胃癌组织中肌动蛋白样-6a表达及其与临床病理特征和预后的关系

邱会，胡敏，钟敏钰

(1华中科技大学附属武汉市第一医院，武汉430022；2华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院)



胃癌组织中肌动蛋白样-6a表达及其与临床病理特征和预后的关系

邱会1，胡敏2，钟敏钰1

(1华中科技大学附属武汉市第一医院，武汉430022；2华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院)

目的观察肌动蛋白样-6a(ACTL6A)在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集手术切除的胃癌及对应癌旁组织共152例，采用qRT-PCR、Western blot法分别检测ACTL6A mRNA及蛋白，分析ACTL6A表达与胃癌患者临床病理特征的关系，采用Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线分析ACTL6A表达与胃癌患者无瘤生存期(DFS)、总生存期(OS)的关系。结果 胃癌组织中ACTL6A mRNA和蛋白表达水平均高于对应癌旁组织(P均<0.05)，ACTL6A mRNA表达与胃癌分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移均有关(P均<0.05)；高表达ACTL6A mRNA的胃癌患者DFS为(12.3±1.5)个月、OS为(19.2±2.5)个月，均显著低于ACTL6A mRNA低表达者的(17.4±1.2)个月、(25.6±2.6)个月，P均<0.05；Cox分析显示，ACTL6A mRNA高表达是胃癌患者DFS及OS的独立危险因素(P均<0.05)。结论 ACTL6A在胃癌组织中高表达，并与胃癌的恶性表型有关，可作为判断胃癌患者肿瘤复发及预后评价的重要指标。

胃癌；肌动蛋白样-6a；临床病理特征；预后

胃癌是世界范围内最常见恶性肿瘤之一，在亚洲尤为普遍[1,2]。早期胃癌患者经手术治疗后能获得较好的预后，但中晚期胃癌患者由于肿瘤转移或化疗耐药等原因导致其病死率仍较高[3, 4]。目前，导致胃癌发生的具体分子机制仍不清楚。因此，研究胃癌发病机制、寻找新的诊断及预后评价指标，对指导胃癌患者的治疗和改善患者预后具有重要意义。肌动蛋白样-6a(ACTL6A)又名BAF53A，是ATP依赖性SWI/SNF样BAF染色质重塑复合物的重要成员，在哺乳动物中编码一个53 kD的亚基[5]。以往研究显示，ACTL6A在细胞内的功能涉及多个生理过程，包括基因的转录调控、染色质重塑以及核转位等[6]。近年来有研究发现，ACTL6A在原肠胚形成过程中参与调控神经祖细胞的增殖、分化以及迁移[7, 8]。目前，ACTL6A在人类恶性肿瘤中的作用研究较少。最近的一项研究发现，ACTL6A高表达于人肝癌组织中，并与肝癌患者的生存预后显著相关，过表达ACTL6A能够通过调控细胞的上皮间质转换促进肝癌细胞迁袭转移[9]。以上研究结果提示，ACTL6A在肿瘤中具有重要功能，但ACTL6A在胃癌中的表达情况及其临床意义尚未见报道。本研究在胃癌及对应癌旁组织中检测了ACTL6A的表达情况，分析其与胃癌临床病理特征的关系及对胃癌患者预后的影响,为阐明ACTL6A在胃癌中的作用和寻找新的作用靶点提供理论基础。

1　资料与方法

1.1临床资料收集2006年1月～2011年12月于我院行手术切除治疗并具有完整随访资料的胃癌及对应癌旁组织病理标本152例，每例样本均经病理确诊。所有病例的复发时间及总生存时间均通过术后电话随访获得，时间截止2015年7月，无失访病例。死亡123例、存活29例，无瘤生存期(DFS)为(18.5±2.1)个月、总生存期(OS)为(22.3±3.4)个月。胃癌组织及对应癌旁组织标本经手术切除后迅速进行多点取材，分块置于液氮冻存或4%多聚甲醛固定并石蜡包埋保存备用。

1.2主要试剂总RNA提取试剂TRIzol、反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒SYBR prime script均购自Takara公司；RIPA裂解液购于上海碧云天生物技术有限公司；ACTL6A和GAPDH 基因引物由深圳华大基因生物科技有限公司合成；小鼠抗人ACTL6A单克隆一抗抗体和辣根过氧化物酶标记兔抗小鼠二抗均购自美国CST公司。

