MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的对比研究

彭珍桂 卢小玲

（广西医科大学 广西南宁 530022）

MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的对比研究

彭珍桂 卢小玲*

（广西医科大学 广西南宁 530022）

目的对比分析MTT法和 CCK-8法检测人肝癌细胞活性的准确性。方法：同时采用MTT法和 CCK-8法检测顺铂浓度在0.05、0.5、5umol/ L时，肝癌细胞的致死率。结果：MTT法检测的偏大较大，而CCK-8法始终保持较小的偏差，CCK-8法要比MTT法更为准确，且存在统计学差异显著（P＜0.05）。结论：CCK-8法检测肝癌细胞优越于MTT法，可以在检测其他细胞增殖上推广应用。

MTT法 CCK-8法 肝癌细胞

近些年来MTT比色法因其简单、经济、快速等特点,已逐渐成为一种分析细胞活性和其生长增殖的常用方法［1,2］。但在检测过程中产生的蓝紫色结晶物,属于水不溶性的,在吸出培养基时往往带出结晶或细胞,进而使实验结果误差偏大。CellCountingKit-8（简称CCK-8）,该方法过程当中主要是通过一种脱氢酶转化形成水溶性的晶体,不会出现不溶物,进而进行比色检测,所以误差不会太大［3,4］。本研究就是针对MTT法和CCK-8法基于人肝癌细胞活性进行初步探讨,并对比分析两种方法。

1 材料和仪器

1.1 细胞株人肝癌细胞株（购自北京协和医学院）

1.2 仪器和试剂

CO2培养箱（日本）,酶标仪（美国）,生物洁净安全柜（中国）。MTT溶解在无菌PBS（pH7.4,NaCl 0.8%,KCl 0.02%,Na2HPO40. 14%,NaH2PO4 0.02%）,其浓度为0.5g/L。CCK-8试剂盒,自行采购于辉瑞制药有限公司,SDS配制方法：首先将其溶解在10mmol/ L的盐酸中,最后定容保证其终浓度在10%；DMSO自沧州东丽精细化工公司采购；注射用顺铂 （Adriamycin,ADM）从上海辅仁堂药业股份股份有限公司采购；10%胎牛血清生产自天津生物工程材料有限公司；RPMI1640培养基采购自美国 GIBCO公司。

2 方法

使用10%胎牛血清的RPMI-1640培养液配制顺铂浓度在0.05、0.5、5umol/L,使用0.25%的胰酶进对对数期的人的肝癌细胞进行消化,并进行计数,然后将其置于96孔培养板内,最后调整每孔细胞的数量为2×103,在37℃进行培养24h,之后吸掉上清液,再在每孔中加入200uL含顺铂的RPMI-1640培养基,实验均设立对照组和空白组,在37℃培养72h,然后同时采用MTT法和CCK-8法进行检测。

3 结果

由上表可以清晰地看出,在致死率较低时,MTT法检测的偏大较大,平行不是很好,而CCK-8法始终保持较小的偏差,因此相比来说,CCK-8法要比MTT法更为准确,且存在统计学差异显著（P＜0. 05）。

表1 MTT法和CCK-8法检测顺铂对人肝癌细胞株细胞的增殖影响

4 结论

由于MTT法操作简单,快速,并且比较经济安全所以在检测细胞增殖方面得到广泛应用。 但该方法操作过程中产生的不溶于水的结晶性物质甲,加之在加入有机溶剂前,需要将培养瓶中的培养基全部清洗干净,这增加了出现偏差的概率。CCK-8方法,其检测过程中生成的物质全是具有高度的水溶性,且不需要使用裂解液对其溶解, 与此同时,也不用将上清清洗干净,因此步骤就大大的得到简化,所以误差也不会太大,并且提高了检测的敏感性。

［1］张丹，南黎，任玲，张扬，薛楠，刘欢叶.CCK-8法和MTT 法评价医用抗菌不锈钢细胞毒性的比较研究［J］.口腔医学，2012，32：5-8.

［2］吴窈画，谈书华，范超超，李正华.MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析［J］.微生物学杂志，2011，31：67-72.

［3］谢光洪，许远靖，田武林，ed tl.β-HB对牛皱胃平滑肌细胞活性影响-MTT 法和 CCK-8 法的比较研究［J］.中国兽医学报，2013，33：436-8.

［4］秦庆华，尹承芬，董宁，张庆红，祝筱梅，姚咏明.噻唑兰法和CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖反应的比较［J］.感染炎症修复，2012；13：199-202.

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A

1674-2060（2016）03-0319-01

卢小玲