醋白芍、炙甘草及其配伍载体中药效组分变化规律分析

朱广伟　张贵君　孙　奕　汪　萌　渠　磊　向　丽　鲁丽娜　武亚楠　杨颜芳　郑　婧

(1 中国中医科学院中药研究所，北京，100700； 2 北京中医药大学中药学院，北京，100102)



中药研究

醋白芍、炙甘草及其配伍载体中药效组分变化规律分析

朱广伟1张贵君2孙奕1汪萌2渠磊2向丽2鲁丽娜2武亚楠2杨颜芳2郑婧2

(1 中国中医科学院中药研究所，北京，100700； 2 北京中医药大学中药学院，北京，100102)

目的：研究醋白芍、炙甘草及其配伍载体中醋白芍及炙甘草药效组分的变化规律。方法：以醋白芍、炙甘草单味药及其药对为研究对象，采用水煎煮法制备供试品溶液，采用HPLC法测定。结果：醋白芍4种药效组分(氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷)含量分别为:醋白芍(1.07±0.12、0.36±0.02、2.00±0.21、0.37±0.03)mg/mL；醋白芍-甘草(1.89±0.11、0.86±0.05、3.25±0.13、0.52±0.03)mg/mL；醋白芍-炙甘草(1.90±0.09、0.87±0.04、3.30±0.24、0.52±0.01)mg/mL。炙甘草五种药效组分(甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素)含量分别为：炙甘草(6.53±0.25、2.17±0.33、0.52±0.21、0.48±0.23、0.09±0.03、9.79±0.65)mg/mL；炙甘草-焦白芍(5.13±0.32、2.11±0.21、0.47±0.12、0.57±0.22、0.12±0.02、8.40±0.75)mg/mL；炙甘草-炒白芍(6.47±0.33、2.67±0.23、0.56±0.23、0.60±0.23、0.12±0.01、10.42±0.78)mg/mL；炙甘草-醋白芍(8.76±0.35、3.10±0.43、0.79±0.32、0.76±0.34、0.15±0.05、13.56±0.99)mg/mL。结论：配伍影响或改变了药效组分的物理、化学性质，进而改变了药效组分的溶出，最终改变了药效组分在复方汤剂中存在状态。中药治疗作用的关键在于药效组分，包括药效组分的组成及各药效组分之间的比例。药效组分的组成不同，疗效也不同；药效组分的组成相同，但比例不同，疗效也不一样。不同组成的药效组分或不同比例的药效组分分别代表不同的中药，具有不同的临床疗效，其根源在于药效组分的不同，应加以区分。因此，对中药药效组分的研究与探讨是解析中药配伍机制的关键。

醋白芍；炙甘草；配伍载体；药效组分；变化规律

芍药甘草汤最早见于汉代张仲景《伤寒论·辨太阳病脉证并治》第29条，“……伤寒脉浮，自汗出，小便数，心烦，微恶寒，脚孪急，反与桂枝汤，欲攻其表，此误也。得之便厥、咽中干，烦躁吐逆者，作甘草干姜汤与之，以复其阳。若厥愈足温者，更作芍药甘草汤与之，其脚即伸……。”有柔肝舒筋、缓急止痛之功效，是历代传承常用中药。

中药中多种具有药理作用的化学成分的含量、比例决定着中药的疗效，这些成分即为中药的药效组分。药效组分之间相互作用、相互影响，从而改变其化学性质和溶解性[1-4]，最终发挥不同的临床疗效，其根源在于药效组分的不同。氧化芍药苷，芍药内酯苷，芍药苷，苯甲酰芍药苷，甘草酸，甘草苷，甘草素，异甘草苷，异甘草素为芍药甘草汤中存在的成分，研究较成熟，且均具有一定的解痉[5-9]、镇痛[5-9]功效，还有研究表明：甘草酸与芍药苷配伍，在镇痛、解痉、解热、抗炎[10]、抑制胃液分泌和松弛平滑肌方面均有协同增效作用，甘草酸可与中药中多种生物碱起化学反应生成不易溶解的沉淀物，既将这些沉淀物在体内缓慢分解而逐渐发挥药效，又可使药性发作较缓，从而降低副作用，同时，这九种药效组分均为水溶性成分，符合经方水煎特点。

本文在中药药效组分理论的指导下[11-15]，研究醋白芍或炙甘草单味药及其复方中药效组分的含量变化，以考查药效组分的影响因素，旨在揭示配伍与药效组分的对应性关系，为临床合理用药和建立中药药效组分质量评价标准提供科学依据。

