通过对兔耳创伤后创面立即外用曲安奈德与维拉帕米，从大体及细胞学结果表明，曲安奈德与维拉帕米皆能预防抑制瘢痕增生，曲安奈德对瘢痕的预防抑制作用强于维拉帕米，但曲安奈德可使皮肤萎缩，甚至坏死；维拉帕米副作用不明显。本实验表明，兔耳创伤后创面立即外用曲安奈德与维拉帕米能预防抑制瘢痕增生，但还存在如用药频次、用药量、以及用药的最佳浓度还有待进一步研究。

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编辑/张惠娟

Experimental study on the prevention of scar hyperplasia by immediate external use of drugs in the wound of rabbit's ears

YANG Zheng-bing， QIAO Zhu
（Department of Burn and Plastic Surgery，Ya'an People's Hospital， Ya'an 625000，Sichuan，China）

Objective The experiment observes the effect of immediate external application of triamcinolone acetonide and verapamil on the prevention of scar hyperplasia in the early stage of traumatic wound of rabbit ears. Methods 48 healthy New Zealand white rabbits were randomly divided into A and B and C three groups， 16 in each group， 32 traumatic wounds altogether. Group A was used triamcinolone acetonide，group B was used verapamil as the experimental group， and Group C was used normal saline as control group. From frst day after surgery to 4 weeks ， traumatic wounds of rabbit ear were epithelial，the scar tissue was taken to calculate the hypertrophic index and observe Masson staining of collagen fiber morphological distribution and the number of fbroblasts. Results There was difference between group A and group B（P ＜ 0.05）. There was signifcant difference between group A，B and group C（P ＜ 0.01）. Conclusion It is concluded that triamcinolone acetonide and verapamil can effectively prevent the formation of hypertrophic scar in rabbit ears. Triamcinolone acetonide has a better effect of inhibition than verapamil on the formation of hypertrophic scar. But triamcinolone acetonide may cause skin atrophy or even necrosis.

triamcinolone acetonide；verapamil；trauma； fbroblast； hypertrophic scar； experimental study

R619+.6

A

1008-6455（2016）08-0050-02

2016-05-12

2016-07-21