1.3ACTL6A蛋白检测采用Western blot法。从冻存组织样本用RIPA裂解液提取样本总蛋白，分别取相同质量的蛋白样品上样10%SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜；经5%脱脂奶粉室温封闭1.5 h，4 ℃孵育ACTL6A(1∶1 000)一抗以及GAPDH(1∶1 000)一抗过夜；TBST洗膜3次，室温孵育辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶1 000)1.5 h；TBST洗膜3次，用ECL显影，以目的条带与内参CAPDH的光密度比值表示目的蛋白表达量。

1.4ACTL6A mRNA检测采用qRT-PCR法。将液氮冻存的胃癌组织及癌旁组织标本于预冷研钵中迅速研碎，加入1 mL TRIzol提取试剂提取总RNA，取1 μg总mRNA按照cDNA反转录说明书反转成cDNA。引物序列：ACTL6A上游引物5′-GTCAAAAACAAGGGCTCCAA-3′，下游引物5′-AGTCACTTCGCCAGTTAGCC-3′；GAPDH上游引物5′-TATGCTCTCCTCATGCATTG -3′，下游引物5′-GGGACGACCTTCGATCTACC-3′。按qRT-PCR说明书配制反应体系进行PCR扩增反应。以GAPDH基因为内参，采用2-ΔΔCt法计算ACTL6A mRNA相对表达量。将所有胃癌组织标本中的ACTL6A表达量取平均值，大于平均值为ACTL6A高表达，小于平均值为ACTL6A低表达。

2　结果

2.1ACTL6A蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达胃癌组织中ACTL6A蛋白表达量(5.37±0.32)高于癌旁组织(1.79±0.19)，P<0.05。

2.2 ACTL6A mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达胃癌组织中ACTL6A mRNA相对表达量(4.7±1.34)高于癌旁组织(1.8±0.52)，P<0.01。152例胃癌患者中，ACTL6A mRNA高表达110例、低表达42例。

2.3ACTL6A mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系ACTL6A mRNA表达与胃癌的分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移均有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄及肿瘤远处转移均无关(P均>0.05)。见表1。

2.4ACTL6A mRNA表达与胃癌患者预后的关系胃癌患者中，ACTL6A mRNA高表达者DFS为(12.3±1.5)个月、OS为(19.2±2.5)个月，均显著低于ACTL6A低表达者的(17.4±1.2)个月、(25.6±2.6)个月，P均<0.05。COX回归模型分析显示，ACTL6A mRNA高表达是判断胃癌患者DFS及OS的独立危险因素。见表2、表3。

表1　　　　ACTL6A mRNA表达与胃癌临床病理特征的关系(例)

表2　影响胃癌患者DFS及OS相关因素的单因素分析

注：HR为相对风险比；95%CI为95%可信区间。

表3　影响胃癌患者DFS及OS相关因素的多因素分析

注：HR为相对风险比；95%CI为95%可信区间。

3　讨论

本研究发现，ACTL6A蛋白在胃癌组织中的表达显著高于对应的癌旁组织，ACTL6A mRNA高表达的胃癌患者与其恶性的临床表型有关，且ACTL6A mRNA高表达可作为预测胃癌患者预后的独立危险因素。

SWI/SNF家族是研究非常广泛的染色质重塑复合体，包括多达12个组份，在哺乳动物发育过程中起着重要的调控作用。其中，高度保守的关键复合体BAF复合体在不同的时间、空间内特定的组织特异表达来维持生物的发育和分化[10～13]。有研究发现，BAF53B能够招募BAF复合体结合到基因的启动子区域从而促进基因的表达[14]。目前，对ACTL6A(BAF53A)的功能也有相关报道。例如：在造血系统中，ACTL6A mRNA高表达于造血干细胞和祖细胞，而在成熟的骨髓细胞里面其表达显著下降，提示ACTL6A在维持造血干细胞和祖细胞的干性方面发挥重要作用[6,15]。

