正交试验优化厚朴中厚朴酚及和厚朴酚提取工艺*

王　峥，李金城

(1 湘南优势植物综合利用湖南省重点实验室， 湖南　永州　425199；2 湖南科技学院，湖南　永州　425199)



正交试验优化厚朴中厚朴酚及和厚朴酚提取工艺*

王峥1,2，李金城2

(1 湘南优势植物综合利用湖南省重点实验室， 湖南永州425199；2 湖南科技学院，湖南永州425199)

利用正交试验法对中药厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的提取工艺进行了优化。采用乙醇回流提取法，以厚朴酚及和厚朴酚提得率为评价指标, 选择乙醇浓度、乙醇用量、提取时间及次数四个因素，采用正价设计法对提取工艺进行优化。最佳工艺为料液比为1:20、乙醇浓度为70%，提取时间为60 min，提取2次。此条件下提取得到的总酚为4.23%。通过正交设计法优选的厚朴提取工艺简单合理、稳定可行。

厚朴酚；正交试验；提取工艺

厚朴(MagnoliaofficanalisRehd．etWils) 为木兰科落叶乔木厚朴的干燥皮、根皮或枝皮，主要分布在湖北西部、 四川西南部、 陕南及甘南，是我国特有的常用珍贵中药材[1]。厚朴性温味苦辛，无毒，入脾、胃、大肠经，具有温中下气，燥湿消痰功效，我国很多民间验方如厚朴三物汤、大承气汤、平胃散、四七汤和栀子厚朴汤中都含有[2]。

1　实　验

1.1仪器与材料

中药材粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；集热式恒温加热磁力搅拌器，郑州长盛实验仪器有限公司；万分之一电子分析天平，长沙康源科技开发有限公司；高效液相色谱仪(岛津公司)。

厚朴药材(标本号为20140801)2014年采自永州江华县，经湖南科技学院姜红宇鉴定为木兰科植物厚朴MagnoliaoffisenalisRehd.etWils.的干燥干皮；厚朴酚对照品(批号为110730-201313)及和厚朴酚对照品(批号为110729-200412) 由中国食品药品检定研究院所提供；水为蒸馏水；乙醇为化学纯，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2试验方法

1.2.1提取溶剂、提取温度选择

乙醇和不同碱水对厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的提取率比较中，乙醇表现出更好的的提取效果[3]，同时考虑到工业生产的需要，选择乙醇作为提取溶剂。厚朴酚及和厚朴酚会随着温度升高结构易发生变化，因此温度选择70 ℃。

1.2.2提取工艺设计

表1　因素水平表Table 1　Factors lever

从单因素试验结果中选取了对提取试验影响较大的乙醇浓度、乙醇用量、提取时间及次数为参考因素，厚朴酚及和厚朴酚总含量为评价指标，选用L9(34)正交表进行实验，因素水平表见表1。

1.2.3提取工艺

精确称取5.0000 g厚朴干燥粉末(过60目筛)9份，按正交试验设计方案进行回流提取，抽滤，合并滤液，定容至250 mL容量瓶中备用。

1.2.4含量测定方法[4]

(1)色谱条件

流动相为甲醇-水(78:22)，流速1 mL/min ,柱温40 ℃，检测波长294 nm，进样量10 μL,固定相C18(5 μm)，色谱柱为：月旭Xtimate C18(4.6 mm×250 mm)

(2)标准曲线的绘制[5]：

厚朴酚标准曲线，计算回归方程：y=14976x+407.3(r=0.9999)，厚朴酚在0.01～0.05 μg范围内，厚朴酚峰面积与进样量有良好的线性关系。

和厚朴酚标准曲线，计算回归方程：y=8557.9x-1227.7(r=0.9993)，和厚朴酚在0.005～0.025 μg范围内，和厚朴酚峰面积与进样量有良好的线性关系。