1　材料与方法

1.1仪器Agilent1260高效液相色谱仪，HP真空脱气泵，HP四元泵，HP自动进样，HP柱温箱，HP DAD检测器；WRX-1S型BP110S电子分析天平；Agilent Extend-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

1.2受试药物氧化芍药苷(含量≥98%，批号130317)、芍药内酯苷(含量≥98%，批号130518)、芍药苷(含量≥98%，批号130815)、苯甲酰芍药苷(含量≥98%，批号131227)、甘草酸(含量≥98%，批号121201)、甘草苷(含量≥98%，批号131029)、甘草素(含量≥98%，批号121102)、异甘草苷(含量≥98%，批号130110)、异甘草素(含量≥98%，批号131020)，均购自成都普菲德生物技术有限公司。醋白芍，炒白芍，焦白芍，甘草，炙甘草，购自河北省安国路路通中药饮片有限公司，经北京中医药大学中药学院中药鉴定系张贵君教授鉴定分别为毛莨科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根、豆科甘草属植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根茎及其醋炙品、蜜炙品，生炒品和炒焦品。供试品配伍见表1。

图1　(A)白芍水煎液、(B)甘草水煎液、(C)芍药甘草汤水煎液、(D)混合对照品溶液的HPLC图谱

注：1-氧化芍药苷2-芍药内酯苷3-芍药苷4-甘草苷5-异甘草苷6-甘草素7-苯甲酰芍药苷8-异甘草素9-甘草酸

表1　供试品配伍

表2　醋白芍、炙甘草及其配伍载体中9个药效组分的标准曲线方程、相关系数和线性范围

表3　醋白芍及其配伍载体中4种药效组分含量(mg/mL，n=3)

注:与醋白芍组相比，P<0.05。

表4　醋白芍及其配伍载体中4种药效组分的比例(n=3)

2　方法

2.1对照品溶液的制备精密称取9种对照品适量，分别加甲醇配制成含甘草苷1.02 mg/mL，异甘草苷1.03 mg/mL，甘草素1.12 mg/mL，异甘草素1.03 mg/mL，甘草酸1.10 mg/mL，芍药苷1.06 mg/mL，氧化芍药苷1.05 mg/mL，苯甲酰芍药苷1.18 mg/mL，芍药内酯苷1.17 mg/mL的单一对照品溶液。依次精密量取以上8种对照品溶液(甘草酸除外)2.5 mL、1 mL、1 mL、0.1 mL、4.5 mL、1 mL、1 mL、1.5 mL置同一25 mL容量瓶中，再加入11.01 mg的甘草酸对照品，加甲醇稀释至刻度，配制成含甘草苷102 μg/mL，异甘草苷41.2 μg/mL，甘草素44.8 μg/ml，异甘草素4.12 μg/mL，甘草酸440 μg/mL，芍药苷190.8 μg/mL，氧化芍药苷42 μg/mL，苯甲酰芍药苷47.2 μg/mL，芍药内酯苷70.2 μg/mL的混合对照品溶液，冰箱保存，备用。

2.2供试品溶液的制备按照表1配伍，称取各种配置比例的药材，加10倍量的水，先浸泡30 min，再煮沸30 min，过滤分离出煎煮液，最后再加10倍量水煎煮30 min。合并煎煮液，浓缩成浓度为0.1 g/ml的原药材溶液，取该浓缩液1 mL至10 mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，静置20 min，分出上清液，即得浓度为0.01 g/ml的原药材溶液，为供试品，进样前用0.45 μm滤膜过滤。

2.3色谱条件色谱柱为Agilent Extend-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，0～5 min，5%～10%A，5～12 min，10%～14%A，12～15 min，1.4%～16%A，15～20 min，16%～18%A，20～25 min，18%～20%A，25～30 min，20%～22%A，30～40 min，22%～25%A，40～50 min，25%～40%A，50～60 min，40%～55%A，60～65 min，55%～5%A，体积流量1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃，检测波长为230 nm(氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸)，276 nm(甘草苷、甘草素)，360 nm(异甘草苷、异甘草素)。色谱如见图1。

2.4线性关系考察精密吸取1.2.1中混合对照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，分别进样。按2.3色谱条件测定各成分的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，对照品进样量(μg)为横坐标(X)，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表2。