目前，关于ACTL6A在人类肿瘤中的作用报道相对较少。Taulli等[15]研究发现，ACTL6A在原发性横纹肌瘤组织的表达显著高于正常肌肉组织，持续的ACTL6A表达能够影响肌细胞的分化，沉默ACTL6A的表达能抑制肿瘤生长，提示ACTL6A能够作为治疗肿瘤的新靶点。本研究也发现，在胃癌组织中ACTL6A mRNA和蛋白表达量显著高于对应的癌旁组织，与以前的报道一致。Xiao等[9]在肝癌中的最新发现表明，ACTL6A在肝癌的转移和促进上皮间质转化方面发挥重要作用，ACTL6A高表达于肝癌细胞系和肝癌组织，临床病理分析发现高水平的ACTL6A与恶性临床参数显著相关，并在肝癌患者中作为评估OFS、OS的独立危险因素。本研究分析发现，ACTL6A mRNA表达与胃癌患者的恶性病理特征如肿瘤大小、临床分期、病理分期及淋巴结转移均有关，ACTL6A mRNA高表达的胃癌患者其DFS及OS均显著缩短，多因素分析发现ACTL6A mRNA高表达可作为评估胃癌患者预后的独立危险因素。以上结果提示，ACTL6A在胃癌的发生发展中具有重要作用，其表达水平可以作为判断胃癌患者复发及预后的重要指标。本研究发现，ACTL6A几乎完全表达于细胞核，这与过去报道的发挥染色质重塑的作用密切相关，结合临床病理分析发现其高表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移等恶性参数相关。我们推测，ACTL6A在细胞核内起着致癌基因转录调控的功能，但其具体功能和机制有待进一步实验证明。

综上所述，ACTL6A高表达于胃癌组织，高水平ACTL6A与胃癌恶性临床病理特征及患者不良预后密切相关。ACTL6A表达可作为判断胃癌患者术后复发和不良预后的重要指标，对其作用及机制的深入研究将有助于提高胃癌诊治水平和发现新的治疗靶点。

[1] Ferlay J, Shin HR, Bray F, et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008[J]. Int J Cancer, 2010,127(12):2893-2917.

[2] Brenkman HJ, Haverkamp L, Ruurda JP, et al. Worldwide practice in gastric cancer surgery[J]. World J Gastroenterol, 2016,22(15):4041-4048.

[3] Uedo N, Iishi H, Tatsuta M, et al. Longterm outcomes after endoscopic mucosal resection for early gastric cancer[J]. Gastric Cancer, 2006,9(2):88-92.

[4] Brower V. Apatinib in treatment of refractory gastric cancer[J]. Lancet Oncol, 2016.[Epub ahead of print]

[5] Bao X, Tang J, Lopez-Pajares V,et al. ACTL6a enforces the epidermal progenitor state by suppressing SWI/SNF-dependent induction of KLF4[J]. Cell Stem Cell, 2013,12(2):193-203.

[6] Krasteva V, Buscarlet M, Diaz-Tellez A, et al. The BAF53a subunit of SWI/SNF-like BAF complexes is essential for hemopoietic stem cell function[J]. Blood, 2012,120(24):4720-4732.

[7] Ronan JL, Wu W, Crabtree GR. From neural development to cognition: unexpected roles for chromatin[J]. Nat Rev Genet, 2013,14(5):347-359.

[8] Lessard J, Wu JI, Ranish JA, et al. An essential switch in subunit composition of a chromatin remodeling complex during neural development[J]. Neuron, 2007,55(2):201-215.

[9] Xiao S, Chang RM, Yang MY, et al. Actin-like 6A predicts poor prognosis of hepatocellular carcinoma and promotes metastasis and epithelial-mesenchymal transition[J]. Hepatology, 2016,63(4):1256-1271.

[10] Ho L, Crabtree GR. Chromatin remodelling during development[J]. Nature, 2010,463(7280):474-484.

[11] Borg M, Berger F. Chromatin remodelling during male gametophyte development[J]. Plant J, 2015,83(1):177-188.

[12] Son EY, Crabtree GR. The role of BAF (mSWI/SNF) complexes in mammalian neural development[J]. Am J Med Genet C Semin Med Genet, 2014,166C(3):333-349.

[13] Yoo AS, Sun AX, Li L, et al. MicroRNA-mediated conversion of human fibroblasts to neurons[J]. Nature, 2011,476(7359):228-231.

[14] Wu JI, Lessard J, Olave IA, et al. Regulation of dendritic development by neuron-specific chromatin remodeling complexes[J]. Neuron, 2007,56(1):94-108.

[15] Taulli R, Foglizzo V, Morena D, et al. Failure to downregulate the BAF53a subunit of the SWI/SNF chromatin remodeling complex contributes to the differentiation block in rhabdomyosarcoma[J]. Oncogene, 2014,33(18):2354-2362.

湖北省武汉市卫计委临床医学科研项目(WZ13Z03)。

钟敏钰(E-mail： 93901226@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.34.011

R735.2

B

1002-266X(2016)34-0030-03

2016-03-23)