(3)样品测定

取2.2项下各样品液各1 mL于100 mL容量瓶中，乙醇定容至刻度线，按照(1)色谱条件下进行检测。

1.3重复性试验

为进一步考察上述优选工艺的稳定性,按上述优化条件进行重复3次实验。精确称取5.0000 g厚朴干燥粉末(过60目筛)3份，按最佳工艺进行提取，制备供试品溶液，按(1)色谱条件进行测量。结果见表4。

2　结果与讨论

2.1正交试验结果

表2　正交实验结果Table 2　Results of orthogonal test

从正交试验结果表2中显示出各因素对总酚得率结果影响大小依次为乙醇浓度、提取时间、料液比，从表3方差分析表明,乙醇浓度对厚朴酚的含量有显著影响,料液比、提取时间影响较小。总酚提取随着乙醇浓度增加先呈现出增加的趋势，由于厚朴酚及和厚朴酚属于木脂素类化合物，极性中等的缘故，考虑提取成本的问题，因此乙醇浓度最佳选择70%；料液比对对提取影响较小，可能考虑在1:20时，总酚就能完全被提取出来，加大提取溶剂对提高提取率影响不大，考虑成本原因，最佳选择为1:20。提取时间上表现出总酚提取随时间增加出现下降趋势，可能由于厚朴酚及和厚朴酚长时间加热，结构易被破坏，因此提取时间不宜过长。综合考虑后，最佳提取工艺选择A2B2C1。

表3　方差分析表Table 3　Variance analysis

2.2重复性实验

为进一步考察上述优选工艺的稳定性,按上述优化条件进行重复3次实验。从结果表4可见三次提取总酚的RSD为为0.26%。

表4　重复性实验Table 4　Results of repeated experment

3　结　论

从上述试验结果中可得出乙醇提取厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的最佳工艺为：提取温度70、料液比为1:20、乙醇浓度为70%，提取时间为60 min，提取2次，此条件下提取得到的总酚为4.23%，重复性试验中厚朴酚及和厚朴酚的总得率RSD为0.26%。该工艺简单合理、稳定可行，为厚朴的开发利用提供一定的理论依据。

[1]崔乘幸,许光日,汤波,等.中药厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的提取研究[J].河南科技学院学报:自然科学版,2008,36(1):40-42.

[2]刘晓鹏,姜宇,向东山,等.厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的提取与测定[J].中国医院药学杂志,2007,27(5):694-696.

[3]张宝堂.98%纯度厚朴酚、和厚朴酚工业生产工艺研究[D].湖南：湖南中医药大学.2008.

[4]国家药典委员会.中国人民共和国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:252.

[5]李棣华. 厚朴正交提取工艺的初步研究[J].天津中医药,2005,22(1):68-69.

Optimization of Extraction Technology of Magnolol and Honoliol inMagnoliaeCortex by Using Orthogonal Test*

WANGZheng1,2,LIJin-cheng2

(1 Key Laboratory Comprehensive Utilization of Dominant Plants Resources in South Hunan,Hunan Yongzhou 425199;2 Hunan University of Science and Engineering,Hunan Yongzhou 425199, China)

The extraction technique for magnolol and honoliol inmagnoliaecortex was optimized by using orthogonal test. The alcohol extraction technique was studied by orthogonal design with the yield of magnolol and honoliol as the investigative indexes, with four factors of ethanol concentration, ethanol volume, extraction time and extraction times. Results showed that the optimum extraction technique was adding 20 times volume of 70% alcohol, decocting 2 times for 60 min each time. Under these conditions, the extraction of magnolol and honoliol in magnoliae cortex was 4.23%. The optimized extraction technique is simple, reasonable, stable and reproducible．

honoliol; orthogonal test; extraction technology

湖南省重点实验室资助项目(XNZW14C06)。

王峥(1988-)，女，硕士，讲师，研究方向：天然活性成分提取分离。

R284.2

B

1001-9677(2016)018-0088-02