2.5精密度试验取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍药材，制备供试品溶液，按照2.3色谱条件进样，连续6次，测定并计算氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素9个药效组分峰面积的RSD值。RSD分别为1.65%、1.75%、0.58%、1.91%、1.64%、1.20%、1.02%、1.40%、1.28%，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍药材，制备供试品溶液，按照2.3色谱条件进样，分别于配制后0、4、8、10、12、24 h进样，测定并计算氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素9个药效组分峰面积的RSD值。RSD分别为1.96%、1.19%、1.32%、1.91%、1.53%、1.17%、1.43%、1.43%、1.29%，表明24 h内供试品溶液稳定性良好。

2.7重复性试验取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍药材，平行制备6批次供试品溶液，按照2.3色谱条件进样，测定并计算氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素9个药效组分峰面积的RSD值。RSD分别为1.00%、1.83%、1.84%、2.00%、1.75%、1.56%、0.92%、1.34%、0.96%，表明本方法重复性良好。

2.8加样回收率实验精密吸取已知含量的醋白芍：炙甘草(12∶12)水煎液1 mL，平行6份，分别精密加入等量对照品溶液，制备成供试品溶液，按照2.3色谱条件进样，平均回收率为99%，99%，99%，100%，100%，101%，99%，100%，101%。RSD分别为1.28%，1.32%，2.12%，2.4%，1.18%，2.33%，0.89%，0.53%，2.53%。

3　结果

醋白芍、炙甘草及其配伍载体中药效组分含量测定结果分别制备3批次供试品，每批供试品连续进样3次，进样量10 μL，测定峰面积，根据外标法计算各组分含量，结果见表3，表4。

表5　炙甘草及其配伍载体中5种药效组分含量(mg/mL，n=3)

表6　炙甘草及其配伍载体中5种药效组分的比例(n=3)

4　结论

表3可以看出，醋白芍的4种药效组分在醋白芍单味药及其药对中的含量变化规律：醋白芍-炙甘草(1.90±0.09、0.87±0.04、3.30±0.24、0.52±0.01)mg/mL>醋白芍-甘草(1.89±0.11、0.86±0.05、3.25±0.13、0.52±0.03)mg/mL>醋白芍(1.07±0.12、0.36±0.02、2.00±0.21、0.37±0.03)mg/mL，芍药甘草汤药效组分总量变化规律为：醋白芍-炙甘草(6.59±0.42)mg/mL>醋白芍-甘草(6.52±0.32)mg/mL>醋白芍(3.80±0.24)mg/mL。

由表3数据分析可以看出，醋白芍与甘草配伍后，药效组分溶出率显著提高，均高于白芍单味药材的溶出率，且药效组分总量也最高。而甘草经过炮制后，增容作用显著提高，炙甘草对醋白芍药效组分的增溶作用显著高于甘草对醋白芍药效组分的溶出。

由表4可以看出，醋白芍与炙甘草配伍后，汤剂中的药效组分之间的比例也发生变化，药效组分之间的比例关系影响着复方汤剂药效组分的构成，对复方的疗效有重要影响。

表5可以看出，芍药甘草汤中5种药效组分在炙甘草单味药及其药对中的含量变化规律为：炙甘草-醋白芍(8.76±0.35、3.10±0.43、0.79±0.32、0.76±0.34、0.15±0.05、13.56±0.99)mg/mL>炙甘草-炒白芍(6.47±0.33、2.67±0.23、0.56±0.23、0.60±0.23、0.12±0.01、10.42±0.78)mg/mL>炙甘草(6.53±0.25、2.17±0.33、0.52±0.21、0.48±0.23、0.09±0.03、9.79±0.65)mg/mL>炙甘草-焦白芍(5.13±0.32、2.11±0.21、0.47±0.12、0.57±0.22、0.12±0.02、8.40±0.75)mg/mL，药效组分的总量变化规律为：炙甘草-醋白芍(13.56±0.99)mg/mL>炙甘草-炒白芍(10.42±0.78)mg/mL>炙甘草(9.79±0.65)mg/mL>炙甘草-焦白芍(8.40±0.75)mg/mL。

由表5数据分析可以看出，炙甘草与白芍及其炮制品配伍后，炙甘草的药效组分溶出率显著增高，提示:配伍对炙甘草的药效组分具有增容效果。且醋白芍对炙甘草药效组分的增溶作用强于炒白芍，炒白芍对炙甘草药效组分的增容作用强于焦白芍。配伍后，炙甘草的药效组分溶出率呈规律性上升，药效组分的总量变化规律与之一致。

