RP睭PLC睤AD法对银杏叶胶囊质量监控研究

杨兴变 李洪庆

摘要[目的]利用色谱指纹图谱技术建立银杏叶胶囊质量监控方法。[方法]采用 RPHPLCDAD方法和中药色谱指纹图谱相似度软件对银杏叶胶囊进行了质量监控研究。色谱柱为InertsilRODS3 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.4%磷酸水（A）-乙腈（B）系统，梯度洗脱；流速为1.00 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为360 nm。[结果]银杏叶胶囊与对照品全峰匹配，其相似度为0.901～0.933。[结论]该方法操作简便、稳定、重复性好，为银杏叶胶囊质量控制提供实践依据及有效方法。

关键词银杏胶囊；质量监控；色谱指纹图谱

中图分类号S789.4；R917文献标识码A文章编号0517-6611（2016）04-197-02

Study on Quality Control for the Ginkgo Leaf Capsule by RPHPLCDAD Method

YANG Xingbian， LI Hongqing*（Center of Biochemical Engineering in Guizhou Province， Guizhou University， Guiyang， Guizhou 550025）

Abstract[Objective] To establish the quality control method for the ginkgo leaf capsules by chromatographic fingerprint. [Method] RPHPLCDAD method and the similarity evaluation system of traditional Chinese medicine chromatographic fingerprint were used to analyze the qualities of the ginkgo leaf capsules. A InertsilR ODS3 C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used as analysis column and 0.4% phosphoric acid solution （A） / acetonitrile （B） as mobile phase at the flow rate of 1.00 mL/min with gradient elution. The column temperature was 30 ℃ and detecting wavelength was 360 nm. [Result] Compared with the reference substance， the similarities of the ginkgo leaf capsules were from 0.901 to 0.933. [Conclusion] The method is proved convenient， stable and repeatable， the study can provide practical basis and effective method for the quality control of the ginkgo leaf capsule.

Key wordsGinkgo leaf capsules； Quality control； Chromatographic fingerprint

2015年版《中国药典》记载银杏叶胶囊有3种规格：①每粒含总黄酮苷9.6 mg，萜类内酯2.4 mg；②每粒含总黄酮苷19.2 mg，萜类内酯4.8 mg；③每粒装0.25 g（含总黄酮醇苷40 mg、萜类内酯10 mg）[1]。这3种规格均仅规定了银杏叶胶囊有效成分总量，利用这种仅规定总含量的西药化学药品质量控制方式来对其进行质量评价，难以避免个别厂商人为地在产品中掺入槲皮素、山奈素等以提高总黄酮含量的不良行为，而此类劣质产品利用这种质量控制方式进行质量评价，是难以判定其优劣的。

目前，中药指纹图谱已成为国际上公认的中药质量控制最有效的模式[2-3]，其具有整体性、模糊性等特点，可以鉴别产品真伪，评判制备工艺的合理性，能有效地对中药进行整体性描述，达到控制产品质量的目的[4-5]。经文献查阅，关于银杏叶、银杏叶提取物及银杏注射液指纹图谱研究的报道很多[6-9]，但银杏叶胶囊及其相关的指纹图谱的研究未见报道。因此，笔者利用色谱指纹图谱技术对以注射剂用银杏叶提取物为原料制成的银杏叶胶囊进行了质量监控研究，为银杏叶胶囊质量控制提供实践依据，也为有力地打击个别厂商人为添加的不良行为提供行之有效的方法。

1材料与方法

1.1主要仪器岛津高效液相色谱仪（LC20AT二元泵、手动进样器、SPDM20A二极管阵列检测器、CTO10AS柱温箱、LC solution工作站，日本岛津公司）；InertsilRODS3C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；超声仪（SG1200HE，上海冠特超声仪器有限公司）；电子天平（AL204IC，上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；SZ93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；一次性针头滤器（0.45 μm）；一次性使用无菌注射器等。

