“新型鸭瘟”流行病学及病原特性的研究

陆春梅（湛江市动物疫病预防控制中心，广东　湛江　524037）

“新型鸭瘟”流行病学及病原特性的研究

陆春梅
（湛江市动物疫病预防控制中心，广东湛江524037）

鸭瘟是一种严重危害养鸭产业发展的一种传染病，对养鸭产业造成了严重的经济损失。当前很多养鸭地区都出现了与鸭瘟变化类似的疾病，传染较迅速，一旦发病，将会产生很高的致死率。目前生物科学人员将该病定义为“新型鸭瘟”，还没有完善的防治措施，造成的经济损失较大，影响范围较广。基于此，对“新型鸭瘟”的流行病学及病原特性展开研究。

新型鸭瘟；流行病；病原特性

鸭瘟主要侵害雏鸭，常用鸭瘟疫苗不能预防该病的发生，具有传染率高、致死率高等特点，给我国很多养鸭大户造成了很大影响，挫伤了养殖专业户的养鸭积极性。

1“新型鸭瘟”流行病学调查和病理学研究

1.1材料和器材

选择潍坊、临朐、昌乐等地区的发病鸭，然后收集症状明显或濒临死亡的鸭子的食道、脾脏、胰脏等主要内脏部位，选择发生明显病变的部位。

试验试剂主要为甲醛、乙醇、二甲苯、伊红染色液和苏木素染色液；试验仪器为组织切片机、研究显微镜和光学显微镜。

1.2试验方法

了解发病鸭子的种类、发病情况、发病日期和死亡率。利用上述仪器对组织器官病理变化、脑组织和肝脏等进行采集，并分离病原。之后使用福尔马林将收集好的病死鸭的肝脏、胰脏和脑等病变组织进行固定，石蜡切色，使用H.E染色，观察组织学变化［1，2］。

1.3结果与分析

第一，从山东饲养鸭子的种类来看，主要为樱桃谷肉鸭。除了饲养方法操作不当造成雏鸭死亡外，其余表现正常。但在某时期，该区域鸭子均产生了新疫病，使用鸭疫苗注射急性处理没有变化，之后采用血清治疗均未取得进展，产生的经济损失较严重。第二，临床特征主要表现为鸭体温度升高，精神萎靡，食欲减少，饮水量增加；严重鸭静卧地上，眼睑水肿，羽毛湿润；头颈红钻；鼻腔流出灰白色稀粪；肛门处可见换绿色假膜［3］。第三，解剖发现，食道、直肠等消化道被结痂块覆盖；食道黏膜呈黄白色痂块，坏死表面出血，局灶性坏死；排泄黏膜充血，肛周羽毛结块。

2“新型鸭瘟”病原分离鉴定和特性研究

2.1材料、仪器和设备

选择山东省的病死鸭，收集脾脏、肝脏等重要病变组织。试验动物为潍坊的樱桃谷雏鸭、济南鸭胚雏番鸭、泰安的家兔和山东的SPF鸡胚。试剂为氯化钠、氯仿和乙醚等国产分析纯；使用普通琼脂培养基、血琼脂培养基等进行培养；从中国兽医监察所购买鸭瘟毒；自制鸭瘟阳性血清；购买溴脱氧尿核苷；饱和NH4（SO4）2溶液；PBS缓冲剂；油佐剂。试验仪器为数显恒温浴锅、紫外分光光度仪、高速台式离心机和磁力搅拌器、超净工作台、低速离心机和电子天平等。

2.2试验方法

2.2.1分离NDPV病毒。①分离培养细菌。在无菌操作下选取发病鸭的肝、脾等组织，并将其放置在各个培养基中，观察细菌变化，再进行细菌鉴定试验。②处理病料。在无菌环境下对发病鸭的肝脏、脑组织等进行研磨，并将其加入到碱性缓冲液中，冻融后放置在37℃环境下静置0.5h，并进行离心操作，过滤后保存备用。③取出处理好的滤液并接种于番鸭胚，观察接种后的死亡状况；同期将灭菌生理盐水作为对照，观察并计算鸭死亡率。④进行病毒纯化操作。将尿囊液静置离心0.5h，沉淀病毒。⑤病毒电镜的观察。按照实验室观察方法，进行负染电镜观察和超薄切片电镜观察。