表3、表5可以看出，醋白芍、炙甘草的药效组分与复方药效组分总量变化规律趋势一致。表4、表6可以看出，4种药效组分之间的比例也发生改变，因此，配伍改变了药效组分在复方中的存在状态。配伍后，醋白芍药效组分或炙甘草药效组分的含量明显增加(P<0.05)，原因可能为：甘草中的甘草酸等药效组分与醋白芍中的芍药苷等药效组分相互作用，增加了药效组分的溶解性，甘草经过炮制后化学成分发生变化，增溶效果更明显。

以上研究可以得出结论：配伍使中药中多种药效组分之间发生物理、化学作用，影响或改变了药效组分的物理、化学性质，进而改变了药效组分的溶出，最终改变了药效组分在复方汤剂中存在状态，从而形成了具有不同疗效的复方。中药治疗作用的关键在于药效组分，包括药效组分的组成及各药效组分之间的比例。药效组分的组成不同，疗效也不同；药效组分的组成相同，但比例不同，疗效也不一样。不同组成的药效组分或不同比例的药效组分分别代表不同的中药，具有不同的临床疗效，其根源在于药效组分的不同，药效组分是中药治疗的根本，应加以区分，临床用药应遵循中医传统理论，根据病情转变调整用药比例。因此，对中药药效组分的研究与探讨是解析中药配伍机制的关键。

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(2014-10-06收稿责任编辑：张文婷)

Analysis of Different Active Components in Radix Paeoniae Alba (Stir-baked with Vinegar),Glyycrrhizae Radix Et Rhzoma (Stir-baked with Honey) and their Drug Pairs

Zhu Guangwei1, Zhang Guijun2, Sun Yi1, Wang Meng2, Qu Lei2, Xiang Li2, Wu Yanan2, Yang Yanfan2, Zheng Jing2

(1 Institute of Chinese Materia Medica China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China; 2 SchoolofTraditionalChineseMateria,BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To explore different active chemical components in Radix paeoniae alba (stir-baked with vinegar), Glyycrrhizae radix (stir-baked with honey) and their drug pairs. Methods:Water boiled Radix paeoniae alba, Glyycrrhizae radix respectively and use HCPL method to test their solution. Results:The four active constitutes (Oxypaeoniflorin, Albiflorin, Paeoniflorin, Benzoylpaeoniflorin) were [1.07+0.12, 0.36+0.02, 2.00+0.21, 0.37+0.03] in Radix paeoniae alba(vinegar baked); [1.89+0.11, 0.86+0.05, 3.25+0.13, 0.52+0.03] in Radix Paeoniae alba(vinegar baked)-Glyycrrhizae radix and [1.90+0.09,0.87+0.04,3.30+0.24,0.52+0.01] in Radix paeniae alba-Glyycrrhizae radix(honey-fried); The five active constituents(Glycyrrhizic acid, Liquiritin, Liquiritigenin, Isoliquiritin, Isoliquiritigenin) were[6.53+0.25,2.17+0.33,0.52+0.21,0.48+0.23,0.09+0.03,9.79+0.65] in Glyycrrhizae radix; [5.13+0.32,2.11+0.21,0.47+0.12,0.57+0.22,0.12+0.02,8.40+0.75] in honey-fried Glyycrrhizae radix-focal Radix paeoniae alba; [6.47+0.33,2.67+0.23,0.56+0.23,0.60+0.23, 0.12+0.01, 10.42+0.78] in honey-fried Glyycrrhizae radix-parched Radix paeoniae alba and [8.76+0.35,3.10+0.43,0.79+0.32,0.76+0.34,0.15+0.05,13.56+0.99] in honey-fried Glyycrrhizae radix-vigar baked Radix paeoniae alba. Conclusion:Different combination of herbs changed the physical and chemical nature of the single herb, and thus changed its active components. The crucial point in Chinese medicine decoction lies in different components and their proportion of active components. These could affect the curative effect of decoction. It is of great significance to discriminate different active constitutes in drug pairs as it has distinct clinical effect.

Radix paeoniae alba (stir-baked with vinegar); Glyycrrhizae radix (stir-baked with honey); Carrier of herb combination;Active component; Change regularity

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(编号：ZXKT15037)

朱广伟(1982—)，男，博士研究生，助理研究员，研究方向：中药药效组分评价体系研究、中药药效物质基础研究，E-mail：gwzhu@icmm.ac.cn

张贵君(1954—)，男，博士研究生，教授，博士研究生导师，研究方向：中药鉴定方法学、中药药效组分、中药质量标准化研究，E-mail：guijunzhang@163.com；孙奕，女，博士研究生，副研究员，研究方向：药用植物内生菌的生物活性代谢产物，海洋微生物天然产物，中药化学等，E-mail：ysun@icmm.ac.cn

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.038