1.2主要试剂色谱纯乙腈（TEDIA company）；分析纯磷酸（天津市富宇精细化工有限公司）；双蒸水（自制）。

1.3原材料制备

1.3.1对照品溶液的制备。精密称取0.020 0 g银杏叶提取物（中国药品生物制品鉴定所提供，编号110866-200202），10 mL 15%乙腈溶解，超声3 min，静置10 min，0.45 μm微孔濾膜过滤，即得。

1.3.2供试品溶液的制备。注射剂用银杏叶提取物，其制备同“1.3.1”。银杏叶胶囊，精密称取银杏叶胶囊内容物，称取量按其内容物所含注射剂用银杏叶提取物0.020 0 g换算，其制备同“1.3.1”。

1.4试验方法

1.4.1色谱条件。色谱柱为InertsilRODS-3C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长360 nm；流动相为0.4%磷酸水（A）-乙腈（B）；进样量10 μL；柱温30 ℃；流速1.00 mL/min；梯度洗脱[10-11]，即流动相B的变化为0～4 min，15%～17%；4～20 min，17%；20～25 min，17%～21%；25～33 min，21%～22%；33～35 min，22%～26%；35～40 min，26%～30%；40～55 min，30%～35%；55～58 min，35%。

1.4.2方法学考察。

1.4.2.1精密度试验。取对照品溶液，连续进样6次，记录各色谱图，将数据导入中药色谱指纹图谱相似度计算软件，进行相似度分析。

1.4.2.2重现性试验。精密称取对照品6份，按“1.3.1”方法制备及“1.4.1”色谱条件分析，记录各色谱图，将数据导入中药色谱指纹图谱相似度计算软件，进行相似度分析。

1.4.2.3稳定性试验。取对照品溶液，分别于配制后0、4、8、16、24、48 h进样，记录各色谱图，将数据导入中药色谱指纹图谱相似度计算软件，进行相似度分析。

1.4.3样品测定。将供试品按“1.3.2”方法制备，按“1.4.1”色谱条件分析，记录0～58 min色谱图，将数据导入中药色谱指纹图谱相似度计算软件，进行相似度分析。

2结果与分析

2.1方法学考察

2.1.1精密度试验。测得各色谱图全峰匹配相似度均为1.000，表明仪器精密度较好。

2.1.2重现性试验。测得各色谱图全峰匹配相似度的RSD=0.19%，说明该法重现性较好。

2.1.3稳定性试验。测得各时间点色谱图全峰匹配相似度的RSD=0.21%，说明对照品溶液在48 h内稳定。

2.1.4对照品指纹图谱。由图1可知，在“1.4.1”色谱条件下，分析时间为58 min，基线平稳，分离度良好。

2.2银杏叶胶囊测试由表1可知，注射剂用银杏叶提取物及银杏叶胶囊与对照品全峰匹配，其相似度分别为0.906～图1对照品银杏叶提取物指纹图谱（S1）

Fig.1Fingerprint of reference ginkgo leaf extracts（S1）0.940、0.901～0.933。与对照品相比，注射剂用银杏叶提取物总峰面积大，非共有峰面积比例小，这是注射剂用银杏叶提取物是由银杏叶提取物精制而成的结果；注射剂用银杏叶提取物制成胶囊以后，相似度、总峰面积及非共有峰比例均有略微的下降，这可能是添加辅料的缘故。由图2可知，注射剂用银杏叶提取物和银杏叶胶囊与对照品相比较，主要差别在于0～15 min，此时段出峰多，且峰面积相对较大，而50～55 min峰面积相对较小，这可能是它们水溶性更好的原因。

3结论与讨论

在供试品总黄酮苷、萜类内酯及总银杏酸含量等均符合2015年版《中国药典》银杏叶提取物要求的基础上[1]，该研究利用色谱指纹图谱技术对以注射剂用银杏叶提取物为原料制成的银杏叶胶囊进行了质量监控研究，建立了一个以银杏叶提取物为对照，对原料及其产品进行监控的指纹图谱质量控制方法，该方法操作简便、稳定、重复性好，能很好地表征银杏叶胶囊的内在质量。研究结果可显示出原料到产品在成分、组成比例上是否一致，可以有效地避免人为添加的弊端，并能实时掌握生产过程动态变化，确保产品质量的稳定，为其质量控制提供实践依据。

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