2.2.2研究NDPV特性。一方面，从生物学特性进行研究，对不同品种的鸭胚致死率进行分析。将病毒直接接种在樱桃谷鸭胚、北京鸭胚等，记录死亡率。同期设有正常鸭胚，将设生理盐水为对照组。另一方面，理化特性研究：①分离病毒ELD50，按照离心-稀释-接种等操作，观察鸭胚死亡率，使用Reed-Muench计算病毒ELD50；②氯仿敏感试验，取一定病毒液，加入氯仿，离心后进行10倍稀释，将稀释溶液接种给鸭胚，37℃孵育，测定病毒ELD50；③乙醚敏感试验，取一定病毒液加入乙醚，在4℃冰箱中静置1d，然后进行离心并作10倍稀释，接种于鸭胚，计算病毒ELD50；④取病毒液并将其接入无菌抗生素瓶中，将一瓶小品pH调至3.0，第2个小瓶加入生理盐水，室温下放置2h，使用溶液为5.6%的NaHCO3溶液将一瓶pH调至7.2，记录并计算病毒ELD50［4］。

2.2.3测定病毒浓缩和病毒含量。NDPV与DPV提纯方法操作一致，具体如下：①PEG浓缩法，取一定量的病毒液加入PEG和NaCl中，将其pH调至7.2，在4℃冰箱中放置，次日进行离心，使用TE缓冲悬浮，PBS透析；②饱和硫酸铵法，取PEG病毒悬浮液，加入一定的NH4（SO4）2中，浓度调制50%，pH为7.2，在4℃冰箱中过夜，次日离心0.5h，使用PBS透析，TE为缓冲悬浮液，检测BaCl2中硫酸根离子并去除。

2.2.4血清学鉴定。首先，分离病毒株并制备高兔血清溶液，按照常规方法进行粗提取后，如果AGP试验测定血清抗体在1∶64以上，进行心脏采血，分离血清，并标记NDPPS和DPPS。其次，进行抗NDPV高兔血清保护试验。病毒悬液10倍稀释，一列加入等量血清，另一列加入待检验血清，充分混合，在37℃温箱中保存；接种鸭胚记录鸭胚死亡状况，计算待检测血清的中和指数。最后进行血清定性中和试验。将各种鸭胚等量混合，放置在37℃的室内中静置1h，分别尿囊接种12d，设阳性血清和生理压水100ELD50的NDPV为对照度，观察7d。

2.3结果与分析

①细菌分离试验表明各种培养基上无细菌生长。②病毒分析培养显示，接种后鸭胚3～7d死亡，死亡率高达100%。将死胎放置过夜发现，死亡胚胎呈现淡黄绿色，出现血点，部分水肿。肝出血严重，其余器官出现不同程度的出血，胚体变化不明显。③电镜观察发现出现不同形态的病毒粒子。绒毛尿囊切片可观察到带囊膜的病毒粒子，体内含有大量分散病毒。肝脏超薄切片内部无明显变化，肝细胞分解或消失。④NDPV禽胚致死率试验发现，病毒液对樱桃谷鸭胚致死率可以达到100%，其他鸭胚致死率不高。致死的禽胚主要表现为水肿、肝、肾出血。病毒对不同禽胚的致死率如图1所示。⑤NDPV血凝活性测定表示，NDPV无血凝活性，不凝集鸡、鸭、猪等细胞。⑥理化性研究发现，病毒对乙醚、氯仿等无抵抗力，对酸和碱处理较敏感，在56℃下可让病毒灭活。⑦血清学试验测试显示，该病毒可以被鸭瘟阳性血清中和，测定该病毒ELD50为10～3.46/0.2mL。⑧该病与鸭瘟在临床和剖检方面存在很多相似处，可以将其认为疱疹病毒成员。

图1　不同禽胚对病毒液的致死率比较

3　结语

通过对“新型鸭瘟”流行病学及病原特性进行研究，经过相关诊断和剖析检查发现，该病常发于樱桃谷鸭，而且经常发作于雏鸭。临床上主要表现为流血、水肿、消瘦等，病理学检查肝脏等器官会出现明显出血和细胞死亡。从病死鸭体分离出1株病毒，病毒呈现圆球形态，不耐酸、不耐热，对氯仿和乙醚较敏感。本次在排除其他病原后，判断出该种病为新型鸭瘟病毒。

［1］何海蓉，季明，朱国强.雏番鸭细小病毒琼扩抗原研制及初步应用［J］.中国预防兽医学报，2014（5）：59-60.

［2］汪铭书，程安春，周毅.雏鹅新型病毒性肠炎病毒的提纯和核酸链型及结构蛋白分析［J］.畜牧兽医学报，2014（2）：276-279.

［3］祁保民.鸭病毒性肝炎的病理形态学观察［J］.福建农业大学学报，2014（3）：350-352.

［4］谢芝勋.用聚合酶链反应检测鸭瘟病毒的研究［J］.中国兽药杂志，2016（3）：10-12.

S858.32

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1674-7909（2016）08-36-2

陆春梅（1980-），女，大专，助理兽医师，研究方向：兽医治疗。